SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒
SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit
- 产品特性
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- 参考文献
SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒
本产品是一步法RT-qPCR检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）Omicron毒株（B.1.1.529）中N区存在的特征性突变del31-33的试剂盒。del31-33 是指N区第31~33位中E、R 和 S三个氨基酸缺失的突变。Omicron毒株是在南非首次发现的变异株，在刺突蛋白中含有30多个突变。它比传统的变异株具有更高的传染性，因而被世界卫生组织（WHO）列为“关切变异株”（Variant of Concern；VOC）。
本产品针对的是突变位点少的N区突变，并非突变位点多的S区。因此引物探针不会与其他突变位点产生反应、干扰测试，即可特异性、高灵敏度检测Omicron。
经证实，本产品不与Alpha变异株、Beta变异株、Gamma变异株产生反应，只与Omicron毒株产生特异性反应。
SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒【281-37703】
◆试剂盒组成
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20 Reactions |
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RT 酶混合物（20×） |
20 μL×1 |
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一步反应混合物（2×） |
200 μL×1 |
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野生型引物＆探针混合物 |
10 μL×1 |
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N del31-33突变型引物＆探针混合物 |
10 μL×1 |
◆特点
● 容易判断
● 使用突变型和传统型的引物/探针套装时，可通过比较Ct值进行判断
● 一步法RT-qPCR法快速检测突变
● 约70 min 即可完成
● 使用独立研发的引物探针进行高灵敏突变检测
● 当与其他突变体检测试剂盒组合使用时，所有变异株均可于同一反应条件下在1块96孔板上进行检测
● N501Y、E484K、L452R、E484Q、del247-253、N del31-33试剂盒的所有PCR反应条件相同，因此可在
● 1块96孔板上进行检测
◆检测原理
采用TaqMan® 探针的1-step RT-qPCR。
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▼使用前 （非突变）型检测用的Wild Type Primer/Probe 和突变型检测用的Mutant Type Primer/Probe两种进行检测。比较两种Ct值，若突变型检 测用Mutant Type Primer/Probe的Ct值较小，则判断该病毒为变异株。 |
◆实验案例
变异株检测的应用数据
用以下5种新型冠状病毒株的纯化RNA对本试剂盒进行测试：
● Omicron毒株（B.1.1.529）：TY38-873P1，由日本国立传染病研究所提供
● alpha毒株（B.1.1.7）：QHN001，N501Y突变，由日本国立传染病研究所提供
● Beta毒株（B.1.351）：TY8-612，N501Y突变，E484K突变，由日本国立传染病研究所提供
● gamma毒株（P.1）：TY7-501，N501Y突变，E484K突变，由日本国立传染病研究所提供
● 传统毒株（VR-1986HK）：从ATCC购买的热灭活新型冠状病毒株
样本拷贝数：5000拷贝/孔
循环数：45
① Omicron株（B.1.1.529）：TY38-873P1
Omicron毒株在N区含有del31-33突变，因此N del31-33 Mutant type Primer / Prob的扩增曲线（红色）比Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）更早起峰。
② alpha株（B.1.1.7）：QHN001
alpha毒株在N区中不含del31-33突变，因此Wild type Primer / Probe（蓝色）的扩增曲线比 N del31-33 Mutant type Primer / Probe（红色）的扩增曲线更早起峰。虽然alpha毒株与Omicron毒株均含有N501Y突变，但经确认本产品不与alpha毒株产生反应。
③ Beta株（B.1.351）：TY8-612
Beta毒株在N区中不含有del31-33突变，因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）更早起峰。虽然Beta毒株与Omicron毒株均含有N501Y突变，但经确认本产品不与Beta毒株产生反应。
④ gamma毒株（P.1）：TY7-501
gamma毒株在N区中不含del31-33，因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线更早起峰。虽然gamma毒株与Omicron毒株均有N501Y突变，但经确认本产品不与gamma毒株产生反应。
⑤ 传统毒株（VR-1986HK）：从ATCC购买的热灭活新型冠状病毒株
传统毒株在N区中不含del31-33突变，因此Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）更早起峰。
对照RNA的检测数据
使用本试剂盒测定合成Omicron菌株的对照ssRNA。
在不含N del31-33突变的对照ssRNA（Wild Type Control RNA）中，Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）比N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）更早起峰。
在含N del31-33突变的对照ssRNA（N del31-33 Mutant Type Control RNA）中，N del31-33 Mutant type Primer / Probe的扩增曲线（红色）比Wild type Primer / Probe的扩增曲线（蓝色）更早起峰。
PCR反应条件
将板置于qPCR仪板，按以下流程设定。
◆变异株一览表
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变异株 |
N501Y突变 |
E484K突变 |
L452R突变 |
E484Q突变 |
del247-253突变 |
N del31-33突变 |
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传统毒株 |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
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Alpha毒株 |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
－ |
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Beta毒株 |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
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Gamma毒株 |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
－ |
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Epsilon毒株（B.1.427/B.1.429） |
－ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
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Kappa毒株（B.1.617.1） |
－ |
－ |
＋ |
＋ |
－ |
－ |
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Delta毒株 （B.1.617.2） |
－ |
－ |
＋ |
－ |
－ |
－ |
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Lambda毒株 （C.37） |
－ |
－ |
－ |
－ |
＋ |
－ |
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Omicron毒株（B.1.1.529） |
＋ |
－※ |
－ |
－※ |
－ |
＋ |
※含E484A突变
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
FAQ
Q1：是否可以判断新型冠状病毒阳性/阴性？
A1：本试剂盒用于检测阳性样品中是否存在基因突变，不能判断为阳性/阴性。请使用SARS-CoV-2 RT-qPCR Detection Kit Ver. 2（产品编号：285-33801）进行阳性/阴性的判断。本试剂盒也可以与 RNA简易提取试剂SARS-CoV-2 Lysis Buffer Ver. 2（产品编号：281-34501） 配合使用。
Q2：是否可以检测direct PCR 等简单提取的RNA样品？
A2：请使用RNA提取/纯化试剂盒纯化的RNA。
● 离心柱类型：ISOSPIN病毒RNA（产品编号：310-08931，Nippon Gene）
● 自动核酸提取仪：QuickGene-Auto 12S / 24S（仓敷纺织，另需QuickGene AutoS RNA Virus Kit，产品编号：633-50801）
Q3：试剂盒包装【20 Reactions】是指？
A3：【20 Reactions】指可以分开进行20孔的实时PCR。每个样品需要2个孔（如下），即10个样品。
①含有传统菌株Primer / probe的孔
②含有变异毒株Primer / probe的孔
Q4：试剂盒中是否包含病毒的阳性对照RNA？
A4：本试剂盒不含阳性对照。
Q5：当野生型和突变型的扩增曲线均起峰时，应如何进行判断？
A5：如果病毒量高，无论是变异株样品，还是野生株，都有可能在其引物/探针中观察到扩增信号。然而，在此情况下，变异株的扩增信号上升得更快（Ct值小）。请务必通过变异株和传统菌株用的两种引物和探针进行检测，以确定 Ct 值的差异。详情请参阅说明书中的“判断方法”。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 281-37703 | SARS-CoV-2 N del31-33 Mutation Detection Kit SARS-CoV-2 N del31-33 突变检测试剂盒 |
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