GenomONE®–Neo EX 仙台病毒包膜转染试剂
可用于DNA、siRNA、ODN及蛋白转染!
◆原理
待转移的分子(如DNA,蛋白,Antisense Oligonucleotide, siRNA等)与 HVJ-Envelope(HVJ-E)混合后,形成了 HVJ-E 载体。利用病毒衣壳蛋白的侵染能力,在融合蛋白(F)的作用下,直接与细胞融合,将分子转入目标细胞或组织。
* HVJ-E:Hemagglutinating Virus of Japan Envelope。
** 现已有200多篇文献使用该试剂盒,如需样本案例,请向我司索取。
◆优点、特色
目前市面上独一无二的转染试剂盒,可用于细胞、组织和活体动物。可用于:
siRNA
少量 siRNA 也可高效发挥敲除作用,无需化学修饰siRNA,高表达量。
DNA
无论序列长短、线性或环状均可
Oligonucleotides
DNA、RNA
蛋白
保持酶和抗体的功能性与特异性
体内转染 !!
大量操作和文献引用证明HVJ-E载体可直接将目标分子转移到活体动物产生作用。
高通量筛选
可同时转染多种分子
1. 运用范围广
GenomONE HVJ-E 载体试剂盒可将多种分子(质粒 DNA、siRNA、寡核苷酸、蛋白、抗体等)转进培养细胞(贴壁和非贴壁细胞)和组织。也可用于敏感原代细胞和 活体动物转染。每种领域的GenomONE®-Neo EX 运用情况,均有大量文献报道。(如需文献列表,请向我司索取)
2. 安全性
与阳离子脂质体不同,GenomONE®-Neo EX 是通过膜融合作用将分子导入细胞,而脂质体转染的内吞作用可能造成转染分子经溶酶体作用而降解。GenomONE®-Neo EX 内含完全灭活的HVJ病毒颗粒,其具有侵染力而无潜在增殖能力,使用非常安全,无需特殊的防护措施
3. 方便简单
GenomONE 即开即用,试剂盒内包含了操作中主要使用的 HVJ-E 冻干粉和各种辅助试剂
◆案例、应用
GenomONE®-Neo EX 和传统的脂质体转染和电穿孔法相比,有更高的转染效率和更低的细胞毒性,可更有效的发挥 siRNA 的 knock-down 作用。
■ in vivo
【大鼠颌下腺逆行注射siRNA】
Ca2+-dependent Cl channel protein(rCLCA)表达的特异性抑制。
免疫染色
non-injection side rCLCA siRNA-injection side
rCLCA siRNA(2 nmol)和GenomONE-Neo(2AU)混合后,以逆行注射的方式注入大鼠颌下腺。四十八小时后,用免疫染色检验 siRNA 注射对氯离子通道蛋白表达的抑制作用。
ST:纹状管,G:颗粒曲管,A:腺泡
【相关文献】
K. Ishibashi et al., J. Dent. Res., 85(12), 1101-1105 (2006).
■ in vitro
【难转染细胞——U937 细胞 RNAi】
总所周知,用脂质体和电转的方法将 siRNA 转到 U937 人单核细胞白血病细胞中非常困难,但我们通过实验证明,siRNA 与 GenomONE-Neo 结合后转染该细胞,其 knock-down 效率可达85%以上。
♦ U937 细胞经 siRNA 转染72小时后收集,用 RT-PCR 和 WB 分别检测 mRNA 和蛋白量的变化情况。
Real-time PCR Western blotting
左图:转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后,其对应的 mRNA 减少到14%
右图:转染 Cathepsin G 的特异性 siRNA 后,其蛋白水平减少到15%
【相关文献】
Y. Tsuchiya et al, Free Radical Biology & Medicine, 43, 1604-1615 (2007).
◆试剂盒组成
Cat. #
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Freeze-dried
HVJ-E
(inactivated HVJ) 0.26 mL/vial (when reconstituted)
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Reagent A
(enhancer for incorporation) 0.5 mL/vial
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Reagent B
(reagent for incorporation) 0.3 mL/vial
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Reagent C
(enhancer for introduction) 1.0 mL/vial
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Buffer
(for suspension and dilution) 6.5 mL/vial
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385-18731
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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381-18733
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4 vials
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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1 vial
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385-18736
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40 vials
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10 vials
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10 vials
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10 vials
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10 vials
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