日本同仁化学DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02| DOJINDO

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DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02
DNA损伤定量试剂盒
DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

•可以检测基因组DNA样品的碱基位点数量

•采用方便的比色法检测

•检测范围:40个碱基位点/ 1×105 碱基对DNA

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DNA损伤检测方案

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02

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试剂盒内含
产品概述
原理
技术信息
操作方法
常见问题Q&A
参考文献

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DNA损伤丨从实验思路到检测指标  PDF下

指标 关联指标干货参(点击查看) 检测指标(点击查看)
DNA损伤检测
γ-H2AX DNA损伤检测试剂盒- γH2AX(绿、红、深红)
AP位点 DNA损伤检测试剂盒(AP位点法)
核小体 Nucleolus Bright (绿、红)
细胞周期 Cell Cycle Assay Kit – PI/RNase Staining
DNA损伤关联指标 氧化损伤 DMPO
BMPO
TEMP
SOD Assay Kit
DPPH Antioxidant Assay Kit
凋亡 Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit/PI
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit/PI
Cell Cycle Assay Solution Deep Red/Blue
JC-1 MitoMP Detection Kit
Caspase-3 Assay Kit
铁死亡 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11
Liperfluo
GSSG/GSH Quantification Kit II
Iron Assay Kit
Mito-FerroGreen
衰老 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
SPiDER-βGal
自噬 Mitophagy Detection Kit
DALGreen – Autophagy Detection
DAPGreen – Autophagy Detection
DAPRed – Autophagy Detection

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试剂盒内含

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02

产品概述

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基,产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP;N’-氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后,DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法,用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×105个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。

*本试剂盒仅适用于基因组DNA中无碱基位点 (Abasic Sites)的检测。

原理

DNA损伤在除了复制过程中的DNA聚合酶错误外,保留有机体遗传信息的DNA在体内还受到环境辐射,紫外线,化学物质(如烷基化剂)和代谢物(如活性氧)的破坏,接收。如果这些错误和伤害得不到适当的修复,它们将导致突变,从而导致癌症和衰老。

DNA损伤部位有修复结构,其中之一就是去除碱修复。此时,将出现一个称为AP位点的基础位点(apurinic/apyrimidinic位点)。换句话说,AP位点的检测是可以测量DNA损伤位点的有效方法。

ARP(N’-氨基氧基甲基羰基肼基-D-生物素)是已知可以与该AP位点进行生物素特异结合的试剂。-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting-是一种可以通过使用ARP将DNA生物素化并固定在96孔微板上,可以简单地定量样品DNA中的AP 位点的试剂盒。

该试剂盒包含具有与AP位点的标准DNA,并且可以使用HRP标记的链霉亲和素通过生物素检测方法对AP位点进行定量。

使用方法请看实验例。

*冷藏保存中或恢复到室温时,有时会在管状管中看到水滴状的液粒。

这是由干燥防止剂液粒化而成的,产品的性能没有问题。

*本套装中含有加入了溶液的试剂组件。

溶液可能会粘附在试管或瓶盖的内壁上,因此在打开前应先摇匀

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02

技术信息

除试剂盒以外必要的物品

・10μl,200μl,1 ml微量移液器(可变型)

・200μl多通道移液器(可变型)

・培养箱(37℃)

・酶标仪

・0.5 ml,1.5 ml离心管

・离心机

・DNA纯化试剂盒

・纸巾

本公司出售各种DNA纯化试剂盒。

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue(Code:GK03)

关于DNA提纯的问题,请咨询同仁化学。

操作方法

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02

常见问题Q&A

Q1: 是否可以创建40个以上AP位点/ 100,000个标准溶液?
A1:该试剂盒的标准DNA是0-40个AP位点/ 100,000ARP-DNA。但我们已经准备了多达50个AP站点/ 100,000个的ARP-DNA(暂时没有做到更多)。从理论上讲,可以制备更多的ARP-DNA,但这么做的话我们无法保证和保持校准线的线性程度。

如果要检测更高浓度的碱基损伤,但样品DNA没有相同浓度的损伤,您可以用0AP 位点-DNA(测定范围内稀释)后再进行测定,之后再换算实际AP数比较好。

Q2: AP位点是DNA的一个基本损伤位点,被用作氧化应激的指标,除了AP位点之外,还有其他氧化应激指标吗?
A2:我们创建了一个文档,概述了氧化应激的各种标记物。

从实验者的角度,描述了每种氧化应激标记的特性和检测样品的处理方法,因此请参考以下文档(日文)。

https://www.dojindo.co.jp/technical/beginner/stressmarker.pdf

Q3:建议在DNA的纯度为吸光度为1.8以上进行检测。是否能够测量至1.5?
A3:因为吸光度在1.5内没有做过类似实验,所以暂时无法确认。

我们用吸光度为1.6~1.7的DNA进行检测,但不能看到很大的变化。

所以推荐1.8或更高。

纯度低的话可能意味着蛋白质污染。低纯度蛋白质具有阻断作用,可能使DNA粘附在板上。

请使用尽可能高的纯度,因为它可能会阻止这种情况

Q4:是否可以存储提取的DNA而无需将其转换为ARP?
A4:存储是不可取的,因为这会增加AP位点的数量。 (冷藏和冷冻)

如果要在不进行ARP化的情况下进行存储,请使用乙醇沉淀,制粒并冷冻保存。AP站点确实是容易发生剪切的部位。

但是,如果以catallist free的状态保存的话,即使在3’侧有断开也不会影响ARP的检测。

相反,如果提取的DNA储存在非冷冻状态的环境中,

由自然产生的去除碱形成的AP位点是一个更重要的问题。

所以在这种情况下,如果你的样品在正确存储标准DNA是可以进行修饰的。

ARP修饰后AP位点稳定,建议提取后迅速进行APR处理。

Q5:这个试剂盒可以检测什么?
A5:您可以定量DNA中的AP位点。AP位点是[apurinic / appyrimidinic site]的缩写,作用于受损的DNA。一般在去除碱修复过程中会出现。DNA的损伤除了复制时DNA polymerase的错误之外,还受到紫外线,化学物质(如烷基化剂)和代谢物(如活性氧)的影响。

通过测定AP位点可以检测DNA损伤。

Q6:这个试剂盒能测定的样品数量是多少?
A6:20samples为20个样品。

每个Filtration Tube都有20个samples。

因为一个样品一般使用一个Filtration Tube,所以这个Tube的数量即是可测定的样品数。

20samples的测定用的板也是1块板。

Q7:96孔板和过滤管中有溶液剩余,请告诉我废弃的方法
A7:多余的溶液请在确认以下成分信息后,按照政策规定的废弃规则废弃。

<配套试剂成分>

・ARP-DNA standard solution(稀释水后废弃,不含有害成分)

・ARP solution(稀释后作废,不含有害成分)

・DNA binding solution(稀释水后废弃,不含有害成分)

・Washing buffer(稀释水后废弃,不含有害成分)

・HRP-Striptavidin(稀释水后废弃,不含有害成分)

・TE buffer(可溶于水,EDA・2NA 0.1%以下)

・Substrate solution(稀释水后废弃,不含有害成分)

参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, “DNA Repair Enzymes”, Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.

2) T. Lindahl and B. Nyberg, “Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid”, Biochemistry, 1972, 11, 3610.

3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, “A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.

4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, “Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA”, Biochemistry, 1990, 29, 1737.

5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, “Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion”, Mutat. Res., 1992, 273, 253.

6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, “The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function”, J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.

7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, “DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes”, J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.

8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, “Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.

9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, “Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury”, Stroke, 2005, 36, 321.

10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, “Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1”, Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.

11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, “A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents”, Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

日本同仁化学DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting DK02| DOJINDO

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DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting DK02

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶,被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素,但在氧化应激中,诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。
抗氧化能力
活性氧
谷胱甘肽
DNA损伤
脂质过氧化物
铁离子
谷氨酰胺、谷氨酸
自由基
NO研究

品名货号用途

DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting DK02 DNA损伤定量检测
DPPP试剂 D350 氧化应激检测

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中,小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子,接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原,当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS,它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子,它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中,氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法,这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。

日本同仁化学DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red货号:G267| DOJINDO

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DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red货号:G267
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -深红色
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal共染,检测衰老细胞DNA损伤
商品信息
储存条件:0-5°C,注意防止吸潮
运输条件:常温

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1 set

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无需另外准备试剂

操作简便

3色可选

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

试剂盒内含
性质
DNA损伤检测原理
试剂盒特点
细胞衰老实验例
常见问题Q&A

试剂盒内含

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

性质

该试剂盒,可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂,即使是第一次使用的人操作起来也很方便,并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤检测原理

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂,H2AX(一种组蛋白H2X的亚种),当出现DNA双链断裂时,会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX(γH2AX),作为DNA损伤的标志物,有望被用来作为评估化学物质,活性氧,紫外线,辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来,γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

试剂盒特点

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内,您可以马上检测并获得数据。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

*对于多次染色和组织染色,请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

产品名称 荧光 激发发射波长
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green 绿色 λex : 494 nm、λem : 518 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red 红色 λex : 550 nm、λem : 566 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red 深红色 λex : 646 nm、λem : 668 nm

细胞衰老实验例

在评估细胞衰老时,应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

概要 检测指标 论文
在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老,相反,通过添加自噬诱导剂后,细胞衰老被抑制。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 Laura Garcia-Prat, et. al., Nature2016529, 37.
在2型糖尿病模型中,证实了衰老指标活性增加,DNA损伤水平增加。 γH2AX、SA-β-gal、p21 Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab2013305(8), E951.
在缺乏特定蛋白质(BRE)的小鼠成纤维细胞中,观察到细胞衰老明显增强。 γH2AX、SA-β–gal W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
在棕榈酸处理的HepG2细胞中,染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少,所有衰老指标的活性均得到增强。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 20173, 11.
在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中,证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 γH2AX、SA-β-gal、p16 R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  201817, 259.

<结合其他指标的细胞实验例>

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267

<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后,用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1%Triton-X / PBS进行膜渗透处理后,用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX(深红色):Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal:Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI:Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm

常见问题Q&A

Q:抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存?
A:无法保存,请当天使用。
Q:可以使用试剂盒内含的封闭液以外,其他的试剂进行稀释抗体吗?
A:我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。用其他溶液稀释可能会增加背景。
Q:多重染色的注意点
A:由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗,因此在共染色其他抗原时,请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。
Q:组织染色的注意点
请注意,不能用于小鼠组织的组织染色。

当需要对小鼠组织进行染色时,抗小鼠抗体(荧光标记的二抗)会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附,从而增加背景。

<试剂盒中包含的抗体信息>

来源 交叉性
一抗 小鼠 人、小鼠
荧光标记的二抗 山羊 小鼠IgG

关联产品

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267
细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
细胞衰老检测试剂盒SPiDERβGal

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267
SPiDER-βGal试剂
(2S,3R,4S,5R,6R)-2-{[3′-(Diethylamino)-5′-(fluoromethyl)-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-6′-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267
Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal试剂盒
细胞衰老培养板检测试剂盒(SPiDER-βGal)

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -绿色

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Deep Red货号:G267
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -红色

日本同仁化学DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red货号:G266| DOJINDO

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品,欢迎访问官网了解更多信息

DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red货号:G266
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -红色
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal共染,检测衰老细胞DNA损伤
商品信息
储存条件:0-5°C,注意防止吸潮
运输条件:常温

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选择规格:
1 set

现货

无需另外准备试剂

操作简便

3色可选

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

试剂盒内含
性质
DNA损伤检测原理
试剂盒特点
试剂盒实验例
常见问题Q&A

试剂盒内含

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

性质

该试剂盒,可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂,即使是第一次使用的人操作起来也很方便,并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤检测原理

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂,H2AX(一种组蛋白H2X的亚种),当出现DNA双链断裂时,会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX(γH2AX),作为DNA损伤的标志物,有望被用来作为评估化学物质,活性氧,紫外线,辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来,γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

试剂盒特点

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内,您可以马上检测并获得数据。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

*对于多次染色和组织染色,请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

产品名称 荧光 激发发射波长
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green 绿色 λex : 494 nm、λem : 518 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red 红色 λex : 550 nm、λem : 566 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red 深红色 λex : 646 nm、λem : 668 nm

试剂盒实验例

在评估细胞衰老时,应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

概要 检测指标 论文
在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老,相反,通过添加自噬诱导剂后,细胞衰老被抑制。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 Laura Garcia-Prat, et. al., Nature2016529, 37.
在2型糖尿病模型中,证实了衰老指标活性增加,DNA损伤水平增加。 γH2AX、SA-β-gal、p21 Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab2013305(8), E951.
在缺乏特定蛋白质(BRE)的小鼠成纤维细胞中,观察到细胞衰老明显增强。 γH2AX、SA-β–gal W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
在棕榈酸处理的HepG2细胞中,染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少,所有衰老指标的活性均得到增强。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 20173, 11.
在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中,证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 γH2AX、SA-β-gal、p16 R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  201817, 259.

<结合其他指标的细胞实验例>

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266

<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后,用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1%Triton-X / PBS进行膜渗透处理后,用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX(深红色):Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal:Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI:Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm

常见问题Q&A

Q:抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存?
A:无法保存,请当天使用。
Q:可以使用试剂盒内含的封闭液以外,其他的试剂进行稀释抗体吗?
A:我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。用其他溶液稀释可能会增加背景。
Q:多重染色的注意点
A:由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗,因此在共染色其他抗原时,请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。
Q:组织染色的注意点
请注意,不能用于小鼠组织的组织染色。

当需要对小鼠组织进行染色时,抗小鼠抗体(荧光标记的二抗)会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附,从而增加背景。

<试剂盒中包含的抗体信息>

来源 交叉性
一抗 小鼠 人、小鼠
荧光标记的二抗 山羊 小鼠IgG

关联产品

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266
细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
细胞衰老检测试剂盒SPiDERβGal

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266
SPiDER-βGal试剂
(2S,3R,4S,5R,6R)-2-{[3′-(Diethylamino)-5′-(fluoromethyl)-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-6′-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266
Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal试剂盒
细胞衰老培养板检测试剂盒(SPiDER-βGal)

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -绿色

DNA Damage Detection Kit &#8211; γH2AX - Red货号:G266
Nucleolus Bright Red试剂
核仁荧光染色试剂-红色