LDH-细胞毒性检测Wako
LDH-Cytotoxic Test Wako
◆背景
在日本每年在动物实验中死亡的小鼠和大鼠达850万只。其中以兔子眼睛作为药品和化妆品检测的样本,利用德莱兹法观察角膜和结膜的变化检测毒性·刺激性的实验,是非常残忍的。
因此,开发了在in vitro条件下的动物实验代替传统动物实验。此方法可检测培养细胞的毒性和细胞增值能力,不仅可测定因试剂破坏细胞而流出的酶量,还可以使色素渗入到活细胞中。比实验动物法实惠且节省操作,可客观地测定其毒性。
本产品是使用培养细胞对各种试剂的毒性进行简便测定的试剂盒。
可以直接测定细胞膜受到试剂影响而死亡的细胞中的游离LDH(乳酸脱氢酶),灵敏性高。
◆优点
● 可用于吸附细胞·浮游细胞
● 使用酶测定法进行测定,可以对细胞毒性进行精确的定量测定
● 通过调节样品处理时间和显色反应时间可以调节灵敏度
● 使用吸光全自动定量绘图酶标仪可以对多数样品进行测定
● 测定波长:吸光560 nm
◆测定原理
在LDH的作用下乳酸会被丙酮酸氧化,而辅酶会被NADH还原。样品中根据LDH活性按比例生成的NADH会在心肌黄酶的作用下会将硝基蓝四氮唑还原,生成蓝紫色的双蚁酯。在560 nm(±10 nm)下测定这个显色液的吸光度。
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LDH法
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MTT法
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测定对象
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死细胞(&活细胞)
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活细胞
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测定时间(处理样品后)
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1小时内
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4~5小时
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微量毒性的测定
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适用
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适用
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微量死细胞测定时的误差
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小
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大
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结果的客观性
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高
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高
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◆试剂盒构成
显色试剂 硝基蓝四氮唑还原
心肌黄酶,NAD(3.7mg/vial)——————————————5 mL用×10支
缓冲液 DL-乳酸锂(50mg/mL)——————————————————55 mL×11支
反应停止液 盐酸(1mol/L)————————————————————55 mL×11支
96孔微量滴定板—————————————————————————10块(未灭菌)
◆使用方法
实验步骤
96孔板(灭菌)
↓→添加细胞。37℃下过夜
↓→PBS清洗
↓→添加检测物。37℃,15分钟
↓→离心分离
上清液
◆用途
通过LDH法检测各种试剂毒性的试剂盒。