ISOGEN with Spin Column

ISOGEN with Spin Column

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

RNA提取试剂ISOGEN with Spin Column

ISOGEN with Spin Column

ISOGEN with Spin Column

ISOGEN with Spin Column 50次用量


  ISOGEN with Spin Column是总RNA提取试剂ISOGEN与硅胶膜内封离心柱的组合产品。
  使用ISOGEN溶解样品,通过液相分离提取RNA。去除混杂物时,使用Nippon Gene自主设计的离心柱,仅1个小时左右即可提取更高纯度的总RNA。该产品的原理(Boom technology)是在离液离子条件下,使核酸吸附于二氧化硅膜。

◆特点

  • 可提取高纯度全RNA 无需酒精沉淀 从混杂物较多的植物也可提取高纯度全RNA

◆产品列表

ISOGEN with Spin Column (10次用量、50次用量)

产品

容量(10次用量)

容量(次用量)

备注

ISOGEN 

10 mL × 1

50 mL × 1

保存于阴暗处

IsoWash I

9 mL × 1

30 mL × 1

可室温保存

IsoWash II

7 mL × 1

30 mL × 1

可室温保存

TE (pH8.0)

1 mL × 1

5 mL × 1

可室温保存

Spin Column

10瓶

50瓶

保存方法

  冷藏保存(2~10°C)

运输方法 


  本品在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例

操作流程

ISOGEN with Spin Column

Data 1: RNA取量的基准

样本

RNA取量的基准

动物组织

0.5 µg RNA/mg tissue

肝脏

3 µg RNA/mg tissue

肾脏

 2 µg RNA/mg tissue

精巢

 2 µg RNA/mg tissue

培养细胞

Jurkat细胞

4 µg RNA/1 × 106 cells

HeLa细胞

4 µg RNA/1 × 106 cells

植物

卷心菜(幼苗)

0.3 µg RNA/mg tissue

水稻 (叶子)

 0.3 µg RNA/mg tissue

大豆种子

 0.5 µg RNA/mg tissue

玉米种子

   0.5 µg RNA/mg tissue

卷心菜种子

 0.3 µg RNA/mg tissue

郁金香球茎

 0.2 µg RNA/mg tissue

水稻(稻谷)

 0.2 µg RNA/mg tissue

Data 2: 提取的RNA的吸光光谱与电泳结果(与旧方法比较)

  按照操作步骤,从小鼠肝脏(50 mg)及冷冻粉碎后的植物样本(各25 mg)提取RNA,进行吸光色谱检测。同时使用以往的方法(ISOGEN提取后使用异丙醇沉淀纯化)进行同样的检测。

动物样本:小鼠肝脏


植物样本:郁金香球茎


ISOGEN with Spin Column

ISOGEN with Spin Column

  ▶ 根据各RNA溶液的吸光值计算出0.5 µg的RNA,使用甲醛变性琼脂糖凝胶进行电泳。

ISOGEN with Spin Column

 Lane 1: 小鼠肝脏(旧方法)

 Lane 2: 小鼠肝脏(离心柱法)
 Lane 3: 卷心菜(旧方法)
 Lane 4: 卷心菜(离心柱法)
 Lane 5: 郁金香球茎(旧方法)
 Lane 6: 郁金香球茎(离心柱法)
 Lane 7: 水稻稻谷(旧方法)
 Lane 8: 水稻稻谷(离心柱法)
 M: RNA Ladder (0.125 – 6.0 kb
)

1% gel Agarose S, EtBr 染色

  使用动物组织提取的RNA纯度与使用以往方法一样高(将培养细胞作为样本的结果也一样)。使用离心柱法(本产品)植物样本(尤其是球茎、稻谷等)可提取高纯度RNA,且不含在230 nm附近吸收波长最多的多糖类等混杂物。根据电泳结果也可得出这一结论。


◆注意事项

  • 如果您对试剂的基本的知识不了解,请不要使用。

  • ISOGEN 是非医疗用医剧毒物(苯酚制剂),请小心操作。

  • 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。

  • 操作场所保持通风,以免吸入蒸汽。

  • 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗15分钟或以上,并及时就诊。

  • 请按照说明书进行操作。

  • 对于因不按照说明书操作而导致的事故,Nippon Gene不负任何责任。

◆备注

  本产品是实验研究用试剂,请勿用作医疗用途。

◆相关产品

  ·         RNA提取试剂 ISOGEN

  ·         缓冲剂 ddWater, TE(pH 8.0)

  ·         Collection Tube(收集管单品套装)

  ·         ISOSPIN Plant RNA (从植物组织提取RNA)

  ·         ISOSPIN Cell & Tissue RNA (从动物细胞、动物组织提取RNA)

  ·         ISOSPIN Blood & Plasma DNA (从血液、血清、血浆提取DNA)

  ·         Deoxyribonuclease(RT Grade)for Heat Stop

  ·         Deoxyribonuclease(RT Grade)

  ·         DNase I (RNase free)

◆资料 Data Sheet

产品手册

  ·         ISOGEN with Spin Column 产品说明书第三版 (PDF 368KB)


SDS(Safety Data Sheet)

  ·         ISOGEN with Spin Column  安全标签 (PDF)

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
314-07513 ISOGEN with Spin Column 10次用量
318-07511 ISOGEN with Spin Column 50次用量

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒 ISOGEN PB Kit

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒
ISOGEN PB Kit

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒                              ISOGEN PB Kit

从石蜡包埋组织切片提取RNA试剂盒

ISOGEN PB Kit

  本产品是石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒。包含从脱石蜡,Proteinase K 处理组织到利用 ISOGEN-LS 提取RNA,非常简便、短时间(约2小时)即可完成。提取的RNA可用于RT-PCR检测。

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒                              ISOGEN PB Kit

◆特点

● 从石蜡包埋组织切片提取RNA

● 操作简便,且用时少(2小时)

● 提取的 RNA 可用于 RT-PCR



◆用途

● RT-PCR 检测 RNA 病毒

● RT-PCR 检测 mRNA

● 检测石蜡包埋组织切片的 RNA 保存度等

◆产品内容

产品

包装

备注

Proteinase K(20 mg/mL)

100 µL×1

Extraction Buffer

3 mL×1

可室温保存
Extraction Buffer 可能出现白色结晶,非质量问题。在37~50°C条件下,孵化后,结晶完全溶解后使用。

ISOGEN-LS

10 mL×1

非医疗用剧毒物

可冷藏保存(2~10°C)

Ethachinmate

60 µL×1

可冷藏保存(2~10°C)

Deoxyribonuclease(RT Grade)

20 µL×1

10× DNase(RT Grade)Buffer II

100 µL×1

Stop Solution(RT Grade)

100 µL×1

DEPC treated Water

500 µL×2

可室温保存

保存方法

  冷冻保存(-20°C)

试剂盒以外必需的试剂

● Lemosol® 或Lemosol® A

● 乙醇

● 氯仿

● 异丙醇

◆使用实例

操作前需知

  从石蜡包埋组织提取RNA 时, RNA 的分解持续到包埋过程,其 RNA 的完整性比从新鲜组织提取的 RNA 低。

  从哺乳动物的新鲜组织提取的 total RNA 经过电泳后,检测出明亮的 28S rRNA 和 18S rRNA 条带,其比例约为 2 : 1。使用石蜡包埋组织进行提取时,无法得出这个结果。实际上,使用小鼠的石蜡包埋组织进行提取实验,几乎无法检测 28S rRNA 。因此,在包埋过程中引导RNA分解。石蜡包埋状态关系到 RNA 的分解程度。有可检测出 18S rRNA 的石蜡块,也有 18S rRNA 降解太多而无法检测出来。Nippon Gene 将判断基准设定为剩余一个 18S rRNA,in situ hybridization 等、需要高保存度RNA时,建议设定标准。

  即使 RNA 已分解(包括无法确认 18S rRNA 的情况),可使用 RT-PCR 检测出基因,使用 RT-PCR 时,RNA 的完整性较好。但是使用石蜡包埋组织切片进行 PCR 时,扩增效率比一般情况的低,请注意避免引物长度设置过大(400 bp 以下,尽量设置为 200 bp以下)。

操作流程

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒                              ISOGEN PB Kit

操作实例1 从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取RNA


  按照操作流程,从4片10 µm小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片,提取RNA ,取1/4的 量(5 µL),使用1% 福尔马林変性Agarose S 进行电泳。

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒                              ISOGEN PB Kit

操作实例2 RT-PCR检测小鼠Gapd基因

从小鼠颌下腺石蜡包埋组织切片提取500 ng RNA, DNase 处理后,进行RT-PCR,检测出小鼠glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(Gapd)基因外显子5(258 bp)。

   

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒                              ISOGEN PB Kit

   

石蜡包埋组织切片RNA提取试剂盒                              ISOGEN PB Kit


关于微量样本RT-PCR

  对于无法得到提取RNA的电泳结果或10 ng 以下的情况,建议添加RT反应補助试剂RTmate,进行逆转录。

◆备注

● 本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗用途。

◆资料 Data Sheet

产品手册

ISOGEN PB Kit 第二版 (PDF 261 KB)

SDS(Safety Data Sheet)

ISOGEN PB Kit (PDF)

◆相关产品

液体样本提取RNA用试剂 ISOGEN-LS

RT反应補助试剂 RTmate




产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
315-06421 ISOGEN PB Kit
ISOGEN石蜡组织切片RNA提取试剂盒 
20次用量

ISOGEN、ISOGEN-LS RNA提取试剂

ISOGEN、ISOGEN-LS
RNA提取试剂

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

ISOGEN、ISOGEN-LSISOGEN、ISOGEN-LS                              RNA提取试剂

RNA提取试剂

ISOGEN、ISOGEN-LS                              RNA提取试剂


ISOGEN

(从左到右200 mL,100 mL,50 mL



ISOGEN

  ISOGEN是从人、动物、植物及细菌提取RNA试剂。可通过液相分离方法从同一样本中分离DNA及蛋白质。可通过一系列的操作分离RNA、DNA、蛋白质,有助于分析珍贵的样本。操作简单,便于样本数量较多的检测。

  适用样本:组织、细胞、植物、细菌

ISOGEN-LS

  ISOGEN-LS是从血液或血清等容量较大(>100 µL:使用1.5 mL塑料(离心)管进行处理),难以浓缩的液体样本中提取RNA的试剂。是将ISOGEN针对液体试剂进行改良。除了加入到样本的ISOGEN-LS量比不一样以外,得到的结果与使用 ISOGEN时一样。

  适用样本: 全血、液体样本

◆原理

  本产品是含有苯酚及硫氰酸胍的均一液体。往样本加入ISOGEN或ISOGEN-LS后使其溶解或均匀化,再加入氯仿进行离心分离,匀浆就会分离成水相、中间相及有机相。水相中只有RNA,DNA及蛋白质存在于中间相及其以下。首先,取出水相,加入异丙醇使RNA沉淀。往剩余的中间相及有机相里加入乙醇使DNA沉淀,加入异丙醇使蛋白质沉淀,从而依次分离出RNA、DNA及蛋白质。

ISOGEN、ISOGEN-LS                              RNA提取试剂

◆特点

  ・主要成分为苯酚及硫氰酸胍的均一溶液

  ・便于液层分离的染色溶液(ISOGEN : 蓝色、ISOGEN-LS : 红色)

  ・可通过一系列的操作分离RNA、DNA、蛋白质

  ・操作简单、迅速 (RNA分离用时: 约1个小时、DNA : +2小时、蛋白质: +2.5小时)

  ・高回收率、组织及培养细胞样本请使用ISOGEN

  ・血液等容量大,难以浓缩的液体样本请使用ISOGEN-LS

◆产品列表

ISOGEN (10 mL、50 mL、100 mL、200 mL)

产品

容量

保存

备注

ISOGEN

1瓶

2~10°C
  (遮光)

  非医疗用,剧毒物
  外观:蓝色溶液
  容器(塑胶瓶)存放于保管袋。


 

ISOGEN-LS (10 mL、100 mL)

产品

容量

保存

备注

ISOGEN-LS

1瓶

2~10°C
  (遮光)

  非医疗用,剧毒物
  外观:红色溶液
  容器(塑胶瓶)存放于保管袋。

运输方法

  本品在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例

操作步骤

RNA分离

DNA分离

蛋白质分离

操作流程1-1 RNA分离

操作流程2 DNA分离

操作流程3 蛋白质分离

操作流程1-2 微量样本RNA分离

操作流程1-3 植物样本RNA分离

  

ISOGEN及ISOGEN-LS的操作流程请参考产品说明

实验数据一览

  · 取量的标准

  · <ISOGEN>ISOGEN法与硫氰酸胍-氯化铯(GT-CsCl)超速离心法比较

  · <ISOGEN>ISOGEN法分离总RNA电泳

  · <ISOGEN>ISOGEN法分离RNA、DNA及蛋白质Northern、Southern、Western印迹法

  · <ISOGEN-LS>ISOGEN法分离hepatitis C viral (HCV) RNA的RT-PCR

◆注意事项

  · 如果您对试剂的基本的知识不了解,请不要使用。

  · ISOGEN及ISOGEN-LS是非医疗用医剧毒物(苯酚制剂),请小心操作。

  · 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。

  · 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗15分钟或以上,并及时就诊。

  · 请按照说明书进行操作。

  · 对于因不按照说明书操作而导致的事故,Nippon Gene不负任何责任。

◆备注

  本产品是实验研究用试剂,请勿用作医疗用途。

◆资料 Data Sheet

产品手册

  · ISOGEN,ISOGEN-LS 产品说明书(H18年7月修订版) PDF 92KB

SDSSafety Data Sheet

  · ISOGEN  安全标签(PDF

  · ISOGEN-LS  安全标签(PDF

◆相关产品

  · ISOGEN II total RNA及small RNA抽提试剂 

  · ISOGEN with Spin Column RNA抽提试剂

  · Ethachinmate 用于从微量样本抽提RNA的酒精沉淀共沉淀剂

  · 缓冲剂

  · Deoxyribonuclease(RT Grade)for Heat Stop

  · Deoxyribonuclease(RT Grade)

  · DNase I (RNase free)

Q:从革兰氏阳性菌提取RNA的方法

A:总体来说,革兰氏阳性菌的细胞壁较厚,普通的操作流程回收到的RNA的量比革兰氏阴性菌少。因此,使用玻璃珠(0.1 – 0.15 mm)破坏

    革兰氏阳性菌的细胞壁后,用ISOGEN提取RNA。

    使用ISOGEN从革兰氏阳性菌抽提RNA – CN.pdf

Q:从酵母提取RNA的方法

A:酵母的细胞壁较厚,仅仅进行普通的ISOGEN/ISOGEN-LS处理,难以回收RNA。因此,使用作用于β -1,3结合的葡萄糖聚合物的 Zymolyase

    对细胞壁进行溶解,提取RNA。

    使用ISOGEN/ISOGEN-LS从酵母抽提RNA -CN.pdf

Q:从骨头提取RNA的方法

A:使用ISOGEN从大鼠脊椎提取总 RNA,并检测其回收量及纯度。  

    使用ISOGEN从骨头抽提RNA  – CN.pdf

Q:可以分开提取小RNA和高分子RNA吗?

A:本产品无法分开回收小RNA和高分子RNA,但是本产品的升级产品ISOGEN II可以分开回收高分子RNA(>200 bases)和小RNA

    (<200 bases)。

        分离操作流程(前往ISOGEN II 产品页面链接)

参考文献

  [ 1 ] Chomczynski, P. and Sacchi, N.: Anal.Biochem.162, 156 (1987)

  [ 2 ] Chomczynski, P.: BioTechniques, 15, 532 (1993)

  [ 3 ] Chomczynski, P., Bowser-Finn, R. and Sabatini, N.: The Jounal of NIH Research, 6,83 (1994)

  [ 4 ] Chomczynski, P. and Mackey, K., BioTechniques, 19, 942-945 (1995)


License

  Licensed by Molecular Research Center, Inc.

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
315-02504 ISOGEN 10 mL
317-02503 ISOGEN 50 mL
311-02501 ISOGEN 100 mL
ISOGEN 200 mL
317-02623 ISOGEN-LS 10 mL
311-02621 ISOGEN-LS 100 mL

ISOGEN II 总RNA及小RNA提取试剂

ISOGEN II
总RNA及小RNA提取试剂

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

ISOGEN IIISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

总RNA及小RNA提取试剂

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

 

  ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

离心后的沉淀       

    ISOGEN II 100 mL

  ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体,根据与细胞成分的相互作用,能一步分离RNA。

  使用旧产品(ISOGEN和ISOGEN-LS)需要添加氯仿,要进行液相分离,而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后,添加水, DNA、蛋白质、多糖类等沉淀(不溶化),进行离心分离后可以去除(右图)。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后,能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME 使用,也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。

◆特点


  • 无需使用氯仿分离RNA

  • 相比旧产品(ISOGEN等),小RNA的提取率更高

  • 可以把高分子RNA(>200 bases)和小RNA(<200 bases)分离(也有不分离的方案)

  • 混入的DNA较少,提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR

  • 约一小时内可提取出RNA

◆用途

  从活体组织提取RNA等等



◆产品列表


ISOGEN   II 10 mL100 mL

产品

包装

保存条件

备注

ISOGEN II

1瓶

2~10°C

(阴暗处)

非医疗用剧毒物

外观:青色溶液

容器(塑料瓶)外配有袋子。



运输方法

  本品在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用。

◆使用案例


操作流程

・除了本产品,根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
・可使用聚丙烯管,使用前确认是否能够承受离心强度(12K × g)及ISOGEN II(苯酚)。
・离心操作建议在4-28℃进行。

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂



实验数据

1. 提取的RNA的电泳

2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果(测定吸光度)
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离<改变流程>

Data 1:提取的RNA的电泳

  

  按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序,提取RNA,进行电泳。


     琼脂糖凝胶电泳

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂


M: RNA Ladder (编号:311-06261)

 

道1:ISOGEN    提取 总RNA (2 μg)

道2:ISOGENⅡ 提取 总RNA (2 μg)

道3:ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2 μg)

道4:ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2 μg)

 

1.2% Agarose S (甲醛变性)

EtBr 染色

   聚丙烯酰胺凝胶电泳 

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂




道1:ISOGEN     提取 总RNA (5 μg)

道2:ISOGENⅡ 提取 总RNA (5 μg)

道3:ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5 μg)

道4:ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5 μg)

 

12% 聚丙烯酰胺凝胶 (Urea 变性)

EtBr 染色

  

  ▶ 道1、2中,ISOGENⅡ与ISOGEN一样,可提取全DNA。

  ▶ 道3、4中,ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。



Data 2:检验miRNA

  对使用ISOGEN ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析

 ▶ ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

Data 3:RT-PCR


  使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时,进行不产生RT反应的控制组实验。


            

                 PCR条件

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

1:模板RNA量 500 ng

2:模板RNA量 100 ng

3:模板RNA量 20 ng

M:Gene Ladder 

(编号:316-06951)

  ▶ 使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。

Data 4:RNA提取共沉淀剂效果(测定吸光度)

  ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时,对使用共沉淀剂Ethachinmate(Nippon Gene 产品编号:312-01791)或者Glycogen(和光纯药工业 产品编号:077-05311)时提取到小RNA情况进行了比较。



方法

  按照使用指南,从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA,检测吸光度,计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1,在图表中列出了含量的相对值。

ISOGEN II                              总RNA及小RNA提取试剂

  ▶ 使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多,变异较少。

Data 5:RNA取量的基准

实验材料

高分子 RNA 的离析

总 RNA的离析

组织

肝脏

5~7 µg RNA/mg tissue

6~8 µg RNA/mg tissue

肾脏、脾脏

3~4 µg RNA/mg tissue

3~4 µg RNA/mg tissue

骨骼肌脑、肺

0.5~1.5 µg RNA/mg tissue

0.5~1.5 µg RNA/mg tissue

胎盘

1~3 µg RNA/mg tissue

1~3 µg RNA/mg tissue

培养细胞

上皮细胞

5~8 µg RNA/106 cells

5~10 µg RNA/106 cells

成纤维细胞

3~5 µg RNA/106 cells

4~6 µg RNA/106 cells

Data 6:使用ISOGEN II从植物提取总RNA

从植物抽提全RNA例子 (PDF 222KB)

Data 7:使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离<变化流程>

从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子 (PDF 218KB)

◆注意事项

  • 本品是实验研究用的试剂,不能作为医药品或其他目的使用。另外,如果您对试剂的基本的知识不了解,请不要使用。

  • ISOGEN II是非医疗用剧毒物(苯酚制剂),请小心操作。

  • 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。

  • 操作场所保持通风,以免吸入蒸汽。

  • 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗15分钟或以上,并及时就诊。

  • 请按照说明书进行操作。

  • 对于因不按照说明书操作而导致的事故,Nippon Gene不负任何责任。

◆备注

  本产品是实验研究用试剂,请勿用作医疗用途。



◆资料 Data Sheet


产品说明书

  • ISOGEN II 产品说明书第三版(100 mL产品小冊子) (PDF 195KB)

  • (内容与册子相同) (PDF 168KB)

SDS(Safety Data Sheet)

  • ISOGEN II  安全数据图表(PDF)

宣传单

  • 册子(PDF 2MB)

◆相关产品

   • RNA抽提用试剂 ISOGEN、ISOGEN-LS

   • RNA抽提用试剂 ISOGEN with Spin Column

   • 酒精沉淀用共沉淀剂 Ethachinmate

   • 缓冲器 ddWater, TE(pH 8.0)


Q:可以从全血等血液样本中抽提RNA吗?

A:ISOGEN II 难以提取出高纯度的RNA,建议使用ISOGEN-LS。


Q:可以提取DNA或蛋白质吗?

A:旧法使用 ISOGEN,可以从同一样本回收DNA及蛋白质,但由于此次研发的是提取RNA的方法,ISOGEN II 中混入的DNA较少,无法提取DNA

     及蛋白质。不过,配合使用DNA提取试剂 ISOGENOME,可回收DNA样本。

参考文献


[ 1 ]


Chomczynski, P. : Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.

[ 2 ]


Chomczynski, P. and Sacchi, N.:”Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroform extraction”, Anal. Biochem,162, 156-159(1987)


[ 3 ]


Chomczynski, P.:”A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques,15, 532-537(1993)


[ 4 ]


Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:”Effect of pH and ionic strength on the spectrophotometric assessment of nucleic acid purity”,Biotechniques, 22, 474-481(1997)


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
317-07363 ISOGEN II 10 mL
311-07361 ISOGEN II 100 mL

ISOGEN II RNA 抽提试剂 ISOGEN II

ISOGEN II RNA 抽提试剂
ISOGEN II

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

ISOGEN II RNA抽提试剂ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

ISOGEN II

从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小 RNA 的总 RNA

◆原理

      ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中总 RNA 和小 RNA 的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体,根据与细胞成分的相互作用,能单一地分离 RNA 。
      使用旧产品(ISOGEN 和 ISOGEN-LS)需要添加氯仿,要进行液相分离,而本产品则无需此步骤。在样品中加入 ISOGEN II 溶解或是均质化之后,再添加水,因为 DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀,进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后,能分离出高纯度的 RNA 。

 

 

◆优点特色

● 不需使用氯仿分离 RNA
● 比起旧产品( ISOGEN 等),小RNA 的抽提效率更高
● 可以把大 RNA(>200 bases)和小 RNA(<200 bases)分离(同时提供不分离的方案)
● DNA 污染少,抽提的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 RT-qPCR 上
● 约 1 h 可完成 RNA 的抽提

内容和保存条件

<span style="font-family: 微软雅黑, Microsoft YaHei;"><span style="font-family: 微软雅黑, 'Microsoft YaHei'; font-size: 14px;">无标题文档</span></span>

产品名称

构成

ISOGEN II

ISOGEN II

100 mL

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请在购买日起6个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后,在2~10℃条件下保存即可正常使用

产品安全数据图表(MSDS)
ISOGEN II MSDS

使用手册
ISOGEN II 手册

◆案例应用


操作流程

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

◆使用例子

Data 1 抽提得到的 RNA 电泳

根据 ISOGEN 和 ISOGEN II 的方案抽提 RNA,进行电泳

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

  M:RNA Ladder (Code No.311-06261)
  Lane1:ISOGEN 抽提总 RNA(2 μg)
  Lane2:ISOGEN II 抽提总 RNA(2 μg)
  Lane3:ISOGEN II 抽提高分子 RNA(2 μg)
  Lane4:ISOGEN II 抽提 小RNA(0.2 μg)
  1.2% Agarose S(甲醛变性)EtBr 染色

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

  Lane1:ISOGEN 抽提总 RNA(5 μg)
  Lane2:ISOGEN II 抽提总 RNA(5 μg)
  Lane3:ISOGEN II 抽提高分子 RNA(5 μg)
  Lane4:ISOGEN II 抽提小 RNA(0.5 μg)
  12% 聚丙烯酰胺(Urea 变性)EtBr 染色

ISOGEN II 能抽提和 ISOGEN 同等的总 RNA

ISOGEN II 能对 200 base 以上的高分子 RNA 和 10~200 base 的小 RNA 进行分离

Data 2 ISOGEN 和 ISOGEN II 抽提的总 RNA 用“3D-GeneHuman miRNA Oligo chip(东来株式会社)分析。

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

ISOGEN II 比 ISOGEN 能更完整地抽提 miRNA

 

Data 3 RT-PCR

用 ISOGEN 和 ISOGEN II 从 HeLa 细胞中提取出 RNA 并定性,再用 PT-PCR 检测出 β-Actin 基因。同时进行没有经过 RT 反应的对照实验。

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

1:模板RNA量 500 ng
2:模板RNA量 100 ng
3:模板RNA量 20 mg
M:Gene Ladder 100

实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比,DNA残留更少。

Data 4 RNA 提取量的参考值

分别用 “大 RNA 的提取”和“总 RNA 的提取”方案得到的 RNA 的提取量的参考值如下:

试剂

大 RNA 的提取

总 RNA 的提取

组织

肝脏

5~7 g RNA/mg tissue

6~8 μg RNA/mg tissue

肾脏、脾脏

3~4 g RNA/mg tissue

3~4 μg RNA/mg tissue

骨骼肌、脑、肺

0.5~1.5 g RNA/mg tissue

0.5~1.5 μg RNA/mg tissue

胎盘

1~3 g RNA/mg tissue

1~3 μg RNA/mg tissue

培养细胞

上皮细胞

5~8 g RNA/108 cells

5~10 μg RNA/106 cells

成纤维细胞

3~5 g RNA/108 cells

4~6 μg RNA/106 cells

注意事项

● 本品是实验研究用的试剂,不能作为医药品或其他目的使用。另外,如果您对试剂的基本的知识不了解。请不要使用。

● 因为 ISOGEN II 是医药用外有害物质(苯酚制剂),所以请小心操作。
● 使用时请穿着适当的防护设备(手套、眼镜等)。
● 请不要吸入蒸汽,进行充分的通风。
● 如果接触皮肤或眼睛,请用大量的水冲洗至少15分钟,并前往医院就诊。
● 本品的操作请按照手册记载的内容进行
● 对于和手册记载内容不同的操作带来的事故,日本基因不负任何责任。

ISOGEN II RNA 抽提试剂                              ISOGEN II

ISOGENII 使用说明书

参考文献

 

1. 

Chomczynski, P. Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.


2. 

Chomczynski, P. and Sacchi, N:Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroformextraction”, Anal. Biochem., 162, 156-159(1987)


3. 

Chomczynski, P.:A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques, 15, 532-537(1993)


4. 

Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:Effect of pH and ionic strength on thespectrophotometric assessment of nucleic acid purity”, Biotechniques, 22, 474-481(1997)


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◆原理


  本产品是由 ISOGEN 和 Poly A+ ISOLATION Kit From Total RNA 组合而成的 Poly A+ RNA 萃取试剂盒。本产品能够在短时间内得到高纯度的 Poly A+ RNA,而且,本产品还附有 Ethachinmate,能够简单地对得到的 Poly A+ RNA 进行浓缩。

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ISOGEN-LS 液体样本 RNA 抽提试剂ISOGEN-LS 液体样本 RNA 抽提试剂                              ISOGEN-LS

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◆原理


  ISOGEN-LS 是对血清、血液中的RNA进行萃取的试剂,是由 ISOGEN 改良而成的液体试剂专用规格。除了在液体样品中添加的 ISOGEN-LS 的量和 ISOGEN 不同外,所得的结果与 ISOGEN 一致。

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ISOGEN

◆原理


  ISOGEN 是对人、动物、植物及细菌的 RNA 进行萃取的试剂。采用液相分离的方法,能够在同一试剂中将 DNA 和蛋白质进行单独分离。由于一步操作就能将 RNA、DNA、蛋白质进行单离,能够有效用于贵重的样品的分析中,而且操作简单,十分方便。

  本产品是含有苯酚和硫氰酸胍的均一液体,在样品中加入 ISOGEN 溶解后均一化,加入氯仿后进行离心分离,分为水相、中间相和有机相。RNA 只存在在水相中,DNA 和蛋白质会存在于中间相以下。所以首先在水相中加入异丙醇使 RNA 沉淀,然后在剩下的中间相和有机相中加入乙醇使 DNA 沉淀后,加入异丙醇使蛋白质沉淀就能按顺序地分离 RNA、DNA 和蛋白质。

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◆原理


  ISOGEN PB kit 是从石蜡包埋切片中萃取 RNA 的试剂盒,脱石蜡后从用 Proteinase K 处理过的组织中用 ISOGEN-LS 萃取出 RNA 大概只需要2小时。萃取出的 RNA 能用于 RT-PCR 。

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