标签归档：trap

Scrambled TRAP Fragment

发表于由

Scrambled TRAP Fragment;

Scrambled TRAP Fragment 是 TRAP Fragment的杂乱序列。Scrambled TRAP Fragment 与 TRAP Fragment 活性片段具有相同的氨基酸组成，但排列顺序是随机打乱的。 Scrambled TRAP Fragment 常用作阴性对照。

Scrambled TRAP Fragmentamp;;

Scrambled TRAP Fragment Chemical Structure

CAS No. : 1348418-97-2

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

* Please select Quantity before adding items.

生物活性

Scrambled TRAP Fragment is a scrambled sequence of TRAP Fragment. Scrambled TRAP Fragment with a random sequence of the amino acids that are the same as the active fragment. Scrambled TRAP Fragment usually used as a negative control.

分子量

747.89

Formula

C34H57N11O8
CAS 号

1348418-97-2
Sequence

Phe-Ser-Leu-Leu-Arg-Asn-NH2
Sequence Shortening

FSLLRN-NH2
运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.
Solvent Solubility
In Vitro:;

H2O

Peptide Solubility and Storage Guidelines:

1.;;Calculate the length of the peptide.

2.;;Calculate the overall charge of the entire peptide according to the following table:

; Contents Assign value
Acidic amino acid Asp (D), Glu (E), and the C-terminal -COOH. -1
Basic amino acid Arg (R), Lys (K), His (H), and the N-terminal -NH2 +1
Neutral amino acid Gly (G), Ala (A), Leu (L), Ile (I), Val (V), Cys (C), Met (M), Thr (T), Ser (S), Phe (F), Tyr (Y), Trp (W), Pro (P), Asn (N), Gln (Q) 0

3.;;Recommended solution:

Overall charge of peptide Details
Negative (lt;0) 1.;;Try to dissolve the peptide in water first.
2.;;If water fails, add NH4OH (lt;50 μL).
3.;;If the peptide still does not dissolve, add DMSO (50-100 μL) to solubilize the peptide.
Positive (gt;0) 1.;;Try to dissolve the peptide in water first.
2.;;If water fails, try dissolving the peptide in a 10%-30% acetic acid solution.
3.;;If the peptide still does not dissolve, try dissolving the peptide in a small amount of DMSO.
Zero (=0) 1.;;Try to dissolve the peptide in organic solvent (acetonitrile, methanol, etc.) first.
2.;;For very hydrophobic peptides, try dissolving the peptide in a small amount of DMSO, and then dilute the solution with water to the desired concentration.

TRAP-6 amide TFA

发表于由

TRAP-6 amide TFA;

TRAP-6 amide TFA 是一个 PAR-1 凝血酶受体的肽类激动剂。

TRAP-6 amide TFAamp;;

TRAP-6 amide TFA Chemical Structure

CAS No. : 1426807-16-0

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

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生物活性

TRAP-6 amide TFA is a PAR-1 thrombin receptor agonist peptide[1].

分子量

862.89

Formula

C36H57F3N10O11
CAS 号

1426807-16-0
运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.
Solvent Solubility
In Vitro:;

H2O

Peptide Solubility and Storage Guidelines:

1.;;Calculate the length of the peptide.

2.;;Calculate the overall charge of the entire peptide according to the following table:

; Contents Assign value
Acidic amino acid Asp (D), Glu (E), and the C-terminal -COOH. -1
Basic amino acid Arg (R), Lys (K), His (H), and the N-terminal -NH2 +1
Neutral amino acid Gly (G), Ala (A), Leu (L), Ile (I), Val (V), Cys (C), Met (M), Thr (T), Ser (S), Phe (F), Tyr (Y), Trp (W), Pro (P), Asn (N), Gln (Q) 0

3.;;Recommended solution:

Overall charge of peptide Details
Negative (lt;0) 1.;;Try to dissolve the peptide in water first.
2.;;If water fails, add NH4OH (lt;50 μL).
3.;;If the peptide still does not dissolve, add DMSO (50-100 μL) to solubilize the peptide.
Positive (gt;0) 1.;;Try to dissolve the peptide in water first.
2.;;If water fails, try dissolving the peptide in a 10%-30% acetic acid solution.
3.;;If the peptide still does not dissolve, try dissolving the peptide in a small amount of DMSO.
Zero (=0) 1.;;Try to dissolve the peptide in organic solvent (acetonitrile, methanol, etc.) first.
2.;;For very hydrophobic peptides, try dissolving the peptide in a small amount of DMSO, and then dilute the solution with water to the desired concentration.
参考文献

  • [1]. Sofia Ramström, et al. Platelet Phosphatidylserine Exposure and Procoagulant Activity in Clotting Whole Blood–Different Effects of Collagen, TRAP and Calcium Ionophore A23187. Thromb Haemost. 2003 Jan;89(1):132-41.

TRAP-6(Synonyms: PAR-1 agonist peptide Thrombin Receptor Activator Peptide 6)

发表于由

TRAP-6;(Synonyms: PAR-1 agonist peptide; Thrombin Receptor Activator Peptide 6) 纯度: 99.74%

TRAP-6 (PAR-1 agonist peptide)，一种多肽片段，是选择性的蛋白酶激活受体 1 (PAR1) 激动剂。TRAP-6 通过凝血酶受体激活人血小板。TRAP-6 对 PAR4 无活性。

TRAP-6amp;;(Synonyms: PAR-1 agonist peptide; Thrombin Receptor Activator Peptide 6)

TRAP-6 Chemical Structure

CAS No. : 141136-83-6

规格 价格 是否有货 数量
10;mM;*;1 mL in Water ￥1760 In-stock
10 mg ￥1600 In-stock
25 mg ￥3520 In-stock
50 mg ; 询价 ;
100 mg ; 询价 ;

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TRAP-6 相关产品

bull;相关化合物库:

  • Bioactive Compound Library Plus
  • GPCR/G Protein Compound Library
  • Immunology/Inflammation Compound Library
  • Peptidomimetic Library
  • Targeted Diversity Library
  • Peptide Library

生物活性

TRAP-6 (PAR-1 agonist peptide), a peptide fragment, is a selective protease activating receptor 1 (PAR1) agonist. TRAP-6 activates human platelets via the thrombin receptor. TRAP-6 shows no activity at PAR4[1].

IC50 Target

PAR1[1]
体外研究
(In Vitro)

TRAP-6 (0.01-10 μM) triggers calcium mobilization in Xenopus oocytes heterologously expressing PAR1[1].
TRAP-6 (0.01-10 μM; 30 min) activates human platelets[1].
TRAP-6 (100 μM) does not cause the platelets of rabbits or rats to change shape, aggregate, release granule contents, or form thromboxane[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.
体内研究
(In Vivo)

TRAP (1 mg/kg; i.v.) produces a biphasic response in blood pressure in inactin-anesthetized rats[3].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.
分子量

748.87

Formula

C34H56N10O9
CAS 号

141136-83-6
Sequence

Ser-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn
Sequence Shortening

SFLLRN
中文名称

凝血酶受体激活肽6
运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
储存方式
Powder -80deg;C 2 years
-20deg;C 1 year
In solvent -80deg;C 6 months
-20deg;C 1 month
溶解性数据
In Vitro:;

H2O : 100 mg/mL (133.53 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3353 mL 6.6767 mL 13.3535 mL
5 mM 0.2671 mL 1.3353 mL 2.6707 mL
10 mM 0.1335 mL 0.6677 mL 1.3353 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month。-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。
参考文献

  • [1]. Kahn ML, et, al. Protease-activated receptors 1 and 4 mediate activation of human platelets by thrombin. J Clin Invest. 1999 Mar;103(6):879-87.

    [2]. Kinlough-Rathbone RL, et, al. Rabbit and rat platelets do not respond to thrombin receptor peptides that activate human platelets. Blood. 1993 Jul 1;82(1):103-6.

    [3]. Chintala MS, et, al. Disparate effects of thrombin receptor activating peptide on platelets and peripheral vasculature in rats. Eur J Pharmacol. 1998 May 22;349(2-3):237-43.

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

发表于由

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色




东京大学医学部附属医院 整形外科脊椎外科 第2研究室 河源 元

 


1.前言


　　检测相关细胞的生理活性是掌握生物体骨代谢状态的有效方法。骨组织使用碱性磷酸酶（ALP）进行染色可明确成骨细胞的成骨潜能，使用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色可明确破骨细胞的骨吸收能力。并且在同一切片上进行二重染色时，可同时识别二者。另外，本产品还具有使用脱钙标本进行二重染色实验，无需特殊机器，在一般的设施上即可观察骨代谢等特点。在这样的背景下进行二重染色的研究。



2.标准标本的制作


　　用之前使用的树脂包埋法或冷冻切片法制成的标本作为标准标本，和脱钙石蜡切片相比。即酒精固定小鼠肘关节，用乙二醇甲基丙烯酸树脂包埋，硬组织切片机制作2μｍ切片，然后进行TRAP和ALP染色（图1）2）。再制作脱钙冷冻切片（图2）作为标准标本。然后，研究或改良固定、脱钙、染色等各阶段双重染色的可行性。


石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

图3.本实验标准标本——小鼠肘关节染色标本。

左图为TRAP染色，右图为ALP染色。下图是二者的双重染色。

染色效果均佳。以此作为阳性对照，与脱钙石蜡切片一起染色，进行染色性评估。

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

图2.脱钙冷冻切片酶染色—将柠檬酸脱钙的小鼠腰椎

和右上肢浸泡在30%蔗糖溶液，后经OCT复合包埋，

Tissue‐tekPINO冻结，Cryo3制作5μｍ冷冻切片。再对切片进行酶染色。

不仅可进行TRAP染色（左：红色）和ALP染色（中：褐色）的单染色，双重染色（右）也呈阳性。

3.固定


　　ALP染色使用不能用福尔马林固定的新鲜材料，如果未在短时间内固定，会导致酶失活，因此推荐80%乙醇固定。①小鼠膝关节不进行一次固定，直接用乙醇直接浸泡进行二次固定组。②小鼠腰椎用福尔马林（4％多聚甲醛溶液）固定16小时后再用乙醇进行二次固定。③小鼠腰椎用福尔马林固定4天后进行二次固定。④临床案例也用福尔马林固定1个月后，再进行二次固定。对上述四种类型进行TRAP·ALP双重染色，研究染色的可行性。图3是各染色性的研究结果。本实验证明福尔马林固定从16小时到4天时间范围内均可进行TRAP·ALP双重染色。

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

图3.福尔马林的1次固定的固定时间和TRAP/ALP的染色性研究

①是未经福尔马林固定，仅用酒精2次固定的样品，ALP染色呈强阳性。TRAP染色呈阴性。

②是福尔马林固定16小时和③是固定4天，TRAP/ALP的染色效果均佳。

并且，福尔马林固定1个月的临床案例（骨软骨瘤）中TRAP染色呈阳性，但不能ALP染色。

4.脱钙


　　ALP酶是含有金属Zn蛋白。通过脱钙处理，酶的组成成分Zn被去除，导致酶失活。为弥补此缺点，需要添加ZnSO4，作为ALP活化剂。换言之，100mL脱钙液需添加0.4mL  1%ZnSO4，来补充Zn离子。并且，作为脱钙剂，在柠檬酸盐酸缓冲液添加Zn的同时，也可尝试添加相同螯合剂EDTA溶液进行研究。另外，也可研究能否在酸性脱钙剂（甲酸福尔马林溶液）进行酶反应。结果显示，脱钙液添加EDTA溶液后染色良好。反之，甲酸福尔马林溶液不能进行酶染色（图4）。脱钙方法利用超声波脱钙装置（Histra-DC，正常光）在8~16℃的低温环境下，连续操作3-6天，对样品进行脱钙处理。脱钙后用添加甘氨酸的巴比妥缓冲液（pH7.4）清洗，磷酸钙附着在组织上，防止沉淀。


石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

图4.脱钙液的种类不同可否双重染色

左图是选用酸性脱钙溶液中对组织伤害较少的甲酸福尔马林

脱钙溶液脱钙3天（Histra-DC,8～16℃）后的大鼠膝关节。

（Histra-DC，8-16℃）TRAP和ALP均不能染色。相对来说，中图、右图均可进行TRAP/ALP双重染色。

5.染色


　　染色法是Lorch的Gomori法。本次用的是偶氮染料法和耦合法结合的TRAP/ALP染色试剂盒（Wako，产品编号：294-67001）。Lorch推荐切片厚度为8μm，同时也研究了普通的4μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。

　　染色法结果：偶氮染料法中切片过厚导致酶扩散图像。即用TRAP染色骨质有红染倾向，但即使是4μm厚度，只要增强反应条件（反应温度和反应时间），也能充分染色的。换言之，TRAP染色中反应温度从室温调至37℃，反应时间从30分钟调至45分钟或60分钟。ALP染色在37℃反应45分钟至3小时，或者室温（10-15℃）下反应时间增加至一晚。此结果显示，两者色调平衡，染色效果好（图5）。但是，反应条件的增强导致ALP染色切片产生了很多色素颗粒（图2）。另外，TRAP和ALP的染色顺序哪一个先染色都是可以的。如果先进行ALP染色时，在TRAP阳性部位呈明显的红色，鲜艳处为破骨细胞。获得比较好的标本。但是，ALP的反应产物经过TRAP溶液处理后，会产生白色混浊颗粒，沉淀在组织上。因此，先TRAP染色，接着ALP染色的方法是可行的。封装法是利用甲基绿数秒间核染色处理。水洗后，37℃下干燥，二甲苯浸透，用马里醇(Marinol)永久封存。有文章推荐在浸透前用推荐使用酒精脱水，但是会产生反应产物的溶解、扩散。

石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

图5.脱钙石蜡包埋切片的TRAP/ALP双重染色

用1年龄小鼠腰椎的EDTA脱钙石蜡切片，进行TRAP/ALP双重染色。

TRAP阳性将破骨细胞染成红色，ALP阳性将细胞活性强的细胞（成骨细胞、软骨细胞）染成褐色。

（上：弱扩大，下：强扩大）

6.总结


　　TRAP和ALP的双酶染色实验中通过对固定、脱钙、染色进行多处改良，实现了对脱钙石蜡标本的染色。但是酶扩散图像对TRAP染色的效果极佳。出于各种原因的考虑，关于固定步骤的影响，如果固定不充分的话，容易抑制脱钙水平。进而导致酶扩散的发生。另外，注意脱钙本身的影响也是有必要的。总而言之，和非脱钙标本相比较，脱钙标本的扩散图像更加明显。脱钙会使酶扩散变强。另外，我们将在今后对切片的厚度和二重染色顺序的影响进行着重研究。

7.产品列表


产品编号

产品名称

规格

包装

294-67001

TRAP/ALP双重染色试剂盒

TRAP/ALP Stain Kit

病理研究用

60次

 


【参考文献】

[1]　須田立雄、小澤英浩、高橋栄明著:「骨の科学」（医歯薬出版）（1985）.

[2]　河原元：技術講座、続・病理組織標本作製完全マニュアルシリーズ第２回硬組織検査法，MedicalTechnology，24（12），カラーアトラス、1213-1222（1996）.

[3]　「骨形態計測ハンドブック」第１版，p.67（1983）

[4]　末吉徳芳ら：技術講座、組織固定法—より良い固定を目指して，MedicalTechnology，37（8），857-864（2009）.

[5]　Localization of AlkalinePhosphatase in MammalianBones by I. JOANLORCH

[6]　Conyers,R.A.J.:Biochem.Biophys.Acta(Amst),138,363-371(1976)

[7]　Gomori,G.:Proc.Soc.Exptl.Biol.Med.,42,23(1939)

[8]　Barka,T.and Anderson,P..:J.Histochem.Cytochem.10,741(1962)

[9]　影山圭三、渡辺陽之輔：「病理組織標本の作り方」，慶応義塾大学医学部病理学教室編，第５版（医学書院）（1986）.

TRAP Staining Kit 品牌：Cosmo Bio

发表于由

TRAP Staining Kit

品牌：Cosmo Bio
CAS No.：
储存条件：4℃ DNF
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

PMC-AK04F

 – 10 Plates – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

TRAP/ALP染色试剂盒

发表于由

TRAP/ALP染色试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

TRAP/ALP染色试剂盒TRAP/ALP染色试剂盒

破骨/成骨双重染色


　　正常的骨代谢是通过成骨细胞生长与破骨细胞建立骨吸收而维持平衡。成骨细胞的标记酶是碱性磷酸酶（ALP）。破骨细胞的标记酶是抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）。这两种标记酶在组织切片或者培养细胞过程中，被作为成骨细胞、破骨细胞存在的标记指标。

　　本试剂盒可通过骨组织切片以及培养细胞中TRAP/ALP酶活性进行组织染色。通过观察成骨细胞和破骨细胞的染色成像，可检查细胞的分化状态和骨组织的分布情况。

 


◆特点


●　使用时混合3种溶液，可制备TRAP酶活性染色的显色底物溶液。

●　ALP酶活性染色使用的是预混物溶液，操作简便。

●　TRAP的活性部位呈红紫色，ALP的活性部位呈蓝色（茶褐色），可双重染色。

●　适用于骨组织切片（脱钙GMA树脂包埋切片）以及培养细胞。

◆试剂盒组成


●　酒石酸溶液（×10）·······3 mL
●　酸性磷酸酶底物液A······30 mL
●　酸性磷酸酶底物液B······0.3 mL
●　核染色试剂··············10 mL

●　碱性磷酸酶预混物溶液····30 mL

<备注>本产品可对应培养细胞包装24孔板-5次，96孔板-6次。

骨组织载玻片（一个载玻片约使用500 μL）包装为60个。

◆培养细胞TRAP/ALP酶活性染色案例


TRAP/ALP染色试剂盒

●　用TRAP染色剂使破骨细胞呈红色

●　用ALP染色剂使成骨细胞的细胞膜、软骨细胞和细胞间膜呈茶褐色

●　用核染色试剂使各种细胞核呈蓝绿色。

TRAP/ALP染色试剂盒

RAW264细胞的TRAP活性染色

TRAP/ALP染色试剂盒

MC 3T3-E1细胞ALP活性染色

◆相关产品

产品编号 产品名称 包装
PMC-AK20-COS Alkaline Phosphatase Staining Kit
碱性磷酸酶染色试剂盒 		 1 kit
PMC-AK04F-COS TRAP Staining Kit
抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒（TRAP） 		 10 plate



点击此处下载产品彩页，或向当地代理商索要纸质版本。


石蜡切片骨相关酶（TRAP，ALP）双重染色

◆实验材料及方法


　　材料的获取：1年龄小鼠的上、下肢骨以及脊椎骨（切除软组织）

　　↓

　　一次固定：4%多聚甲醛溶液·10%福尔马林溶液

　　二次固定：纯乙醇

　　部分脊椎骨的非脱钙GMA树脂包埋处理，其他部分做脱钙处理。

　　↓

　　脱脂、脱钙：脱钙液是ZnSO4加EDTA溶液。（与其它方法相比）

　　脱钙装置Histra-DC（普通光）8~16℃连续操作。

　　↓

　　脱水、包埋：ETP（Sakura产品）处理16小时，使用融点为58-60℃嵌入式硬石蜡包埋。

　　部分右上肢和腰椎脱钙GMA树脂处理。

　　↓

　　薄切、干燥：制作4 μｍ切片，43℃伸展30分钟后，37℃干燥处理。

　　↓

　　染色、封装：TRAP/ALP染色试剂盒（Wako）染色，37℃干燥后，二甲苯透明处理

　　Malinol封装液封装

　　↓

　　镜检，染色性评估



◆标准标本制作


　　用之前使用的树脂包埋法或冷冻切片法制成的标本作为标准标本，和脱钙石蜡切片相比。即酒精固定小鼠肘关节，用乙二醇甲基丙烯酸树脂包埋，硬组织切片机制作2 μｍ切片，然后进行TRAP和ALP染色（图1）。还有脱钙冷冻切片也可以作为标准标本（图2）。然后，研究或改良固定、脱钙、染色等各阶段双重染色的可行性。


TRAP/ALP染色试剂盒

　　图1：标准标本（GMA树脂包埋）照片是本实验标准标本——小鼠肘关节染色标本。左图为TRAP染色，右图为ALP染色。下图是二者的双重染色。染色效果均佳。以此作为阳性对照，与脱钙石蜡切片一起染色，进行染色性评估。

TRAP/ALP染色试剂盒


　　图2：脱钙冷冻切片酶染色—将柠檬酸脱钙的小鼠腰椎和右上肢浸泡在30%蔗糖溶液，后经OCT复合包埋，Tissue‐tekPINO冻结，Cryo制作5μｍ冷冻切片。再对切片进行酶染色。不仅可进行TRAP染色（左：红色）和ALP染色（中：褐色）的单染色，双重染色（右）也呈阳性。

固定

　　ALP染色使用不能用福尔马林固定的新鲜材料，如果未在短时间内固定，会导致酶失活，因此推荐80%乙醇固定。①小鼠膝关节不进行一次固定，直接用乙醇直接浸泡进行二次固定组。②小鼠腰椎用福尔马林（4％多聚甲醛溶液）固定16小时后再用乙醇进行二次固定。③小鼠腰椎用福尔马林固定4天后进行二次固定。④临床案例也用福尔马林固定1个月后，再进行二次固定。对上述四种类型进行TRAP·ALP双重染色，研究染色的可行性。如图3所示。本实验证明福尔马林固定从16小时到4天时间范围内均可进行TRAP·ALP双重染色。

TRAP/ALP染色试剂盒


　　图3：福尔马林的1次固定的固定时间和TRAP/ALP的染色性研究—①是未经福尔马林固定，仅用酒精2次固定的样品，ALP染色呈强阳性。TRAP染色呈阴性。②是福尔马林固定16小时和③是固定4天，TRAP/ALP的染色效果均佳。并且，福尔马林固定1个月的临床案例（骨软骨瘤）中TRAP染色呈阳性，但不能ALP染色。

脱钙

　　ALP酶是含有金属Zn蛋白。通过脱钙处理，酶的组成成分Zn被去除，导致酶失活。为弥补此缺点，需要添加ZnSO4，作为ALP活化剂。换言之，100 mL脱钙液需添加0.4 mL 1%ZnSO4，来补充Zn离子。并且，作为脱钙剂，在柠檬酸盐酸缓冲液添加Zn的同时，也可尝试添加相同螯合剂EDTA溶液进行研究。另外，也可研究酸性脱钙剂（甲酸福尔马林溶液）能否进行酶反应。结果显示，脱钙液添加EDTA溶液后染色良好。反之，甲酸福尔马林溶液不能进行酶染色。（图4）脱钙方法利用超声波脱钙装置（Histra-DC，正常光）在8~16℃的低温环境下，连续操作3-6天，对样品进行脱钙处理。脱钙后用添加甘氨酸的巴比妥缓冲液（pH7.4）清洗，磷酸钙附着在组织上，防止沉淀。

TRAP/ALP染色试剂盒


　　图4：脱钙液的种类不同可否双重染色—左图是选用酸性脱钙溶液中对组织伤害较少的甲酸福尔马林
　　脱钙溶液脱钙3天（Histra-DC,8～16℃）后的大鼠膝关节。（Histra-DC，8-16℃）TRAP和ALP均不能染色。相对来说，中图、右图均可进行TRAP/ALP双重染色。


染色

　　染色法是Lorch的Gomori法。本次用的是偶氮染料法和耦合法结合的TRAP/ALP染色试剂盒（Wako，产品编号：294-67001）。对于切片的厚度，Lorch推荐8 μm，同时也研究了普通的4 μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。

　　染色法结果：偶氮染料法中切片过厚导致酶扩散图像。即用TRAP染色骨质有红染倾向，但即使是4 μm厚度，只要增强反应条件（反应温度和反应时间），也能充分染色的。换言之，TRAP染色中反应温度从室温调至37℃，反应时间从30分钟调至45分钟或60分钟。ALP染色在37℃反应45分钟至3小时，或者室温下翻译时间至一晚。此结果显示，两者色调平衡，染色效果好。（图5）但是，反应条件的增强导致ALP染色切片产生了很多色素颗粒（图2）。另外，TRAP和ALP的染色顺序哪一个先染色都是可以的。如果先进行ALP染色时，在TRAP阳性部位呈明显的红色，鲜艳处为破骨细胞。获得比较好的标本。但是，ALP的反应产物经过TRAP溶液处理后，会产生白色混浊颗粒，沉淀在组织上。因此，先TRAP染色，接着ALP染色的方法是可行的。封装法是利用甲基绿数秒间核染色处理。水洗后，37℃下干燥，二甲苯浸透，用马里醇(Marinol)永久封存。在浸透前用推荐使用酒精脱水，但是会产生反应产物的溶解、扩散。


TRAP/ALP染色试剂盒


　　图5：脱钙石蜡包埋切片的TRAP/ALP双重染色—利用1年龄小鼠腰椎的EDTA脱钙石蜡切片，进行TRAP/ALP双重染色。TRAP阳性将破骨细胞染成红色，将强细胞活性的细胞（成骨细胞、软骨细胞）染成褐色。（上：弱扩大，下：强扩大）

◆相关资料


TRAP/ALP染色试剂盒

TRAP/ALP染色试剂盒说明书

参考文献


1.

Yamaguchi, S., Aoyama, T., Ito, A., Nagai, M., Iijima, H., Tajino, J., … & Kuroki, H. (2016). Effect of low-intensity pulsed ultrasound after mesenchymal stromal cell injection to treat osteochondral defects: an in vivo study. Ultrasound in medicine & biology, 42(12), 2903-2913. 全文
2.

Pang, P., Shimo, T., Takada, H., Matsumoto, K., Yoshioka, N., Ibaragi, S., & Sasaki, A. (2015). Expression pattern of sonic hedgehog signaling and calcitonin gene-related peptide in the socket healing process after tooth extraction. Biochemical and biophysical research communications, 467(1), 21-26. 全文
3.

Hatano, K., Ishida, Y., Yamaguchi, H., Hosomichi, J., Suzuki, J. I., Usumi-Fujita, R., … & Ono, T. (2018). The chemokine receptor type 4 antagonist, AMD3100, interrupts experimental tooth movement in rats. Archives of oral biology, 86, 35-39.  全文
4.

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产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
294-67001 TRAP/ALP Stain Kit
TRAP/ALP双重染色试剂盒		 60次 病理研究用 －

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

发表于由

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒
TRAP Staining Kit

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

可用于破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

TRAP Staining Kit

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

　　TRAP Staining Kit 可用于破骨细胞的抗酒石酸酸性磷酸酶染色。骨量是由成骨细胞和破骨细胞两者间的活性平衡来控制的。
　　碱性磷酸酶（ALP 染色试剂盒，Cat.No. PMC-AK20-COS）和抗酒石酸酸性磷酸分别是成骨细胞和破骨细胞的标记物。

◆试剂盒的组成

组成

数量

保存

Tartrate-containing Buffer

50 mL

４°C　(不用冻结)

Chromogenic Substrate

10 vials

４°C

盒内试剂的量可用于 10×96 孔板

#其他所需的材料
●　10％福尔马林中性缓冲液
●　磷酸盐缓冲盐水（PBS）
●　蒸馏水或去离子水

◆步骤（96-孔板规格）

1.   去除培养基。用 100 μL 的 PBS 清洗每个孔。
2.   添加 50 μL 10％的福尔马林中性缓冲溶液至每个孔板里，并在室温下放置５分钟。
3.   用 250 μL 的去离子水清洗每个孔板。 (×３次)
4.   用５mL 酒石酸盐缓冲液溶解1瓶　
5.   添加 50 μL 的显色底物至每个孔板内。
6.   在 37℃ 下孵育 20-60 分钟。调节孵育时间直到 TRAP 染色结果能清晰地显示在图１中。
7.   用去离子水冲洗以终止反应。

注意: 孵育时间过长会导致过度染色显色底物。

　　

抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

　图 1:　破骨细胞TRAP染色

相关资料


抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

详情请点击图片


抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 染色试剂盒 TRAP Staining Kit

细胞培养试剂盒及细胞培养分析试剂盒的宣传单 [PDF]

TRAP Staining Kit [PMC-AK04F-COS]
TRAP Staining Kit可用于破骨细胞里的抗酒石酸酸性磷酸酶的染色。

 Stains All Gel Staining Kit for Acidic Proteins [PMC-AK02-COS]
该试剂盒专门设计用来染色调节骨骼钙化的强酸性蛋白如：如骨钙素、骨桥蛋白和BSP二强酸性蛋白质。

 Adipocyte Fluorescent Staining kit [PMC-AK19F-COS]
用氟硼荧和通过H33258荧光染色的细胞核来染色细胞里的脂肪球。

Pancreatic beta-cell Fluorescent Staining Kit [PMC-AK11F-COS]

Acidic Mucopolysaccaride Assay Kit [PMC-AK03-COS]

DNA Quantity Kit [PMC-AK06-COS]
DNA 不通过从培养细胞里提纯也可以进行量化。

TypeI collagenase assay kit [PMC-AK37-COS]

Lipid Assay Kit [PMC-AK09F-COS]
此试剂盒（油红的oilphilic红色染料）染色细胞内的油滴，并且用有机溶剂萃取法能够量化油量

GPDH Assay Kit [PMC-AK01-COS]
该试剂盒在测定酶活性方面，比传统方具有更高的稳定性和再现性等优势。

Alkaline Phosphatase Staining Kit [PMC-AK20-COS]
这是用于成骨细胞的碱性磷酸酶的染色。

Calcified nodule Staining kit [PMC-AK21-COS]

POLARIC [PMC-AK12-COS]
用于活细胞的溶剂变色荧光

Gelatin zymography kit [PMC-AK47-COS]

MMP Marker [PMC-AK38-COS]

◆TRAP 染色试剂盒常见问题


Q１：　该款试剂盒是否可用于石蜡包埋的组织？

A１：　非常抱歉，我们没有用这个做过石蜡包埋的组织。如果样品含有福尔马林的话，也不能用。


Q２：　操作说明书是可以做 10×96 孔板实验。能否介绍一下使用６孔板的步骤？

A２：　请使用 96 孔板的 30 倍试剂。比如显色试剂的量是1.5mL。


Q３：　是否可以染巨噬细胞？

A３：　可以。


Q４：　进行免疫荧光实验时，是否可以一起使用？如果可以，请告知实验流程。

A４：　我们没有用该试剂盒同时进行免疫荧光实验。


Q５：　如果显色底物溶解的话，在４℃可以保存多久？

A５：　非常抱歉，显色底物不能溶解后保存。最好现配现用。显色底物提供３mg/瓶，有 10 瓶。


Q６：　能够提供小包装？

Thrombin Receptor Agonist Peptide (TRAP1-6) 品牌：Anygen

发表于由

Thrombin Receptor Agonist Peptide (TRAP1-6)

品牌：Anygen
CAS No.：
储存条件：-20℃
纯度：–
产品编号

(生产商编号)

 等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

309-92111

 – 0.5 mg – 咨询 – –


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

TRAP-6 amide

发表于由

TRAP-6 amide;

TRAP-6 amide 是一个 PAR-1 凝血酶受体的肽类激动剂。

TRAP-6 amideamp;;

TRAP-6 amide Chemical Structure

CAS No. : 141923-40-2

规格 是否有货
100 mg ; 询价 ;
250 mg ; 询价 ;
500 mg ; 询价 ;

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生物活性

TRAP-6 amide is a PAR-1 thrombin receptor agonist peptide[1].

分子量

748.87

Formula

C34H56N10O9
CAS 号

141923-40-2
运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
储存方式

Please store the product under the recommended conditions in the Certificate of Analysis.
参考文献

  • [1]. Sofia Ramström, et al. Platelet Phosphatidylserine Exposure and Procoagulant Activity in Clotting Whole Blood–Different Effects of Collagen, TRAP and Calcium Ionophore A23187. Thromb Haemost. 2003 Jan;89(1):132-41.