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日本同仁化学CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE| DOJINDO

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CFSE试剂货号：C309
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate
CFSE

商品信息
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运输条件：室温
分子式：

C29H19NO11

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CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE
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CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE
活细胞质染色-绿色——Calcein-AM
3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂
2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE
PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂
细胞膜染色试剂—绿色

CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE
Cellstain- CFSE试剂
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-d

日本同仁化学Cellstain- CFSE试剂货号：C375| DOJINDO

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Cellstain- CFSE试剂货号：C375
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate
CAS号：150347-59-4
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：

C29H19NO11

分子量：

557.46

特点：

 

● 可用于细胞增殖检测

● 长效荧光染色，最长三周可见

● 可用于流式细胞仪检测

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现货

细胞染色检测方案

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

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规格性状

规格

 

特性：该产物为无色至微黄色固体，可溶于二甲基亚砜和乙腈。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料 CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE 是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE 在结构上将酚羟基部位改造成 AM 体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的 CFSE 的   AM 部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE 的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。

在细胞分裂增殖过程中，CFSE 的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。另外，CFSE 标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。有报道证实 CFSE 毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

Cellstain- CFSE试剂货号：C375 Cellstain- CFSE试剂货号：C375

原理

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

荧光特性

荧光波长：λex=496  nm, λem=516 nm

操作说明

＊建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。

配制试剂：

1、从冰箱中取出CFSE试剂，放至室温后再打开。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，让粉末充分落入管底，必要时可采用离心的方法。

2、取0.9 ml DMSOa)加到CFSE管中溶解，配制成2 mM的CFSE母液b)（加入DMSO后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全）。

3、用PBS(-)或适当的缓冲液将其稀释成100 μM或其它浓度（如果采用载玻片观察法，建议浓度为20 μM的工作液c))。

a)   DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。

b)   由于CFSE母液遇水极易分解，所以建议分装保存，例如分装成5 μl/管。

方法：分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

c)   CFSE工作液应现配现用，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。

* PBS(-)：不含钙和镁离子的PBS。

细胞染色(仅供参考)：

例1  培养板观察法

1、准备细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个／ml。

2、取1ml细胞悬液至试管中，加入适量CFSE工作液，轻轻搅拌混匀（建议CFSE的终浓度参考相关论文或做个预实验：分别设定终浓度为0.5,1,2,5,10,20 μM…,以确定最佳染色浓度b)）。

3、在37℃培养箱中培养15-30分钟。

4、离心后去上清，加入2 ml PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。

5、加入合适的培养基制成细胞悬液。

6、取500 μl的细胞悬液加在培养孔中，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量c)进行实验。

例2 载玻片观察法

1、准备1 ml细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个／ml。

2、取30 μl细胞悬液至试管中，加入10 μl浓度为20 μM的CFSE工作液（终浓度为5μM），轻轻搅拌混匀b)。

3、在37 ℃培养箱中培养15-30分钟。

4、滴10 μl的细胞悬液在载玻片上，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量C)进行实验。

＊如果背景高的话，第3步之后需要洗去多余的CFSE：

离心后去上清，加入90 μl PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。

a)尽可能用不含血清的培养基，血清中的酶和蛋白质会分解CFSE，可能会影响染色效果。

b)如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果细胞毒性大或背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。

c)根据不同的实验目的和要求，采用稀释的方法调整细胞数量。

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

文献

1) M. Bronner-Fraser, “Alterations in Neural Crest Migration by a Monoclonal  Antibody That Affects Cell Adhesion”, J. Cell  Biol., 1985, 101,  610.

2) A. Nose and M. Takeichi,  “A Novel Cadherin Cell Adhesion Molecule:Its Expression Patterns  Associated WithImplantation and Organogenesis of Mouse Embryos”, J. Cell Biol., 1986, 103, 2649.

3) S. A. Weston and C. R.  Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis  by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J.  Immunol. Methods, 1990, 133,  87.

4) C. K. Raymond, P. J.  O’hara, G. Eichinger, J. H. Rothman and T. H. Stevens, “Molecular  Analysis of the Yeast VPS3 Gene and the Role of Its Product in Vacuolar  Protein Sorting and Vacuolar Segregation during the Cell Cycle”, J. Cell Biol., 1990, 111, 877.

5) G. Radcliff, R. Waite, J.  Lefevre, M. D. Poulik and D. M. Callewaert, “Quantification of  Effector/Target Conjugation Involving Natural Killer(NK) or Lymphokine  Activated Killer(LAK) Cells by Two-color Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1991, 139, 281.

6) S. A. Weston and C. R.  Parish, “Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph  Nodes”, Cytometry, 1992, 13, 739.

7) L. S. D. Clerck, C. H.  Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of  Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to  Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular  Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

常见问题Q&A

 

 

Q1 请告诉我如何使用CFSE。

 
 

 

A1：参考文献[1]中的描述如下所示。

杀死7-10周大的CBA / H小鼠，去除脾脏（或其他目标器官），然后浸入F15培养基（1％FCS）中。

然后，通过金属网获得细胞悬液，并通过离心除去红细胞，死细胞等。

将纯化的淋巴细胞悬浮在pH 7.0的PBS中至50,000,000细胞/ mL。

加入5.0μM浓度的CFSE，并在37°C下标记15分钟。悬浮在冰冷却的F15培养基（1％FCS）中并离心

用（350g，5分钟，20℃）洗涤两次。悬浮在F15培养基中。

静脉注射到CBA / H小鼠中。一定时间后，杀死鼠标并去除脾脏（或其他目标器官）。

切除淋巴细胞并分离并通过流式细胞仪分析。

参考文献[2]是关于钙黄绿素-AM的，但也通过与[1]相同的步骤将其与CFSE进行了比较。

【参考文献】

1. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, J. Immunol. Methods, 133, 87 (1990).

2. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, Cytometry, 13, 739 (1992).
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

 

 

Q3:细胞染色试剂Cellstain的哪些活细胞染色染料可以在细胞中长时间停留？
 

A3: “就细胞内保留而言，“ CFSE”可以在细胞中停留最长时间。尽管荧光强度降低，但是已经证实细胞中存在荧光染料达8周。用“ Calcein-AM”和“ BCECF-AM”观察到荧光达3天。也有报道称“钙蛋白-AM”在6小时内在细胞中保留了90％”

・S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)

・H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)”

但是，“钙调蛋白-AM”和“ BCECF-AM”对细胞毒活性没有影响。

・L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)

还要注意的一点是，原始的基本骨架是荧光素，因此由于激发光而褪色由于容易发生，因此可能难以通过长期激发来观察荧光。

（尽管最好使用防褪色剂等）

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3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

Cellstain- CFSE试剂货号：C375
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂
2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

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细胞膜染色试剂—红色

CFSE(Synonyms: 5(6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester CFDA-SE 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester)

发表于由

CFSE;(Synonyms: 5(6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester; CFDA-SE; 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester) 纯度: 99.01%

CFSE (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester) 是一种细胞内荧光染料，可追踪细胞增殖。共价结合的 CFSE 在子细胞之间平均分配，从而可以区分连续的细胞分裂。

CFSEamp;;(Synonyms: 5(6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester; CFDA-SE; 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester)

CFSE Chemical Structure

CAS No. : 150347-59-4

规格 价格 是否有货 数量
5 mg ￥800 In-stock
10 mg ￥1400 In-stock
50 mg ; 询价 ;
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生物活性

CFSE (5(6)-Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester) is an intracellular fluorescent dye which can track proliferating cells. Covalently bound CFSE is divided equally between daughter cells, allowing discrimination of successive rounds of cell division[1][2].

体外研究
(In Vitro)

CFSE is a fluorescent dye which can track the cell division[1]. To examine the ability of immune cells to migrate into live slices, a single-cell suspension of autologous splenocytes or PBMC is isolated, labeling them with CFSE, and adding them to the top of the slices on day 2 of culture. After 6 additional days of culture, the CFSE-labeling immune cells (green) are found to have migrated throughout the slices. No positive cells are found in the slices without the addition of CFSE-labeling immune cells[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.
分子量

557.46

Formula

C58H38N2O22
CAS 号

150347-59-4
中文名称

5(6)-羧基二乙酸荧光素 N-琥珀酰亚胺酯
运输条件

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
储存方式

-20deg;C, sealed storage, away from moisture and light

*In solvent : -80deg;C, 6 months; -20deg;C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)
溶解性数据
In Vitro:;

DMSO : 50 mg/mL (89.69 mM; Need ultrasonic)

配制储备液
浓度 溶剂体积 质量 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7939 mL 8.9693 mL 17.9385 mL
5 mM 0.3588 mL 1.7939 mL 3.5877 mL
10 mM 0.1794 mL 0.8969 mL 1.7939 mL

*

请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。

In Vivo:

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用； 以下溶剂前显示的百
分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

  • 1.

    请依序添加每种溶剂：;10% DMSO ;; 40% PEG300 ;; 5% Tween-80 ;; 45% saline

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (3.73 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (3.73 mM，饱和度未知) 的澄清溶液。

    以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀；然后继续加入 450 μL生理盐水定容至 1 mL。

    将 0.9 g 氯化钠，完全溶解于 100 mL ddH₂O 中，得到澄清透明的生理盐水溶液

  • 2.

    请依序添加每种溶剂：;10% DMSO ;; 90% corn oil

    Solubility: ≥ 2.08 mg/mL (3.73 mM); Clear solution

    此方案可获得 ≥ 2.08 mg/mL (3.73 mM，饱和度未知) 的澄清溶液，此方案不适用于实验周期在半个月以上的实验。

    以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 20.8 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。

*以上所有助溶剂都可在 MCE 网站选购。
参考文献

  • [1]. A Bruce Lyons, et al. Flow cytometric analysis of cell division by dilution of CFSE and related dyes. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:Unit9.11.

    [2]. Xiuyun Jiang et al. Long-lived pancreatic ductal adenocarcinoma slice cultures enable precise study of the immune microenvironment. Oncoimmunology. 2017; 6(7): e1333210.
Cell Assay
[2]

Single-cell suspensions of splenocytes (or PBMC) are stained with 1 µM CFSE in PBS for 9 min at 37°C, combined with 20 mL of 10% FBS RPMI-1640 medium at RT for 2 min, centrifuged, washed, and counted. 2×106 CFSE-labeling splenocytes are added to the top of the slices in 24-well membrane culture insert[2].

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.
参考文献

  • [1]. A Bruce Lyons, et al. Flow cytometric analysis of cell division by dilution of CFSE and related dyes. Curr Protoc Cytom. 2013;Chapter 9:Unit9.11.

    [2]. Xiuyun Jiang et al. Long-lived pancreatic ductal adenocarcinoma slice cultures enable precise study of the immune microenvironment. Oncoimmunology. 2017; 6(7): e1333210.