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品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.： 储存条件：2-10℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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194-18181 |
for Genetic Research | 50mL | – | 咨询 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
DNA & siRNA转染试剂
ScreenFect™ A plus
ScreenFect™ A plus
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ScreenFect™ UP-293
用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂
用于重组蛋白大量表达系统的DNA转染试剂
ScreenFect™ UP-293
本产品是适用于FreeStyle293 Expression System和Expi293 Expression System的转染试剂，适用于大量表达重组抗体和蛋白。转染后添加ScreenFect™ UP-293 Booster，可大幅度提高细胞中蛋白的表达量。
◆特点
● 性价比高
● 高重组蛋白表达量
◆试剂盒内容
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组成试剂 |
100 mL用 |
1 L用 |
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ScreenFect™ UP-293 Transfection Reagent |
200 μL×1瓶 |
1 mL×2瓶 |
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ScreenFect™ UP-293 Dilution Buffer |
6.7 mL×1瓶 |
67 mL×1瓶 |
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ScreenFect™ UP-293 Booster |
500 μL×1瓶 |
5 mL×1瓶 |
本产品仅含转染试剂，不含细胞及培养基。
◆所需其他试剂
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FreeStyle293 Expression System |
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细胞 |
FreeStyle293-F Cells |
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培养基 |
FreeStyle293 Expression Medium |
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稀释缓冲液 |
Opti-MEMI Reduced Serum Medium |
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Expi293 Expression System |
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细胞 |
Expi293F Cells |
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培养基 |
Expi293 Expression Medium |
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稀释缓冲液 |
不需要 |
*用ScreenFect™ UP-293附带的Dilution Buffer稀释。
◆数据
■荧光素酶表达量的比较
用各种转染试剂向FreeStyle293-F细胞和Expi293F细胞中导入分泌型Luc表达载体。
培养规模为30 mL，96小时后收集培养上清，然后用荧光素酶检测法检测发光强度。
FreeStyle293-F细胞：与其他公司的A产品相比，荧光素酶表达量较高。
Expi293F细胞：与其他公司的B产品相比，的荧光素酶表达量相近。
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-80201 | ScreenFect™ UP-293 | 100 mL用 | 基因研究用 | |
| 290-80203 | ScreenFect™ UP-293 | 1 L用 | 基因研究用 |
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高性能基因导入试剂
下面为大家介绍使用 ScreenFect ™ siRNA 向 HeLa 细胞导入 siRNA 数据的实验成果及逆转染（1-STEP）Protocol。
◆向 HeLa 细胞的逆转染例子（24孔培养板）
细胞的前期培养
1. 用适当的培养容器（T-75 烧瓶），将 HeLa 细胞培养至半融合状态。
配制转染试剂
1. 准备两支 1.5 mL 灭菌试管。
2. 在其中一支试管里加入 24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。
3. 再往步骤２的试管里加入 0.5 μL 的 ScreenFect ™ siRNA reagent，使全部容量达到 25 μL。…溶液（A）
（ScreenFect ™ siRNA reagent在使用前进行涡旋处理。）
4. 在另一支试管里加入 24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。
5. 再向步骤４的试管里加入 1 μL 的 5 μmol/L PIK3CB siRNA 溶液（5 pmol）…溶液（B）
6. 将溶液（B）全部添加至溶液（A）的试管中。
7. 轻敲试管，使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。
8. 在室温下孵浴 5~20 分钟。
配制配制细胞悬浮液
1. 从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。
2. 去除培养基，用 PBS 清洗一次。
3. 向烧瓶里添加 2 mL 胰蛋白酶溶液后，放入室温、5% CO2 的恒温箱里培养，直到细胞从培养容器中脱落。
4. 加入约 5 mL FBS 添加培养基使反应停止。
5. 利用移液器使细胞分散，将全部培养液转移到离心管中。
6. 150×g 离心，5 分钟。
7. 去除上清时不要去掉颗粒物。
8. 添加 5~10 mL 新的培养基，利用移液器使细胞分散。
9. 用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。
10. 检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算，以此配制 2.0×105 cells/mL 的细胞悬浮液（配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。）
转染
1. 将 500 μL 在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。
2. 将 50 μL 在【配制转染试剂】步骤８中孵浴的 DNA-lipid complex 添加至细胞培养板里，轻摇培养板使溶液混合（也可以先往细胞培养板里加
入 50 μL DNA-lipid complex，再加入 500 μL 细胞悬浮液）。
3. 放入 CO2 的恒温箱里培养 24~48 小时后即可进行后续实验。
◆实验数据
用逆向转染法和正向转染法向 HeLa 细胞进行 PIK3CB siRNA 的导入实验，通过实时定量 PCR 检测出 PIK3CB mRNA 的表达量。将定量结果得出的敲减效率，与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较，结果显示，ScreenFect ™ siRNA 拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。
【逆向转染（1-STEP）】
【正向转染（2-STEP）】
◆产品列表
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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299-75001 |
ScreenFect ™ siRNA转染试剂 ScreenFect ™ siRNA |
基因研究用 |
0.2 mL |
|
295-75003 |
1 mL |
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|
293-75004 |
1 mL×5 |
ScreenFect™ siRNA
ScreenFect™ siRNA
siRNA Transfection Reagent
◆原理
ScreenFect ™ siRNA 是点击化学※ 筛选实验选出的阳离子脂质体的新型转染试剂，适用于转染多种真核细胞（HeLa，HEK293，MEF cell 等），可直接添加于血清培养基。由于低细胞毒性不含任何有毒有害成分，转染后无须更换培养基。
◆特点•优势
• 高基因沉默效率 & 极低细胞毒性 & siRNA 使用量低至 1 nM
• 提供能优化 siRNA 转染的缓冲液
• 转染后无须更换培养基
• 能与血清兼容
• 可用于高通量筛选
• 保质期长达 12 个月
◆产品性能
基因沉默效率 细胞毒性
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细胞系：小鼠胚胎成纤维细胞 细胞培养板：24 孔 转染靶位点：LRP6 |
细胞株：HEK293 细胞 细胞培养板：96 孔 染色方法：赫斯特染色 |
ScreenFectTM siRNA 导入条件
siRNA：1 pmol
转染试剂：0.1 μL
悬浮细胞：420 μL
◆案例•应用
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 299-75001 | ScreenFect ™ siRNA Transfection Reagent | 0.2 mL | – | – |
| 295-75003 | ScreenFect ™ siRNA Transfection Reagent | 1 mL | – | – |
| 293-75004 | ScreenFect ™ siRNA Transfection Reagent | 5 × 1 mL | – | – |
DNA & siRNA 转染试剂
ScreenFect™ A plus
ScreenFect A+
DNA & siRNA 转染试剂！
◆原理
ScreenFect ™A+是通过点击化学（Click Chemistry）方法筛选出的阳离子脂质体转染试剂。适用于各种真核细胞，也可直接添加到含有抗生素或者血清的培养基中。使用 ScreenFect ™A+转染试剂可将 DNA 和 siRNA 转入常见实验室培养的细胞株（HeLa、HepG2、MDCK 等）、干细胞（小鼠ES细胞等），血液细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264 等），小胶质细胞和原代细胞。由于低细胞毒性，不含有任何有毒有害成分，转染后无需更换培养基。
※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012
◆优点、特色
● DNA 用量少。
● 高效一步转染法。
● 转染效率高＆细胞毒性低。
● 使用成本低
◆案例、应用
【ScreenFect ™ A+ 转染性能（流式细胞仪检测）】
用于不同细胞的高效脂质体转染试剂!!
用于不同细胞的高效脂质体转染法!!
适用于难转染的悬浮细胞!!
一步法和两步法实验流程的比较
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产品名称 |
ScreenFect ™ A plus |
Ａ厂家新产品 （+试剂） |
Ａ厂家产品 |
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推荐的实验流程 |
一步法 |
两步法 |
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实验用时 |
２天 |
３天 |
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所需DNA量 |
低 |
高 |
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细胞数目调整 |
灵活 |
不灵活 |
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胰酶消化 |
需要 |
需要 |
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适于高通量筛选 |
+++++ |
+ |
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培养基的更换 |
取决于细胞系 |
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一步法比两步法节省24小时！
ScreenA+.pdf
高性价比的高性能基因导入试剂
ScreenFect ™ 通信
基因导入人 iPS 细胞实验数据
介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例，供您参考。
◆导入人iPS细胞（201B7株）的转染操作实例
在这里，我们将介绍一些使用 StemSure® hPSC 培养基Δ（产品编号：197-17571）的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤，请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol
<转染试剂的配制>
将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。
< Matrigel 包被孔板>
1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固，请避免在室温下溶解。
2. 用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。
3. 稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。
4. 在室温下孵育１小时以上。
<细胞悬液的配制>
1. 将 StemSure® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻，并在一周内使用。
2. 将 bFGF（产品编号：064-05381,068-05384）按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培养基△中，配制成完全培养基（以下称为 sshPSC 培养基）。
3. 使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。
4. 将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中（以下称为 ROCKi+培养基）。
5. 去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基，用 PBS（-）清洗细胞一次。
*请在细胞汇片达到80％且处于对数增殖期时进行细胞转染。
6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。
7. 在 37°C，5％CO2 培养箱中静置５分钟。
8. 用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基，将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。
9. 转移至 15 mL离心管中。
10. 室温下 1000 rpm（约170×g）离心３分钟。
11. 去除上清，用ROCKi+培养基重悬细胞。
12. 计算活细胞的数量。
13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×105 cells/mL。
<转染>
添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中，使用移液器充分混匀，并接种在 12 孔板中。
※要点
接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。
◆实验数据
通过反向转染（1-STEP）将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞（201B7株），并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。
<StemSure® hPSC 培养基Δ的使用>
细胞数：5×105 cells/well
质粒 DNA 量：4 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
<mTeSR1 培养基的使用>
细胞数：5 x 105 cells/well
质粒 DNA 量：1 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA数量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
◆使用上的注意
● 建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。
● 建议基因导入时的细胞数约为 5×105 cells/well。
● 当质粒 DNA 量多时，导入基因的表达量高会引起细胞死亡。
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
293-77101 |
ScreenFect ™ A plus |
基因研究用 |
0.2 mL |
|
299-77103 |
1 mL |
||
|
297-77104 |
1 mL×5 |
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[1] |
Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549. |
|
[2] |
Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014). |
|
[3] |
Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor." |
|
[4] |
Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3) |
|
[5] |
Wakimoto, Hiroaki, et al. "Targetable signaling pathway mutations are associated with malignant phenotype in IDH-mutant gliomas." Clinical Cancer Research (2014). (2) |
|
[6] |
Fischer, Simon, et al. "Breaking limitations of complex culture media: Functional non-viral miRNA delivery into pharmaceutical production cell lines." Journal of biotechnology 168.4 (2013): 589-600. |
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[7] |
Bai, Dongmei, et al. "Regulation of the HDM2-p53 pathway by ribosomal protein L6 in response to ribosomal stress." Nucleic acids research 42.3 (2014): 1799-1811. |
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[8] |
Liu, Xing, et al. "Isocitrate dehydrogenase 2 mutation is a frequent event in osteosarcoma detected by a multi‐specific monoclonal antibody MsMab‐1." Cancer medicine 2.6 (2013): 803-814. |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 293-77101 | ScreenFect™ A plus | 0.2 mL | – | – |
| 299-77103 | ScreenFect™ A plus | 1 mL | – | – |
| 297-77104 | ScreenFect™ A plus | 5 x 1 mL | – | – |
