日本同仁化学Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒| DOJINDO

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Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光,防潮
运输条件:室温

特点:

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

产品文献

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Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

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试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
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试剂盒内含

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成,而且还作为神经递质发挥重要作用,谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道,胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能,而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡,近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量,谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

       本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

操作步骤

 只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中,加入试剂后孵育即可。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

实验例

标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白,抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡,即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中,确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示,通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少,抑制胱氨酸的摄取,从而导致谷胱甘肽的量减少。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例:

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后,确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示,SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少,细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

<使用产品>

· 细胞内GSH:GSSG/GSH Quantification Kit II(货号:G263)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ROS:ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-(货号:R252)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ATP:ATP Assay Kit-Luminescence(货号:A550)

· 细胞内α-KG:α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric(货号:K261)

<实验条件>

细胞:A549细胞 (1 x 106 cells)  药物处理时间:48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量是多少?
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。

※Working solution配制后,避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下,溶液的颜色会变成褐色。

Q3:是否可以定量D-Glutamate?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamate定量,无法定量D-Glutamate。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

 

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

日本同仁化学Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒| DOJINDO

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Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256
乳酸检测试剂盒
Lactate Assay Kit-WST
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储存条件:0-5度保存,避光
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特点:

 

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 操作简便

● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸

● 试剂稳定性高

● 享有显色底物WST专利

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葡萄糖乳酸检测

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代谢检测方案

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

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试剂盒内含
概述
原理
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乳酸标准曲线
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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测   

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试剂盒内含

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

概述

乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物,也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明,乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。

Lactate Assay Kit-WST®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸,并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量,可用96孔板检测,灵敏度高,最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。

WST®:WST是日本同仁化学研究所的注册商标

原理

本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。

另外,试剂盒中含有乳酸标准液,可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

特点

特点1:操作简单,只需要加入试剂

只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂,培养即可。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

特点2:试剂稳定性高

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

乳酸标准曲线

可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。

当乳酸浓度在1 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

实验例

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用 

1、在96孔板中接种1×104个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素),在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。

2、去除上清液后,在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。

3、在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。

4、培养后,吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中,并用超纯水稀释8倍制备样品溶液,然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。

5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。

6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。

7、在每孔中加入80 µl工作液。

8、在37℃培养箱中培养30 min。

9、用酶标仪测定450 nm的吸光度,并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用,随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加,乳酸浓度逐渐减少

葡萄糖和乳酸的测定例

用葡萄糖测定试剂盒(货号:G264)和乳酸测定试剂盒检测(货号:L256):检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。

 

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

■实验条件

细胞:Jurkat细胞(5×105细胞)

药物:Phloretin(终浓度:100 µmol/l)

培养时间:过夜培养

■结果

Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取,减少了葡萄糖的消耗,增加了培养基中葡萄糖的量,并减少了乳酸的量。

常见问题Q&A

Q:使用含有血清的培养基,可以测定培养上清液中的乳酸吗?
A:使用含有血清的培养基,可以测定培养上清液中的乳酸。
但是在含有血清的情况下,由于背景上升,需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。
【参考数据】
含和不含10%FBS的吸光度比较

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

<结果>
在培养基中加入10%FBS的组吸光度大大升高,因此需要测定培养基作为背景对照。

Q:如何检测细胞内乳酸含量?
(1)用微量管收集1×105的细胞*1

(2)以300×g离心2 min后去除上清液。

(3)加入300 μl的PBS,用移液器吹打使其重悬,再以300×g离心2 min后去除上清液。
(4)加入300 μl细胞裂解液*2(0.1%Triton-X)并涡旋1 min,制成细胞裂解液。

(5)以8000×g离心5 min,收集上清液。
(6)将步骤(5)所得溶液用超滤离心管(PALL,No.OD010C3,滤膜分子量:10K)以12,000×g 离心10 min*3去除蛋白质,得到待测样品。

*1、样品为HeLa细胞时,为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量,需要1×105的细胞甚至更多。
*2、如果细胞裂解液中含有SDS会抑制显色,因此不要使用含有SDS的缓冲液。

*3、内源性乳酸脱氢酶(LDH)会导致背景增高,因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶

(LDH)。
※测定样品设定为3个复孔时(n=3),合计至少需要60 μl以上(每孔20 μl×3)。
※如果过滤后滤液不足60 μl,可适当延长过滤时间。
※稀释细胞裂解液至合适的浓度,使结果在标准曲线范围内(0-1 mmol/l)。

Q:配制后的Working   Solution稳定性如何,可以保存多久?
A:Working Solution需要现配现用。
光会影响Working Solution的稳定性,所以配制后请用铝箔纸包裹。
配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。
(Working Solution遇到光,溶液的颜色会由红色变为橙色,背景会升高。)
Q:为什么我的样品孔没有显色?
A:样品中的乳酸浓度可能低于检测限(0.02 mmol/l)。
乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测,因此请考虑其他方法,如LC-MS。
如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。
请降低稀释比例,从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。
Q:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量乳酸浓度。
实验中如遇到以上情况,可以设定药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂),
并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。
Q:该试剂盒可以定量D-Lactate吗?
A:该试剂盒是用于L-Lactate的定量,不能定量D-Lactate。
Q:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A:也可以使用490 nm的滤光片, 但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。
Q:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A:制备标准曲线和样品(n=3)时,可以检测的样品数量如下所示。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

标准曲线:8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号:L256 乳酸检测试剂盒

96孔板排列示意图(n=3)

参考文献

编号 文献名 年分 IF
1 Hypoxia-induced   exosomal circPDK1 promotes pancreatic cancer glycolysis via c-myc activation   by modulating miR-628-3p/BPTF axis and degrading BIN1 2022 23.2
2 Serine   racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from   serine 2020 19.9
3 YAP   mediates compensatory cardiac hypertrophy through
aerobic glycolysis in response to pressure overload
2022 19.5
4 Serine   racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from   serine,
Nature Metabolism,2020, 2,81–96
2020 13.5
5 Polymer-conjugated   glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and   simultaneous inhibition of glycolysis, Biomaterials,2021, 269:120631 2020 12.8
6 Metabolome   Analysis Reveals Excessive Glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK   Signaling in Methotrexate-Resistant Primary CNS Lymphoma-Derived Cells,   Clinical Cancer Research,2020, 26(11):2754-2766 2020 11.2
7 Inhibition   of glycolytic activator PFKFB3 suppresses tumor growth and induces tumor   vessel normalization in hepatocellular carcinoma 2021 9.8
8 Epigenetic silencing   of LncRNA LINC00261 promotes c-myc-mediated aerobic glycolysis by regulating   miR-222-3p/HIPK2/ERK axis and sequestering IGF2BP1 2021 8.8
9 PLEKHA5   regulates the survival and peritoneal dissemination of diffuse-type gastric   carcinoma cells with Met gene amplification, Oncogenesis,2021, 10(3):25 2021 7.5
10 An iPSC-based neural   model of sialidosis uncovers glycolytic impairment-causing presynaptic   dysfunction and deregulation of Ca2+ dynamics 2021 7.1
11 Tumor   cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for   glycolytic metabolism in lung cancer cells,Cancer Science,2020,   111(4):1241-1253 2020 6.7
12 Tumor cell-derived   angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic   metabolism in lung cancer cells 2020 6.5
13 Sodium-Glucose   Co-Transporter 2 Inhibitors Correct Metabolic Maladaptation of Proximal   Tubular Epithelial Cells in High-Glucose Conditions 2020 6.2
14 Metabolites Produced   by a New Lactiplantibacillus plantarum Strain BF1-13 Isolated from Deep   Seawater of Izu-Akazawa Protect the Intestinal Epithelial Barrier from the   Dysfunction Induced by Hydrogen Peroxide 2022 6.1
15 MicroRNA-505,   Suppressed by Oncogenic Long Non-coding RNA LINC01448, Acts as a Novel   Suppressor of Glycolysis and Tumor Progression Through Inhibiting HK2   Expression in Pancreatic Cancer 2021 6.1
16 Matrine   Promotes Human Myeloid Leukemia Cells Apoptosis Through Warburg Effect   Mediated by Hexokinase 2, Frontiers in Pharmacology,2019, 10:1069 2019 5.8
17 Mutant KRAS drives   metabolic reprogramming and autophagic flux in premalignant pancreatic cells 2021 5.8
18 Long Non-Coding RNA   TMPO-AS1 Promotes GLUT1-Mediated Glycolysis and Paclitaxel Resistance in   Endometrial Cancer Cells by Interacting With miR-140 and miR-143 2022 5.7
19 Circ_0002111/miR-134-5p/FSTL1   signal axis regulates tumor progression and glycolytic metabolism in   papillary thyroid carcinoma cells 2022 5.5
20 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells,   Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
21 Metabolic changes in   synovial cells in early inflammation: Involvement of CREB phosphorylation in   the anti-inflammatory effect of 2-deoxyglucose 2021 4.1
22 Novel   pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib   on the lactate dehydrogenase pathway, Biochemical and Biophysical Research   Communications,2019, 510(4):501-507 2019 3.6
23 Neopetrosidines   A–D, pyridine alkaloids isolated from the marine sponge
Neopetrosia chaliniformis and their cell cycle elongation activity
2021 3.5
24 Novel pharmacological   effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate   dehydrogenase pathway 2019 3.3
25 Circ_0000442   functions as a tumor repressor in breast cancer by impacting miR-1229-3p and   upregulating ZBTB1 2020 2.5
26 Suppressive Effects   of Anisomycin on the Proliferation of B16 Mouse Melanoma Cells In Vitro 2021 2.1
27 Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration 2023 15.1
28 Arresting calcium-regulated sperm metabolic dynamics enables prolonged fertility in poultry liquid semen storage 2023 4.6
29 Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment 2023 6.6

日本同仁化学Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264| DOJINDO

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Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264
葡萄糖检测试剂盒
Glucose Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光防潮
运输条件:室温

特点:

 

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

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葡萄糖乳酸检测

选择规格:
50 tests
200 tests

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代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264
Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

产品解说
活动进行中
试剂盒内含
概述
原理
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Lactate Assay Kit-WST     乳酸检测

NO.2.    Glucose Uptake Probe-Green    葡萄糖摄取检测

NO.3.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测  

NO.4.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测

NO.5.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

 

试剂盒内含

50 tests 200 tests
Dye Mixture ×1 ×1
葡萄糖标准品(10 mmol/l)(红盖) 150 μl×1 600 μl×1
酶(绿盖) ×1 ×1
Assay Buffer 3.5 ml×1 14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖) 350 μl×1 1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质,也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标,在癌症研究中,也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明,抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性,可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒(Glucose Assay Kit-WST)可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖,通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖,适合用96孔板检测,可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液的葡萄糖的含量,通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外,试剂盒里有葡萄糖标准液,可以制作标准曲线,测定样品中的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

*要测定细胞上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml,在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液,在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中,在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中,用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度,根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实,细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1:是否可以检测2-Deoxy-D-glucose?
A1:可以检测2-Deoxy-D-glucose。
Q2:Working Solution的稳定性如何?
A2:Working   Solution无法保存,请现配现用。由于对光不稳定,因此配制后请避光,在室温和避光条件下可保存4小时(当Working   Solution在曝光下,溶液颜色会由红色变为橙色,背景升高)。
Q3:当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测?
A3:如果样品中含有还原性的物质,则也会和WST染料发生显色,此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况,可以设定药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)作为背景对照,并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。
Q4:是否有检测细胞上清液以外的实验例?
A4:有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情,请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。
Q5:是否可以检测细胞内葡萄糖?
A5:细胞内葡萄糖也可以检测,请参考下面的样品制备步骤。
 

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜(分子量:10KD )」

(1)将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数,需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
(2)在300×g下离心5分钟,去除上清液。
(3)加入300 µl PBS,重悬细胞,在300×g下离心5分钟,除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液*2(0.1%Triton-X),裂解细胞后,在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量:10K)中,以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时,总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时,请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书,测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内,请适当用细胞溶解液稀释,用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖,HepG2细胞数量为1×105cells以上,Jurket细胞需要2×106 cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色,因此不能使用含有SDS的缓冲液。

 

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A6:制备标准曲线和样品(n=3)时,可以检测的样品数量如下所示。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

标准曲线:8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号:G264

96孔板排列示意图(n=3)

Q7:可以测量L-Glucose吗?
A7:本产品用于β-D-Glucose测量,不能测量L-Glucose。

参考文献

No 检测对象 文献
1 小鼠血清 Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB   J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2 链霉菌 Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3 HCT116细胞 Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4 P388白血病细胞 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5 小鼠精子细胞 Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation,   capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi:   10.1007/s00018-020-03683-9

 

*要测定细胞培养上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。

日本同仁化学Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269| DOJINDO

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Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269
谷氨酸的定量检测试剂盒
Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格:
1set

现货

 

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

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试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glutamine Assay Kit-WST    谷氨酰胺的定量检测

NO.3.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

试剂盒内含

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成,而且还作为神经递质发挥重要作用,谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道,胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能,而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡,近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量,谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

操作步骤

只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中,加入试剂后孵育即可。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

实验例

标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白,抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡,即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中,确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示,通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少,抑制胱氨酸的摄取,从而导致谷胱甘肽的量减少。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例:

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后,确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示,SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少,细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

<使用产品>

· 细胞内GSH:GSSG/GSH Quantification Kit II(货号:G263)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ROS:ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-(货号:R252)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ATP:ATP Assay Kit-Luminescence(货号:A550)

· 细胞内α-KG:α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric(货号:K261)

<实验条件>

细胞:A549细胞 (1 x 106 cells)  药物处理时间:48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量是多少?
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。

※Working solution配制后,避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下,溶液的颜色会变成褐色。

Q3:是否可以定量D-Glutamate?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamate定量,无法定量D-Glutamate。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

 

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

日本同仁化学Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268| DOJINDO

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Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268
谷氨酰胺定量检测试剂盒
Glutamine Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光防潮
运输条件:室温

特点:

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

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原理
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

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试剂盒内含

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源,并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中,谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成,而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量,可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液,并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)=(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

实验例

标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

 

*当n=3时,至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)=(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。
Q3:是否可以定量D-Glutamine?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamine定量,无法定量D-Glutamine。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。
Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

参考文献

1、K. Hayashima, H. Katoh, “Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis”, J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.

2、R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, “Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a”, Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.

3、S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, “Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions”, 2022, Int. J. Mol. Sci., doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

4、M Chen, G Wang, Z Xu, J Sun, B Liu, L Chang, J Gu, Y Ruan, X Gao,S Song,Loss of RACK1 promotes glutamine addiction via activating AKT/mTOR/ASCT2 axis to facilitate tumor growth in gastric cancer,Cellular Oncology, 2023,doi:https://doi.org/10.1007/s13402-023-00854-1.

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谷氨酸的定量检测试剂盒
Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光,防潮
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特点:

● 享有显色底物WST专利

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铁死亡通路图

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铁死亡检测方案

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操作步骤
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NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

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NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

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产品概述

  谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成,而且还作为神经递质发挥重要作用,谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道,胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能,而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡,近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量,谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

  本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

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操作步骤

  只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中,加入试剂后孵育即可。

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实验例

  标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白,抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡,即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中,确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示,通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少,抑制胱氨酸的摄取,从而导致谷胱甘肽的量减少。

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Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例:

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后,确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示,SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少,细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

<使用产品>

· 细胞内GSH:GSSG/GSH Quantification Kit II(货号:G263)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ROS:ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-(货号:R252)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ATP:ATP Assay Kit-Luminescence(货号:A550)

· 细胞内α-KG:α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric(货号:K261)

<实验条件>

细胞:A549细胞 (1 x 106 cells)  药物处理时间:48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量是多少?
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

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Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。

※Working solution配制后,避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下,溶液的颜色会变成褐色。

Q3:是否可以定量D-Glutamate?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamate定量,无法定量D-Glutamate。
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A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

 

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

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铁死亡荧光试剂 (Fe2+荧光

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谷氨酰胺定量检测试剂盒
Glutamine Assay Kit-WST
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特点:

● 享有显色底物WST专利

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原理
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
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NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3.    Glutamate Assay Kit-WST    谷氨酸的定量检测

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试剂盒内含

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产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源,并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中,谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成,而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量,可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

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操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液,并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)=(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

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实验例

标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

 

*当n=3时,至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)=(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。
Q3:是否可以定量D-Glutamine?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamine定量,无法定量D-Glutamine。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。
Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号:G268

参考文献

 

1、K. Hayashima, H. Katoh, “Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis”, J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.

2、R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, “Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a”, Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.

3、S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, “Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions”, 2022, Int. J. Mol. Sci., doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

4、M Chen, G Wang, Z Xu, J Sun, B Liu, L Chang, J Gu, Y Ruan, X Gao,S Song,Loss of RACK1 promotes glutamine addiction via activating AKT/mTOR/ASCT2 axis to facilitate tumor growth in gastric cancer,Cellular Oncology, 2023,doi:https://doi.org/10.1007/s13402-023-00854-1.

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谷氨酸的定量检测试剂盒
Glutamate Assay Kit-WST
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产品概述

  谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成,而且还作为神经递质发挥重要作用,谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道,胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能,而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡,近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量,谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

  本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

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操作步骤

  只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中,加入试剂后孵育即可。

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实验例

  标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

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铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白,抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡,即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中,确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示,通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少,抑制胱氨酸的摄取,从而导致谷胱甘肽的量减少。

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Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例:

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后,确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示,SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少,细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

<使用产品>

· 细胞内GSH:GSSG/GSH Quantification Kit II(货号:G263)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ROS:ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-(货号:R252)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ATP:ATP Assay Kit-Luminescence(货号:A550)

· 细胞内α-KG:α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric(货号:K261)

<实验条件>

细胞:A549细胞 (1 x 106 cells)  药物处理时间:48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量是多少?
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

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Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。

※Working solution配制后,避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下,溶液的颜色会变成褐色。

Q3:是否可以定量D-Glutamate?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamate定量,无法定量D-Glutamate。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

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产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源,并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中,谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成,而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量,可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

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操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液,并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)=(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

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实验例

标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

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常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量。
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

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*当n=3时,至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)=(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。
Q3:是否可以定量D-Glutamine?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamine定量,无法定量D-Glutamine。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。
Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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参考文献

1)Lingtao,J.et al.,”Glutamate dehydrogenase 1 signals through antioxidant glutathione peroxidase 1 to regulate redox homeostasis and tumor growth”,Cancer Cell,2015,27,257-270.

关联产品

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WST-8

WST-8; 纯度: 98.62%

WST-8 是一种水溶性的四唑染料,相对于常规MTS检测,WTS-8测定法的灵敏度增强。

WST-8amp;;

WST-8 Chemical Structure

CAS No. : 193149-74-5

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50 mg ¥800 In-stock
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1 g ; 询价 ;

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WST-8 相关产品

bull;相关化合物库:

  • Bioactive Compound Library Plus

生物活性

WST-8 is a water-soluble tetrazolium dye, WST-8 enhances sensitivity of the WST-8-based assay over the conventional MTS-based assay.

体外研究
(In Vitro)

The generally used MTS-based assay is compared with a bioassay employing a water-soluble tetrazolium dye, WST-8, using NFS-60 cells at a concentration of 7×105 cells/mL against 800 IU/mL of PEGylated G-CSF at 24, 48, 72, and 72 h time points to determine the efficacy of PEGylated G-CSF. Further, the optimized WST-8 dye-based assay is used to test the potency of various commercially available PEGylated G-CSF preparations. The results demonstrate enhanced sensitivity of the WST-8-based assay over the conventional MTS-based assay for determining the potency of PEGylated G-CSF using the NFS-60 cell line[1].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

分子量

601.48

Formula

C20H13N6NaO11S2

CAS 号

193149-74-5

运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

储存方式

4deg;C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80deg;C, 6 months; -20deg;C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)

溶解性数据
In Vitro:;

H2O : 83.33 mg/mL (138.54 mM; Need ultrasonic)

DMSO : 10 mg/mL (16.63 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.6626 mL 8.3128 mL 16.6257 mL
5 mM 0.3325 mL 1.6626 mL 3.3251 mL
10 mM 0.1663 mL 0.8313 mL 1.6626 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效
储备液的保存方式和期限:-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。

In Vivo:

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂:

——为保证实验结果的可靠性,澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用; 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶

  • 1.

    请依序添加每种溶剂:;10% DMSO ;; 40% PEG300 ;; 5% Tween-80 ;; 45% saline

    Solubility: ≥ 1 mg/mL (1.66 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 1 mg/mL (1.66 mM,饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 10.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀;然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

    将 0.9 g 氯化钠,完全溶解于 100 mL ddH₂O 中,得到澄清透明的生理盐水溶液

  • 2.

    请依序添加每种溶剂:;10% DMSO ;; 90% (20% SBE-β-CD in saline)

    Solubility: ≥ 1 mg/mL (1.66 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 1 mg/mL (1.66 mM,饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 10.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液中,混合均匀。

    将 2 g 磺丁基醚 β-环糊精加入 5 mL 生理盐水中,再用生理盐水定容至 10 mL,完全溶解,澄清透明
  • 3.

    请依序添加每种溶剂:;10% DMSO ;; 90% corn oil

    Solubility: ≥ 1 mg/mL (1.66 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 1 mg/mL (1.66 mM,饱和度未知) 的澄清溶液,此方案不适用于实验周期在半个月以上的实验。

    以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 10.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中,混合均匀。

*以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。
参考文献
  • [1]. Tiwari K, et al. A sensitive WST-8-based bioassay for PEGylated granulocyte colony stimulating factor using the NFS-60 cell line. Pharm Biol. 2015 Jun;53(6):849-54.