日本同仁化学Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05| DOJINDO

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05
线粒体内单线态氧荧光探针试剂
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging
商品信息
储存条件:-20度保存,避光
运输条件:室温
分子式:

C35H37ClN2Si

分子量:

549.22

特点:

 

● 能够对活细胞进行荧光成像

● 对单线态氧的高选择性

下载说明书
产品文献
SDS下载

选择规格:
2μg

现货

 
线粒体检测方案

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

产品概述
原理
荧光特性
反应特异性
实验例
常见问题Q&A
参考文献

产品概述

       单线态氧(Singlet Oxygen,1O2)是一种具有强氧化性的活性氧(ROS),是造成皮肤斑点及皱纹的重要因素。在化妆品等研究中,去除单线态氧是重要的研究目的。在癌症研究领域,单线态氧在光动力疗法(PDT:一种采用光敏药物和激光活化治疗肿瘤的新兴抗癌疗法)中起到关键作用。因此检测活细胞内的单线态氧对于了解PDT的抗癌机理至关重要。但是现有的荧光探针由于不能穿透细胞膜,所以无法用于活细胞检测。

Majima等人合成了一种由含硅罗丹明和蒽环构成的新型远红外荧光探针Si-DMA,分别作为发色团和单线态氧反应位点。当存在单线态氧时会在Si-DMA的蒽环部位生成内过氧化物,Si-DMA的荧光强度会增强1)。在7种不同活性氧中,Si-DMA能够特异性地检测单线态氧(图3)。另外在用5-氨基乙酰丙酸(5-ALA,一种血红素前体)处理细胞后,Si-DMA可以实时观察到线粒体中原卟啉IX产生单线态氧的变化情况(图4)。

原理

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

图1. Si-DMA的细胞染色原理

荧光特性

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

图2. Si-DMA与单线态氧反应后的激发和发射光谱

反应特异性

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

图3. Si-DMA对各种ROS的选择性

实验例

实验例1  荧光显微镜观察用5-氨基乙酰丙酸 (5-ALA) 处理后的HeLa细胞中的单线态氧

1. 接种200 μl HeLa细胞 (2.4×105 cells/ml) 在μ-slide 8孔板 (ibidi) ,培养基为DMEM (10%FBS,1%青霉素-链霉素),

在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。

2. 用200 μl Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤细胞2次。

3. 在μ-slide 8孔板中加入200 μl 含5-ALA的Hanks’ HEPES 缓冲液 (150 μg/ml),在37℃ 5% CO2培养箱中培养4 h。

4. 用Hanks’ HEPES 缓冲液洗涤细胞2次。

5. 加入200 μl Si-DMA工作液(40 nmol/l), 在37℃ 5% CO2培养箱中培养45 min。

6. 用200 μl Hanks’ HEPES缓冲液洗涤细胞2次。

7. 加入200 μl Hanks’ HEPES缓冲液,并用荧光显微镜进行观察。

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

Si-DMA检测5-ALA处理的HeLa细胞线粒体中的单线态氧的荧光成像

5-ALA处理过的HeLa细胞经过2.5 min照射后,Si-DMA的荧光增强,因此Si-DMA可以用于实时监测线粒体中原卟啉IX产生的单线态氧。

滤镜 (波长/带通型滤光片)

荧光成像:600±25 nm (Ex), 685±25 nm (Em)

实验例2  线粒体中的单线态氧检测 

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

用终浓度为50 μmol/l的过氧化氢和终浓度为50 μmol/l的次氯酸刺激或不刺激HeLa细胞,用Si-DMA检测到细胞中产生的单线态氧。和线粒体染料(MitoBright Green: MT06)共染,特异性地在线粒体中检测到了单线态氧。

波长(激发波长/发射波长)

Si-DMA: 600±25 nm/685±25 nm

MitoBright Green: 488 nm/501-563 nm

实验例3  观察用H2O2处理Primary Hepatocytes细胞后产生的单线态氧

Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂货号:MT05

Si-DMA检测用H2O2刺激Primary Hepatocytes细胞后产生的单线态氧荧光成像

实验条件:

用10 mM H2O2刺激Primary Hepatocytes 20 min。

细胞数量:1×104/dish

容器:Nest 15 mm共聚焦培养皿801002

染色条件:在37℃ 5% CO2培养箱中染色45 min

Si-DMA工作液浓度:100 nmol/l

检测仪器:激光共聚焦显微镜

仪器品牌:Leica,Cambridge, UK

仪器型号:BMI-6000

Ex:600 nm,Em: 685 nm

(以上数据由东方肝胆外科医院信号转导实验室友情提供)

常见问题Q&A

Q1、本试剂盒与现有方法相比有什么优势?
A1:本试剂盒的优点是“能够对活细胞进行荧光成像”和“对单线态氧的高选择性”。在操作说明中有详细的实验数据。
Q2、DMSO Stock Solution的稳定性怎么样?
A2:DMSO Stock Solution配制后在-20℃及避光条件下可以保存大约1个月,建议根据每次的用量进行分装保存。
Q3、配制Working Solution可以用Hanks’ HEPES以外的缓冲液吗?
A3:还可以用HBSS缓冲液。
Q4、Working Solution的稳定性怎么样?
A4:Working Solution不稳定,请在配制当天使用。

参考文献

1、S. Kim, T. Tachikawa, M. Fujitsuka, T. Majima, “Far-Red Fluorescence Probe for Monitoring Singlet Oxygen during Photodyanamic Therapy”, J. Am. Chem. Soc., 2014, 136 (33), 11707.

2、S. Bekeschus, A. Mueller, U. Gaipl, KD. Weltmann, “Physical plasma elicits immunogenic cancer cell death and mitochondrial singlet oxygen”, TRPMS., 2017, 99, DOI:10.1109/TRPMS.2017.2766027.

3、Y. D. Riani, T. Matsuda, K. Takemoto and T. Nagai, “Green monomeric photosensitizing fluorescent protein for photo-inducible protein inactivation and cell ablation “, BMC Biol, 2018, 16, 50.

4、T. Guo, T. Liu, Y. Sun, X. Liu, R. Xiong, H. Li, Z. Li, Z. Zhang, Z. Tian, and Y. Tian, “Sonodynamic therapy inhibits palmitateinduced beta cell dysfunction via PINK1/ Parkin-dependent mitophagy”, Cell Death Dis., 2019, 10, 457.

5、K. Murotomi, A. Umeno, S, Sugino and Y. Yoshida. , “Quantitative kinetics of intracellular singlet oxygen generation using a fluorescence probe”, Sci Rep, 2020, 10, 10616.

6、Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, “Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts”, 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866.

关联产品

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection
线粒体超氧化物检测用荧光染料

线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit
线粒体膜电位检测试剂盒

线粒体膜电位检测试剂盒
线粒体膜电位检测试剂盒

MitoBright LT Green试剂
线粒体长效荧光探针-绿色

MitoBright LT Deep Red试剂
线粒体长效荧光探针-深红色

Wako培养系的有效消泡剂SI,PE-H,PE-M,PE-L


Wako培养系的有效消泡剂SI,PE-H,PE-M,PE-L

特点:

●SI(Silicone)

本品为硅系消泡剂,同时具有非常优异的破泡性和抑泡性。因此,低浓度时,也可得到消泡效果。而且,添加到培养基时,具有浑浊少的特点。

●PE-H(Pdyether-High), PE-M(Polyether-Medium), PE-L(Polyether-Low)

本品为聚醚系消泡剂,可将细胞毒性抑制到非常低的程度。根据粘度的不同,分为PE-H,PE-M,PE-L三种。一般来说,粘度越低分散性越好。

添加量:对于细胞培养,添加适量本品用于确认各系统的终浓度保持在0.25~0.5%(1L培养基中含0.25~0.5ml)。

用途:  用于细菌·细胞等培养时去除泡沫.

参考数据:1.消泡效果和浑浊(度)的测定.

方法:在小试验管中注入5ml培养基,剧烈振荡后,加入消泡剂。

添加后分别测定10秒钟、5分钟、15分钟的起泡程度,以及当时的浑浊(度)。

                2.细胞毒性试验.

细胞:Vero细胞的subclone(O78株)

                 Viability的判定:Alamar Blue.

                 方法:添加Alamar Blue, 测定LD50.

注意:细胞毒性非常低,用于培养没有问题。可用于各系统的培养。


产品编号

品名

等级

包装

016-17431

Antifoam SI

消泡剂 SI

生化学用

100ml

018-17435

500ml

010-17191

Antifoam PE-H

消泡剂 PE-H (参考)在20℃时,粘度约983cP

生化学用

100ml

012-17195

500ml

010-17211

Antifoam PE-M

消泡剂 PE-M (参考)在20℃时,粘度约325cP

生化学用

100ml

012-17215

500ml

013-17201

Antifoam PE-L

消泡剂 PE-L (参考)在20℃时,粘度约160cP

生化学用

100ml

015-17205

500ml

qNMR技术文章2–应用NMR进行SI可溯源纯度评价


qNMR技术文章2–应用NMR进行SI可溯源纯度评价

qNMR技术文章2--应用NMR进行SI可溯源纯度评价


产业技术综合研究所  计测标准研究部门 计量标准系统科 斋藤刚、井原俊英



◆序文


  随着2003年食品卫生法中Positive List制度(2006年5月施行)的引入,食品残留农药相关物质的规制幅度强化,日本国内外流通的800种农药被列为规制对象。这不仅直接关系到我们的食品安全,也与国际贸易紧密相关,因此对其分析值的可信赖性要求较高,包含公立机关在内的各检测机构竭力提高并维持如ISO/IEC 17025认证等分析精度管理。在这些分析值精度管理中,制作检量线用的标准物质的使用是必不可少的。但即使只从视频卫生法中收录的多种物质入手,标准物质的整理公诚也不容小觑。

  现在市面上有很多评判有机化合物纯度的标准品和制作检量线用的标准液,但是这些化合物质纯度的评判多数是采用色谱法,以JIS规格为标准的相对面积百分比1)来判断的。这也是难以用国际单位体系可溯源法评判有机化合物纯度,和适用化合物受限的起因。面积百分比法是以对检测出的全部分子获取一定的检测感度为前提条件的,因此,样品中若含有检测感度不相同的不纯物就可能会引起纯度检测错误。差数法2)可以一定程度上规避上述问题,但检测过程中必须知道全部不纯物的标准,也难以普遍应用。因此没有被供应为计量可追溯性保证的标准物质。

  为了回应这个问题,和光报道指出已经开发了一种新的残留农药检测用标准物质,它是一种快速便捷且可以准确计量、表达计量可追溯性的方法。

  核磁共振(NMR)法对农药原体的纯度评价极其有效。本文将从获得计量学上准确的测定值、其简便性和广泛的适用范围出发,对其高精度性定量检测的重要条件设定进行解说。



◆NMR定量检测的应用


  根据检测的核种不同,NMR光谱也不一样。最常用的是有机化合物构造解析所应用的氢原子NMR光谱。由于化合物汇总的官能团显示不同的共振频率,得以区分某些化合物中的官能团。另外,相邻的1H等信息有各个峰(自旋耦合结合(J-结合))的分裂表示。因此各峰的面积与共振1H核数成比例。这些是NMR在解析有机化合物构造时不可或缺的特点。

  通过对高分子化合物不同官能团信号强度比的精确检测,可广泛应用于立构规整度和共聚物的单链分析等。另一方面,低分子量有机化合物则无需精确获取面积比,比如相同分子中的甲基和亚甲基的信号面积比几乎可以精确确认为3:2,无需精准检测。

  高分子化合物的定量用必要精度和纯度评价必要精度存在差异,但可比较共聚物的不同单元间的信号强度,同时检测两种不同的有机化合物面积比获取各1H的数量比。换而言之,因为可以比较存在溶液中两种不同凳子的分子数,NMR是直接比较物质量(mol)的方法之一,建议将限定于有机化合物领域的SI可溯源定量法实现普遍应用。

  下面我们将整理介绍SI可追溯性定量检测时不可或缺的NMR信号面积评判法的检测要点。



◆纯度判定是NMR检测条件的设定


  确认NMR信号强度是否定量,可通过一个分子内拥有表达不同化学位移的多个官能团的分子,检测1H信号强度是否精确测定来实现。在比较面积时,期望在不应用窗口函数的情况下严格校正傅里叶变换频谱的相位,并尽可能多地设置和积分对应于每个峰宽的积分间隔。

  NMR定量检测过程中,用90°脉冲激发样品时必须设定定量峰的反复操作等待的时间为最长纵缓和时间(T1)的5倍以上并累计5)6)。表1显示出了不同脉冲角度,TR/T1和缓和磁化的离乱关系。但该条件意味着90°脉冲后平衡此话强度可恢复到原来状态的99%。纯度检测中TR设定较长,偏差就会变小。例如:预期99.9%的磁化要恢复状态的话,就需要以分子内最长峰T1的7倍为目标设定TR。用除90°脉冲以外的小角度脉冲激发样品时,与90°脉冲比较,一次累计可得信号强度60°脉冲式约为87%,30°脉冲时仅有50%。因此要求的TR不能短,所以纯度检测时还是使用90°脉冲为佳。


表1. 平衡磁化设置为1时,TR/T1与缓和磁化的理论对戏与其对PA的依赖性

3

5

7

9

11

90°

0.95021

0.99326

0.99909

0.99988

0.99998

60°

0.97447

0.99662

0.99954

0.99994

0.99999

30°

0.99303

0.99909

0.99988

0.99998

1.00000


  评判反复操作等待时间设定所必须的T1大多使用Inversion Recovery法。脉冲系列以TR -π- TD -π/2-acquire表示,其中π和π/2分别表示180°脉冲和90°脉冲,TD是检测T1的变量,检测是应设置多个不同的TD反复检测。图1表示trans –permetrin光谱,TD十分短(TD=6ms)和十分长(TD=25.6)时,各峰值呈上下逆转。改变TD,TD短的时候光谱峰向下,TD长时光谱峰方向逆转。峰从下方向逆转到上方向时,则可知T1是光谱上的峰强度TD为0是的1.44倍(l/In2)。若TD=30s时确认全部峰是否为T1的7倍以上的话30÷7÷1.44,即设定TD约为3s时,可充分确认到全部峰的方向都是向上的。可简单且短时间内进行实验推荐用于确认NMR定量性检测。


qNMR技术文章2--应用NMR进行SI可溯源纯度评价

  图1. 用Inversion-Recovery法和不同的TD检测出的trans –permetrinCD3CN溶液光谱1.94ppm和2.1ppm峰是溶剂和水来源的信号。可看出由于短TD,T1短峰发生反转,T1长峰则不发生反转。

  与反复操作等待时间的设定同等重要的是光谱幅度,使其比通常使用的光谱幅度更宽很重要。尤其需要特别注意的是没有配备过采样功能的NMR装置和数字滤波器。数字化NMR数据时用音频滤波器排除光谱外侧杂音的影响,这个影响与光谱中心附近的信号强度相比,可得知光谱两端信号强度弱。换而言之,因无法准确评判光谱两端的信号强度,所以通过扩增光谱幅度来规避上述问题是十分必要的。

  设定这些条件之后,有望在线圈充分良好的条件下进行高信号/杂音比的光谱检测。



◆农药纯度检测应用


  已将纯度检测不确定性控制在1%为目标,通过农药原料1HNMR进行纯度检测。在内标准物质中使用产综研认证标准物质1 , 4 -dichlorobenzene(NMIJ CRM 4039 -a)前先用经过NMR纯度校正的4 -bis(trimethylsilyl)benzene-d 4 ( 1 , 4 -BTMSB-d4)、3(- trimethylsilyl)- 1 -propanesulfonic acid-d 6 sodium salt(DSS-d6)、benzoic acid或dimethyl sulfone。将要进行纯度判定的农药原料(下面成判定样品)和内标准物质分别进行精密的称量后,加入氘代溶剂制备成溶液,在上述定量检测条件下进行检测。从得到的光谱中判定需要定量的判定样品和内标准物质的峰,通过考虑原子核数量和溶液中的摩尔比来获得定量值。此处用较为适合的典型实验条件(表2),将适用NMR实验判定样品总结在表3中。表中除了列出判定样品是否可用NMR法进行纯度判定外,同时还列出了是否适合通过差示扫描量热仪(DSC)采用凝固点降低法来进行纯度判定。PCP分子中只存在-OH信号不适合纯度检测,无法进行判定。纯度检测的不确定性与内标物质及判定样品的称量、判定峰、NMR的反复操作检测和内标物质的纯度相关外,还判定NMR信号的缓和和装置原有的偏差,担这些不确定性在哪一个判定样品上都不足1%,因而可以保证定量精度。


表2. 典型的NMR检测条件

NMR装置

Varian UNITY INOVA

Varian   NMR Systems*

JEOL   JNM-ECS400

探测器

Dual Broadband

Dual Broadband

TH5-ATFG2D

1H共振频率

599.90MHz

599.90MHz

398.78MHz

观测光谱幅度

59970Hz

59523.8Hz

39904.2Hz

脉冲幅度

11μs

11μs

10μs

脉冲角度

90°

90°

90°

捕获时间

4s

4s

4s

重复等待时间

60s~90s

60s ~ 90s

60s ~ 90s

累计次数

8 or 32

8 or 32

8 or 32

虚拟扫描

2

2

2

温度

25℃

25℃

25℃

13C核解耦

只在捕获时间内

只在捕获时间内

只在捕获时间内

去耦序列

WURST408) or GARP9)

WURST40

MPF810)

*UNITY INOVA分光计更新装置

 

表3. NMR等纯度判定的判定样品一览表

  同时列出了DSC凝固点降低法作为NMR的比较对象。


No.

判定样品

纯度评判法

No.

判定样品

纯度评判法

NMR

DSC

NMR

DSC

1

Trichlorfon( DEP)

42

Glyphosate

2

Procymidone

43

Pyributicarb

3

EPN

44

trans-Permethrin

4

Etofenprox

45

Flufenoxuron

5

Propyzamide

46

NAC

6

Benthiocarb

47

Bensulide

7

Malathon

48

Chlorfl uazuron

8

Fenobucarb(BPMC)

49

Silafl uofen

9

Atrazine

50

Isoxathion

10

Echlomezol

51

Coumaphos

11

Pendimethalin

52

MCP

12

Bethrodine

53

Prochloraz

13

Chloroneb

54

Triadimefon

14

Simetryne

55

Diazinon

15

Thiuram

56

Flazasulfuron

16

Isoprothiolane

57

Imazosulfuron

17

Bifenox

58

Cyprodinil

18

Probenazole

59

Diflubenzuron

19

Pyridaphenthion

60

Famoxadone

20

2,4-PA

61

Trifloxystrobin

21

DCMU

62

Tiadinil

22

Iprodione

63

Acephate

23

MCPP

64

Thiamethoxam

24

Fenitrothion( MEP)

65

Tolclofos-methyl

25

Dithiopyr

66

Warfarin

26

Mefenacet

67

Teflubenzuron

27

Bensulfuron-methyl

68

Linuron

28

Esprocarb

69

Flusulfamide

29

Mepronil

70

Cymoxanil

30

Thiophanate

71

Indanofan

31

Metalaxyl

72

Pyrazoxyfen

32

Vinclozoline

73

Thiacloprid

33

Asulam

74

Chlorfenapyr

34

Flutolanil

75

CNP-amino

35

Dimepiperate

76

Chloro IPC

36

Molinate

77

Methyl   Thioacetohydroxamate

37

Cumyluron

78

Pyrimethanil

38

cis -Permethrin

79

Phosalone

39

Anilofos

80

XMC

40

PCP

81

Bifenthrin

41

Myclobutanil

82

Daminozide

 


◆结语


  可见NMR可以广泛引用于保证SI可追溯性的有机化合物纯度检测。NMR纯度检测法采用适当的国家标准可简单实现SI可追溯性,是有高度信赖性的分析法。NMR定量检测法操作简便,适用范围广泛,能迅速准确对有机化合物含量进行确认,不仅在日本国内甚至在国际间都背负很高期望,我们期望本技术能有更进一步的发展。

 


◆定量NMR(qNMR)用内标准物质


产品编号

产品名称

规格

包装

024-17031

1,4-BTMSB-d4 Reference Material

氘代1,4-BTMSB-d4标准品

TraceSure

50mg

044-31671

DSS-d6 Reference Material

DSS-d6标准品

TraceSure

50mg

 

点击此处查看相关产品


Denver丹佛SI-603电子天平

Denver丹佛SI-603电子天平

产品型号: SI-603 品  牌: 丹佛Denver

Denver丹佛SI-603电子天平、精密天平、毫克级天平(千分之一天平)、药物天平,除LCD背景色外, 相当于赛多利斯天平CPA623S(CPA623S为蓝色背景光LCD屏,丹佛SI-603为普通色——主机仅此区别)。

型号 量程 可读性 称盘尺寸 重复性 线性 平均响应时间
SI-603 600g 0.001g Φ114mm ≤±1mg ≤±2mg ±1s

Denver丹佛SI-603电子天平,SUMMIT系列全自动内校型进口天平,全世界*卓越的称量速度。丹佛天平SI-603可选择多点线性校准,SUMMITI系列天平采用*新的80MHz Renesas H8S CPU芯片, 获得出众的称量速度。

丹佛SI-603技术特色:
◇特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力    
◇四重智能数字滤波    
◇全自动内校,*先进的多点线性校准技术 
◇触感反馈式按键,其中去皮键为左、中、右触点设计    
◇全程温度补偿    
◇全自动故障诊断    
◇超载保护    
◇双级一体传感器    
◇应用程序:计数、动物称重、百分比称重、净重求和、单位转换
◇超高速微处理器,测量结果更快    
◇*新复合线路板核技术,线路集成度更高    
◇超大背光LCD显示屏,简洁的英文提示菜单    (赛多利斯CPA623S为蓝色背景光LCD屏, 主机仅此区别)
◇内置RS232接口,符合GLP标准    
◇可设置时间、日期及操作者ID号    
◇水平支脚和水平仪,确保天平稳定;水平气泡前置,方便调节水平  
◇下部吊钩,满足大体积称量    
◇不锈钢称量,方便清洗    
◇保修期一年

Denver丹佛SI-403电子天平

Denver丹佛SI-403电子天平

产品型号: SI-403 品  牌: 丹佛Denver

Denver丹佛SI-403电子天平、精密天平、毫克级天平(千分之一天平)、药物天平,除LCD背景色外, 相当于赛多利斯天平CPA423SCPA423S为蓝色背景光LCD屏,丹佛SI-403为普通色——主机仅此区别)。

型号 量程 可读性 称盘尺寸 重复性 线性 平均响应时间
SI-403 400g 0.001g Φ114mm ≤±1mg ≤±2mg ±1s

Denver丹佛SI-403电子天平,SUMMIT系列全自动内校型进口天平,全世界*卓越的称量速度。丹佛天平SI-403可选择多点线性校准,SUMMITI系列天平采用*新的80MHz Renesas H8S CPU芯片, 获得出众的称量速度。

丹佛SI-403技术特色:
◇特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力    
◇四重智能数字滤波    
◇全自动内校,*先进的多点线性校准技术 
◇触感反馈式按键,其中去皮键为左、中、右触点设计    
◇全程温度补偿    
◇全自动故障诊断    
◇超载保护    
◇双级一体传感器    
◇应用程序:计数、动物称重、百分比称重、净重求和、单位转换
◇超高速微处理器,测量结果更快    
◇*新复合线路板核技术,线路集成度更高    
◇超大背光LCD显示屏,简洁的英文提示菜单    (赛多利斯CPA423S为蓝色背景光LCD屏, 主机仅此区别)
◇内置RS232接口,符合GLP标准    
◇可设置时间、日期及操作者ID号    
◇水平支脚和水平仪,确保天平稳定;水平气泡前置,方便调节水平  
◇下部吊钩,满足大体积称量    
◇不锈钢称量,方便清洗    
◇保修期一年

 

Denver丹佛SI-203电子天平

Denver丹佛SI-203电子天平

产品型号: SI-203 品  牌: 丹佛Denver

Denver丹佛SI-203电子天平、精密天平、毫克级天平(千分之一天平)、药物天平,除LCD背景色外, 相当于赛多利斯天平CPA223S(CPA223S为蓝色背景光LCD屏,丹佛SI-203为普通色——主机仅此区别)。

型号 量程 可读性 称盘尺寸 重复性 线性 平均响应时间
SI-203 200g 0.001g Φ114mm ≤±1mg ≤±2mg ±1s

Denver丹佛SI-203电子天平,SUMMIT系列全自动内校型进口天平,全世界*卓越的称量速度。丹佛天平SI-203可选择多点线性校准,SUMMITI系列天平采用*新的80MHz Renesas H8S CPU芯片, 获得出众的称量速度。

丹佛SI-203技术特色:
◇特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力    
◇四重智能数字滤波    
◇全自动内校,*先进的多点线性校准技术 
◇触感反馈式按键,其中去皮键为左、中、右触点设计    
◇全程温度补偿    
◇全自动故障诊断    
◇超载保护    
◇双级一体传感器    
◇应用程序:计数、动物称重、百分比称重、净重求和、单位转换
◇超高速微处理器,测量结果更快    
◇*新复合线路板核技术,线路集成度更高    
◇超大背光LCD显示屏,简洁的英文提示菜单    (赛多利斯CPA223S为蓝色背景光LCD屏, 主机仅此区别)
◇内置RS232接口,符合GLP标准    
◇可设置时间、日期及操作者ID号    
◇水平支脚和水平仪,确保天平稳定;水平气泡前置,方便调节水平  
◇下部吊钩,满足大体积称量    
◇不锈钢称量,方便清洗    
◇保修期一年

 

丹佛分析天平SI-234

丹佛分析天平SI-234

产品型号: SI-234 品  牌: 丹佛Denver

Denver丹佛分析天平SI-234,内校式电子天平、万分之一天平,赛多利斯天平BSA224S-CW孪生产品。 

型号 量程 可读性 称盘尺寸 重复性 线性 平均响应时间
SI-234 230g 0.1mg Φ90mm ≤±0.1mg ≤±0.2mg ±2s

 
Denver丹佛电子天平SI-234,SUMMIT系列全自动内校型进口天平,全世界*卓越的称量速度。丹佛SI-234天平可选择多点线性校准,SUMMIT系列天平采用*新的80MHz Renesas H8S CPU芯片, 获得出众的称量速度。
丹佛SI-234技术特色:
◇特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力    
◇四重智能数字滤波    
◇全自动内校,可多点线性校准  
◇触感反馈式按键,其中去皮键为左、中、右触点设计    
◇全程温度补偿    
◇全自动故障诊断    
◇超载保护    
◇双级一体传感器    
◇应用程序:计数、动物称重、百分比称重、净重求和、单位转换
◇超高速微处理器,测量结果更快    
◇*新复合线路板核技术,线路集成度更高    
◇超大背光LCD显示屏,简洁的英文提示菜单    
◇内置RS232接口,符合GLP标准    
◇可设置时间、日期及操作者ID号    
◇水平支脚和水平仪,确保天平稳定;水平气泡前置,方便调节水平  
◇下部吊钩,满足大体积称量    
◇不锈钢称量,方便清洗    
◇保修期一年
 

丹佛SI-114分析天平

丹佛SI-114分析天平

产品型号: SI-114 品  牌: 丹佛Denver

Denver丹佛电子天平SI-114,内校式万分之一天平,分析天平,赛多利斯天平BSA124S-CW同生产线。 

型号 量程 可读性 称盘尺寸 重复性 线性 平均响应时间
SI-114 110g 0.1mg Φ90mm ≤±0.1mg ≤±0.2mg ±2s

 
Denver丹佛电子天平SI-114,SUMMIT系列全自动内校型进口天平,全世界同级别天平中*卓越的称量速度。丹佛SI-114天平可选择多点线性校准,SUMMIT系列天平采用*新的80MHz Renesas H8S CPU芯片, 获得出众的称量速度。

SI-114天平技术特色:
◇特制纯铝防风罩背板,全面提升天平的防静电能力    
◇四重智能数字滤波    
◇全自动内校,可多点线性校准  
◇触感反馈式按键,其中去皮键为左、中、右触点设计    
◇全程温度补偿    
◇全自动故障诊断    
◇超载保护    
◇双级一体传感器    
◇应用程序:计数、动物称重、百分比称重、净重求和、单位转换
◇超高速微处理器,测量结果更快    
◇*新复合线路板核技术,线路集成度更高    
◇超大背光LCD显示屏,简洁的英文提示菜单    
◇内置RS232接口,符合GLP标准    
◇可设置时间、日期及操作者ID号    
◇水平支脚和水平仪,确保天平稳定;水平气泡前置,方便调节水平  
◇下部吊钩,满足大体积称量    
◇不锈钢称量,方便清洗    
◇保修期一年
 

Si-Dma For Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging 品牌:Dojindo


Si-Dma For Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging

品牌:Dojindo
CAS No.:
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

341-91911

1 set 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

致力于可溯源至SI的氨基酸检测


致力于可溯源至SI的氨基酸检测

致力于可溯源至SI的氨基酸检测

产业技术综合研究所 计量标准综合中心 加藤爱、山崎太一、井原俊英


1. 前言


氨基酸虽然是我们生活中常见的化合物,但由于其结构具有多样性,在分析上具有一定难度。目前已开发了多种氨基酸的分析方法,其中以色谱法为主流分析方法。色谱法的发展对于氨基酸分析的普及起到了重要作用。

近年来,氨基酸分析法不仅在常规的生化领域和食品领域广泛应用,在临床化学领域和医学领域中也得到了广泛应用,其检测结果的可靠性也逐渐备受关注。对于氨基酸分析仪中校准的关键——氨基酸标准溶液,日本产业技术综合研究所·计量标准综合中心(AIST/NMIJ)近十年以来,一直致力于提供可溯源至国际单位制(SI)的氨基酸混合标准溶液。

在FUJIFILM Wako推出可溯源至SI的氨基酸混合标准溶液之际,本文将围绕这一主题展开对NMIJ中的基础研究、标准物质的开发、以及混合标准液的技术转让的相关内容进行介绍。

 


2. 氨基酸认证标准物质(CRM)的开发


为确保氨基酸检测的计量溯源性,我们就17种蛋白水解氨基酸开发了具有高计量品质的氨基酸认证标准物质(Certified Reference Material; CRM)。对于CRM的形式,考虑到固体粉末有着优异的稳定性,以及用户可制备任何类型、浓度的溶液,可选择不同溶剂的优点,最终选择以固体粉末的形式进行供应。

对于氨基酸CRM纯度的定量,符合基准测量方法(Primary method)的方法有两种,一种是利用氨基酸碱性的非水滴定法,一种是滴定氨基酸所含氮的氮分析法。上述两种方法,滴定用试剂的高氯酸/乙酸溶液和硫酸的当量,分别通过邻苯二甲酸氢钾标准物质(NMIJ CRM 3001-a)和碳酸钠标准物质(NMIJ CRM 3005- )进行标定,以确保计量结果可溯源至SI1

使用非水滴定法和氮分析法定量氨基酸时,需知道盐以及氮的纯度,但这两种方法都存在同时检测到其他相关杂质(主成分以外的胺)的可能性。实际上,部分候选标准物质中都含有不可忽略的相关杂质。

因此,利用滴定法确定氨基酸的纯度时,需准确定量相关杂质。通过结合柱后衍生化检测法(OPA法等)、柱前衍生化检测法(AQC法)、LC/MS等多种分离分析方法,可以准确定量相关杂质并构建评估系统2),并将这些定量结果结合到滴定值上,求出氨基酸纯度。

我们对非水滴定法和氮分析法所得出氨基酸的纯度进行加权平均后,对17种氨基酸的纯度进行定量,最终CRM的扩展不确定度小于0.3%,纯度大于99.7%。另外,为满足氨基酸的光学异构体分析需求,还评估了CRM中甘氨酸以外的氨基酸的D型,并以“L型氨基酸的纯度“和”不考虑光学异构体时的纯度“两个作为认证值。

以此方式进行纯度评估的17种氨基酸CRM可在NMIJ网站上查询,并通过“相关从业人员”获取。CRM 随附的证书记录了认证值、认证值的确定方法、计量溯源性以及认证时的氨基酸相关杂质含量和D型氨基酸含量作为参考信息。

 

 

3. 氨基酸可溯源标准物质(TRM)的开发


对于蛋白氨基酸等(包含尿素以及氯化铵),产业技术综合研究所也在不断地完善认证标准物质(NMIJ CRM)。但是关于非蛋白氨基酸,从资源的角度考虑,由于早期开发比较困难,一直都没有完善的NMIJ CRM。因为其主要以混合标准溶液的形式提供,因此试剂厂家并没有开发以最高计量品质为目标的NMIJ CRM,而是通过“委托测试”的方式进行,即委托第三方评估预先分装并装瓶的原材料的纯度,并发布校准证书。

此外,对于两年开发22种氨基酸标准品的申请,在保证计量溯源性的同时还要重视速度,所以我们选择了与蛋白氨基酸略有差异的定量方式。除选择需要时间优化检测条件的滴定法,还结合了定量核磁共振光谱(qNMR)的纯度评估,兼顾计量溯源性以及检测效率。使用qNMR 应用于22种非蛋白氨基酸时,纯度的不确定度为0.5~1.9%(置信水平95%)。虽然精确度不及滴定法,但与从滴定法中获得的纯度和不确定度的范围有着良好的一致性3)

与蛋白氨基酸类似,非蛋白氨基酸中杂质的定量通过结合LC/MS和柱后衍生液相色谱和滴定法,先定性、定量出杂质含量为0.01%以上的氨基酸,并减去滴定法获得的检测值来得出纯度。

准确稳定称量原材料对于分装并装瓶原材料、评估纯度,以及正确制备混合标准溶液来说有着重要意义。然而,非蛋白氨基酸几乎没有关于湿度环境和吸湿率相关的定量数据。当我们使用温度与湿度可控的热式重量计量设备进行评估时,在7种非蛋白质氨基酸中观察到明显的吸湿性,因此规定了操作时的湿度上限4)

以上述方式进行纯度评估的22种非蛋白质氨基酸,根据其均一性和稳定性的评估结果,FUJIFILM Wako将其作为有保证的计量可溯源标准物质TRM(Traceable Reference Material)进行供应。

 


4. 确保国际比对时的国际一致性


NMIJ与世界各地计量机构的检测能力的等效性,通过BIPM(国际计量局)的CCQM(物质量咨询委员会)进行评估,并与国际间的计量机构的检测能力进行国际比对,并被国际互认。CCQM对纯度检测、浓度检测、成分分析等多个项目进行国际比对,获得的比较测试结果录入BIPM数据库中,可供查看5)

关于氨基酸相关的纯度检测以及混合标准溶液的制备和检测能力,还进行了L-缬氨酸的纯度检测(CCQM-K55.c)和氨基酸混合标准溶液的浓度检测(CCQM-K148.b)相关的比对测试。NMIJ也参加了这方面的国际比对,在各参加测试的机构中取得优异的结果。

 

 

5. 精确制备混合标准溶液的系统构建及稳定性相关的基础研究


为提供具有计量可溯源性的氨基酸混合标准溶液,并考虑到标准溶液的稳定性,我们决定从开发的41种高纯度标准物质NMIJ CRM (19种)和TRM(22种)中,以L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-色氨酸和2-氨基己二酸外的37种氨基酸为对象构建精确混合标准溶制备系统。

由于人体含有氨基酸,所以在实验操作过程中比较容易造成污染。此外,还要注意制备混合标准溶液时,同时处理多种氨基酸时引起的相互污染。从防止吸湿的角度考虑,还需规定天平称量时的湿度上限。为使以上操作可以快速且稳定地进行并且无需依赖于制备人员的熟练度,我们于恒温恒湿实验室安装了配备粉末自动分配装置的天平系统。

由于该系统可将氨基酸单独分装至分装筒内,可减少人为污染以及相互污染。另外,只需更换分装筒就可以自动连续称量任意量的氨基酸,操作十分简单。

即使是老手也要花费半天制备的氨基酸混合标准溶液,若使用该系统制备,则只需1~2个小时,且所有组分都在0.3%的相对标准偏差值以内。

作为氨基酸混合标准溶液认证标准物质开发的重点,我们还对混合标准溶液中各组分的稳定性进行了基础研究。在进行评估时,我们发现市售氨基酸混合标准溶液的热门产品中,均未充分显示氨基酸混合标准溶液中各个组分的稳定性。

因此,使用上述的制备系统,在与热门产品相同的制备条件下(使用0.1 N稀盐酸溶解各氨基酸浓度至2.5 mM)制备氨基酸(17种)混合标准溶液,进行加速测试。结果显示,随着存储温度升高,谷氨酸环化并转化为焦谷氨酸。基于加速测试的结果预测谷氨酸的分解速度,推测冷藏储存时,谷氨酸的浓度含量在1年内最多会下降2%。

而使用较稀的盐酸制备混合标准溶液时,谷氨酸的稳定性得到改善,并且不会影响谷氨酸以外的水解氨基酸的稳定性。因此,优化谷氨酸pKa附近的溶剂pH对于确保谷氨酸的稳定性非常重要。除谷氨酸以外,在侧链也有羧基的2-氨基己二酸也会发生环化反应,所以,优化溶剂的pH对稳定这类结构的氨基酸也很重要6)

 

 

6. 混合标准溶液制备技术的转让


基于上述的研究结果,产业技术综合研究所按照FUJIFILM Wako的研究委托,优化了氨基酸混合标准溶液的氨基酸浓度和溶剂的pH后,评估了各组分的稳定性,最终优化了5个剂型的氨基酸混合标准溶液,并建立了混合标准溶液的制备方法以及氨基酸浓度的评估方法。

最终,产业技术综合研究所将确立的制备方法技术转让予FUJIFILM Wako,通过两方机构进行共同测试,确认了氨基酸混合标准溶液生产现场的制备能力。2019年10月,FUJIFILM Wako取得了氨基酸混合标准溶液生产能力相关的ISO 17304的第三方认证。

致力于可溯源至SI的氨基酸检测

7. 结语


为满足确保计量可溯源氨基酸的供应需求,我们开发了共41种高纯度标准物质NMIJ CRM和TRM。对于其混合标准溶液,也确立了精准的混合标准溶液制备方法以及评估方法。并对标准溶液组分稳定性进行了相关的基础研究,改善存在稳定性问题的组分的长期稳定性。

以这种方式开发的氨基酸混合标准溶液,确保了计量溯源性,并由FUJIFILM Wako进行供应。通过开发新型的高计量学品质和多种类的氨基酸混合标准溶液,为可溯源至SI的氨基酸检测奠定了基础。

 

 

8. 致谢


本研究的一部分基于FUJIFILM Wako委托产业技术综合研究所的研究而得以进行。感谢味之素株式会社,FUJIFILM Wako和产业技术综合研究所的各位研究人员,以及共同参与本研究的各位研究人员,感谢各位你们对本研究的指导和协助。在此,献上我们衷心的感谢。

◆参考文献


1. Kato, M. et al. : Anal. Sci., 31, 805 (2015).

2. Kato, M. et al. : Accred. Qual. Assur., 18, 481 (2013).

3. Saito, N. et al. : Bunseki Kagaku63 (11), 909 (2014).

4. Kato, H. et al. : Bunseki Kagaku66 (5), 375 (2017).

5. https://kcdb.bipm.org/AppendixB/KCDB_ApB_search.asp

6.  Kato, M. et al. : Anal. Sci., 33, 1241 (2017).


点击此处查看产品详情