日本同仁化学Cellstain- AO solution试剂货号：A430 3,6-Bis(dimethylamino)acridine, hydrochloride, solution CAS号：65-61-2(AO)| DOJINDO

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Cellstain- AO solution试剂货号：A430

3,6-Bis(dimethylamino)acridine, hydrochloride, solution

CAS号：65-61-2(AO)

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₇H₂₀ClN₃

分子量：

301.81

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选择规格：

1ml

期货

细胞染色检测方案

Cellstain- AO solution试剂货号：A430 3,6-Bis(dimethylamino)acridine, hydrochloride, solution CAS号：65-61-2(AO)

关联产品

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒

活死细胞双染试剂盒

活细胞质染色-绿色——Calcein-AM

3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂

2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂

细胞膜染色试剂—绿色

Cellstain- CFSE试剂

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

日本同仁化学Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341| DOJINDO

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Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341

2′-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

CAS号：23491-45-4

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₂₅H₂₇Cl₃N₆O

分子量：

533.88

特点：

● 可用于活/死细胞DNA检测

● 蓝色荧光，毒性低

● 试剂盒稳定性高。

下载说明书

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1ml

现货

细胞染色

规格性状

产品概述

荧光特性

原理

操作说明

文献

常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产品为黄色液体。

内容：试验成功

产品概述

荧光染料Hoechst 33258是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258,常用于细胞凋亡检测。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst染料可透过细胞膜并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。它们在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341

荧光特性

λex=350nm, λem=461nm

原理

Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341

操作说明

染色步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMHoechst染料溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的Hoechst染料溶液。^b）

3.将细胞在37ºC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有350 nm激发和460 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a）由于赫斯特染料可能具有致癌性，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲溶液代替培养基。

文献

1) M. J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, “Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry”, J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.

2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H. L. Roelen, van J. H. Boo and A. H. Wang, “Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex”, Biochemistry, 1992, 31(47), 11823.

3) T. Ohara and T. Tsuge, “FoSTUA, Encoding a Basic Helix-Loop-Helix Protein, Differentially Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores, Macroconidia, Microconidia, and Chlamydospores, in the Fungal Plant Pathogen Fusarium oxysporum”, Eukaryot. Cell, 2004, 3, 1412.

常见问题Q&A

Q1:如何使用Hoechst 33258。

A1：有多种使用方法，但以形态观察为例。

它用作观察凋亡细胞中核变化（染色质浓缩，断裂）的简便方法。

<试剂>

・细胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-）

・荧光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-）

•Dojindo的产物为[1 mg / mL]（约1.87 mmol / L）

<操作方法>

1. 将含有约1 x 106个细胞的细胞培养基以400 Xg离心5分钟，并弃去上清液。

2.加入100μL细胞固定溶液，并通过移液或类似方法混合。

3.在室温下静置30分钟。

4.离心400Xg，5分钟，弃去上清液。

加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg离心5分钟，弃去上清液。

（*此时，戊二醛经常被洗涤和去除。可能会导致变色）

5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL荧光染料并混合。

6.将1滴（5）的细胞溶液滴在载玻片上，盖上玻璃盖，然后按边缘。

7.在荧光显微镜下观察。

*由田沼靖（Yasushi Tanuma）指导的细胞工程独立体积实验规程系列“细胞凋亡实验规程”

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解决方案的激发波长和发射波长及其区别。

A3:波长如下。
Hoechst33342 Ex：350 nm Em：461 nm
Hoechst33258 Ex：352 nm Em：461 nm

两者的基本用法是相同的。
我们的产品是水溶液，所以稀释至所需浓度并添加。

两者之间的区别在于，它基本上是一种特异性结合腺嘌呤-胸苷部分的药物。
它也穿过活细胞的膜并与活细胞的DNA结合。
Hoechst 33342的膜渗透性略高。
Hoechst 33258似乎是dsDNA的选择性抗体。

日本同仁化学Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342| DOJINDO

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Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342

2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

CAS号：23491-52-3

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₂₇H₃₁Cl₃N₆O

分子量：

561.93

特点：

● 结合活细胞DNA

● 试剂盒稳定性高。

● 激发和发射波长分别为350 nm和460 nm

下载说明书

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选择规格：

1 ml

现货

细胞染色

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342

活动进行中

规格性状

产品概述

荧光特性

文献

常见问题Q&A

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.3. Cellular Senescence Detection Kit 细胞衰老检测

NO.4. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染

NO.5. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

规格性状

规格

特性：该产品为黄色液体

含量：试验成功

产品概述

荧光染料Hoechst 33342是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，也称bisBenzimide H33342或HOE33342常用于细胞凋亡检测。

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342

荧光特性

λex=352 nm, λem=461 nm

文献

1) M. J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, “Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry”, J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.

3) Y. Tadokoro, K. Yomogida, Y. Yagura, S. Yamada, M. Okabe and Y. Nishimune, “Characterization of Histone H2A.X Expression in Testis and Specific Labeling of Germ Cells at the Commitment Stage of Meiosis with Histone H2A.X Promoter-Enhanced Green Fluorescent Protein Transgene”, Biol. Reprod., 2003, 69, 1325.

4) F. Wada, A. Ogawa, Y. Hanai, A. Nakamura, M. Maki and K. Hitomi, “Analyses of Expression and Localization of Two Mammalian-Type Transglutaminases in Physarum polycephalum, an Acellular Slime Mold”, J. Biochem.(Tokyo), 2004, 136, 665.

5) M. Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373

6) T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, “Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

常见问题Q&A

Q1:如何使用Hoechst 33258。

A1：有多种使用方法，但以形态观察为例。

它用作观察凋亡细胞中核变化（染色质浓缩，断裂）的简便方法。

<试剂>

・细胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-）

・荧光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-）

•Dojindo的产物为[1 mg / mL]（约1.87 mmol / L）

<操作方法>

1. 将含有约1 x 106个细胞的细胞培养基以400 Xg离心5分钟，并弃去上清液。

2.加入100μL细胞固定溶液，并通过移液或类似方法混合。

3.在室温下静置30分钟。

4.离心400Xg，5分钟，弃去上清液。

加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg离心5分钟，弃去上清液。

（*此时，戊二醛经常被洗涤和去除。可能会导致变色）

5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL荧光染料并混合。

6.将1滴（5）的细胞溶液滴在载玻片上，盖上玻璃盖，然后按边缘。

7.在荧光显微镜下观察。

*由田沼靖（Yasushi Tanuma）指导的细胞工程独立体积实验规程系列“细胞凋亡实验规程”

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解决方案的激发波长和发射波长及其区别。

A3:波长如下。
Hoechst33342 Ex：350 nm Em：461 nm
Hoechst33258 Ex：352 nm Em：461 nm

两者的基本用法是相同的。
我们的产品是水溶液，所以稀释至所需浓度并添加。

日本同仁化学Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐水溶液 Cellstain- DAPI solution| DOJINDO

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Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523

4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐水溶液

Cellstain- DAPI solution

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₆H₁₇Cl₂N₅

分子量：

350.25

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选择规格：

1ml

现货

细胞染色

关联产品

Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐水溶液 Cellstain- DAPI solution

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒

活死细胞双染试剂盒

活细胞质染色-绿色——Calcein-AM

3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂

2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂

细胞膜染色试剂—绿色

Cellstain- CFSE试剂

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

日本同仁化学Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI| DOJINDO

发表于2024年6月12日由Whatman官网

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Cellstain- DAPI试剂货号：D212

4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐

Cellstain- DAPI

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₆H₁₇Cl₂N₅

分子量：

350.25

特点：

● 可用于流式细胞仪

● 活细胞核染色试剂

SDS下载

选择规格：

1 mg

现货

细胞染色

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

规格性状

产品概述

荧光特性

操作说明

文献

常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产物为黄色至微黄色的绿棕色粉末或固体，可溶于水和稀盐酸。

水溶性：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料DAPI是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对细胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360 nm和460 nm。

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

荧光特性

λex=360 nm, λem=460 nm

操作说明

产品使用步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMDAPI溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的DAPI溶液。^b）

3.将细胞在37℃下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.使用带有360 nm激发光和460 nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a）由于DAPI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的DAPI缓冲溶液代替培养基。

注意事项

制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

考虑长期存储时，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（代码：D523），以提高解决方案的稳定性。

文献

1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.

2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.

3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains”, Stain Technol.,1985, 60, 7.

4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains”, Cytometry, 1994,16,227.

5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”, J.Appl. Microbiol.,1999, 86 (3),496.

常见问题Q&A

Q1 核染色中所用染料的特征和区别是什么？

A1:这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。

除荧光波长以外的差异如下。

[EB]

它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[PI]

像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[DAPI]

与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[AO]

通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。

它渗透到活细胞的细胞膜上。

[Hoechst33342，33258]

它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。

它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

Q3 如何使用DAPI进行核染色？

A3:有以下使用情况报告示例。制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

对于长期存储，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（货号：D523），具有更高的解决方案稳定性。使用时，用缓冲液或有机溶剂将储备溶液稀释至所需浓度。

[使用DAPI进行细胞染色的示例]

包含实体瘤或簇的样品的DAPI染色示例（参考文献3）

1）用0.02％胰蛋白酶-EDTA处理，在37°C下孵育30分钟，以1,500 rpm离心5分钟，然后冲洗上清液。

2）在-20°C下用50％甲醇（也可以使用乙醇）固定后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1,500rpm离心5分钟以除去上清液。

4）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

5）每106个细胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）（pH 7.2）（1 mg / mL），并在37°C下孵育30分钟。

6）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

7）加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液，并在黑暗中于4°C染色2小时。

[使用DAPI进行细胞染色的例子] Vollenweider等人在磷酸化因子激活的杀伤（LAK）细胞的细胞增殖试验中。

使用荧光打印机执行DAPI染色并进行测量（参考2）。

那时，请使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。

使用每孔100μL进行荧光染色。

日本同仁化学Cellstain- PI solution试剂货号：P378 CAS号：25535-16-4| DOJINDO

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3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘，水溶液（3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide,aqueous solution）

CAS号：25535-16-4

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₂₇H₃₄I₂N₄

分子量：

668.39

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选择规格：

1 ml

现货

细胞染色

Cellstain- PI solution试剂货号：P378 CAS号：25535-16-4

关联产品

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒

活死细胞双染试剂盒

活细胞质染色-绿色——Calcein-AM

3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂

2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂

细胞膜染色试剂—绿色

Cellstain- CFSE试剂

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

日本同仁化学Cellstain- PI试剂货号：P346 CAS号：25535-16-4| DOJINDO

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Cellstain- PI试剂货号：P346

3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘（3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide）

CAS号：25535-16-4

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₂₇H₃₄I₂N₄

分子量：

668.39

特点：

● 与死细胞DNA结合

● 常用于细胞凋亡检测

● 可与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用

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选择规格：

1 mg

现货

细胞染色

活动进行中

规格性状

产品概述

荧光特性

操作说明

文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Calcein-AM 细胞质染色

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.3. Amine Coupling Kit 自组装单分子膜SAM

NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.5. Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

规格性状

规格

特性：该产品为红棕色粉末或固体，易溶于水和稀盐酸。

水溶性：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

Cellstain- PI试剂货号：P346 CAS号：25535-16-4

荧光特性

λex=530 nm, λem=620 nm

操作说明

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMPI溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的PI溶液。^b）

3.将细胞在37^oC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有535 nm激发光和615 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a）由于PI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的PI缓冲溶液代替培养基。

文献

1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, “An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”, J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.

2) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, “Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms”, Cytometry, 1991, 12, 330.

4) C. Souchier, M. Ffrench, M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, “Methods for Cell Proloferation Analysis by Fluorescent Image Cytometry”, Cytometry, 1995, 20, 203.

5) T. Irino, T. Kitoh, K. Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M. Schuster and M. Osaka, “Establishment of Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase Expression”, Mol. Diagn., 2004, 6, 217.

常见问题Q&A

Q1:核染色中所用染料的特征和区别是什么？

A1：

这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。

除荧光波长以外的差异如下。

[EB]

它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[PI]

像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[DAPI]

与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[AO]

通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。

它渗透到活细胞的细胞膜上。

[Hoechst33342，33258]

它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。

它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- PI试剂货号：P346 CAS号：25535-16-4

Q3:如何使用PI进行核染色？

A3:一个例子如下所示。根据细胞类型和观察条件，考虑细胞固定和试剂浓度。

[使用示例①]

Vollenweider等人进行了PI染色，并在荧光素激活的杀伤（LAK）细胞增殖试验中使用了荧光板读数器进行了测量。

此时的浓度为0.5 mg / mL PBS（-）。所用浓度为5μg/ mL柠檬酸钠溶液，每孔100μL用于荧光染色。

·I.Vollenweider，P.Groscurth，J.Immunol.Methods，149，133（1992）。

[用法示例（2）]

（1）对于包含实体瘤或团块的样品，请用0.02％tripsin EDTA处理。

在37°C下孵育30分钟后，以1500 rpm进行5分钟，然后弃去上清液。

（2）在-20℃用50％甲醇固定后，以1500rpm进行5分钟，并弃去上清液。

（3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1500rpm进行5分钟，弃去上清液。

（4）用0.2 mol / L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1500 rpm进行5分钟，并弃去上清液。

（5）每106个细胞RNase 0.2 mol / L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）溶液（1 mg / mL）

加入0.2 mL，并在37°C下孵育30分钟。

（6）用0.2 mol / L磷酸盐洗涤后，以1500 rpm进行5分钟，并弃去上清液。

（7）加入10 mL PI溶液（50μg/ mL），在黑暗中于4°C染色2小时。

・医学院出版《流式细胞仪入门》

日本同仁化学Cellstain- CFSE试剂货号：C375| DOJINDO

发表于2024年6月12日由Whatman官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

CAS号：150347-59-4

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

分子式：

C₂₉H₁₉NO₁₁

分子量：

557.46

特点：

● 可用于细胞增殖检测

● 长效荧光染色，最长三周可见

● 可用于流式细胞仪检测

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1mg

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细胞染色检测方案

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原理

荧光特性

操作说明

文献

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规格性状

规格

特性：该产物为无色至微黄色固体，可溶于二甲基亚砜和乙腈。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料 CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE 是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE 在结构上将酚羟基部位改造成 AM 体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的 CFSE 的 AM 部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE 的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。

在细胞分裂增殖过程中，CFSE 的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。另外，CFSE 标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。有报道证实 CFSE 毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

原理

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

荧光特性

荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm

操作说明

＊建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。

配制试剂：

1、从冰箱中取出CFSE试剂，放至室温后再打开。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，让粉末充分落入管底，必要时可采用离心的方法。

2、取0.9 ml DMSO^a)加到CFSE管中溶解，配制成2 mM的CFSE母液^b)（加入DMSO后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全）。

3、用PBS(-)或适当的缓冲液将其稀释成100 μM或其它浓度（如果采用载玻片观察法，建议浓度为20 μM的工作液^c))。

a) DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。

b) 由于CFSE母液遇水极易分解，所以建议分装保存，例如分装成5 μl/管。

方法：分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

c) CFSE工作液应现配现用，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。

* PBS(-)：不含钙和镁离子的PBS。

细胞染色(仅供参考)：

例1 培养板观察法

1、准备细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基^a)调整细胞浓度至约10⁷个／ml。

2、取1ml细胞悬液至试管中，加入适量CFSE工作液，轻轻搅拌混匀（建议CFSE的终浓度参考相关论文或做个预实验：分别设定终浓度为0.5,1,2,5,10,20 μM…,以确定最佳染色浓度^b)）。

3、在37℃培养箱中培养15-30分钟。

4、离心后去上清，加入2 ml PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。

5、加入合适的培养基制成细胞悬液。

6、取500 μl的细胞悬液加在培养孔中，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量^c)进行实验。

例2 载玻片观察法

1、准备1 ml细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基^a)调整细胞浓度至约10⁷个／ml。

2、取30 μl细胞悬液至试管中，加入10 μl浓度为20 μM的CFSE工作液（终浓度为5μM），轻轻搅拌混匀^b)。

3、在37 ℃培养箱中培养15-30分钟。

4、滴10 μl的细胞悬液在载玻片上，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量^C)进行实验。

＊如果背景高的话，第3步之后需要洗去多余的CFSE：

离心后去上清，加入90 μl PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。

a)尽可能用不含血清的培养基，血清中的酶和蛋白质会分解CFSE，可能会影响染色效果。

b)如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果细胞毒性大或背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。

c)根据不同的实验目的和要求，采用稀释的方法调整细胞数量。

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

文献

1) M. Bronner-Fraser, “Alterations in Neural Crest Migration by a Monoclonal Antibody That Affects Cell Adhesion”, J. Cell Biol., 1985, 101, 610.

2) A. Nose and M. Takeichi, “A Novel Cadherin Cell Adhesion Molecule:Its Expression Patterns Associated WithImplantation and Organogenesis of Mouse Embryos”, J. Cell Biol., 1986, 103, 2649.

3) S. A. Weston and C. R. Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.

4) C. K. Raymond, P. J. O’hara, G. Eichinger, J. H. Rothman and T. H. Stevens, “Molecular Analysis of the Yeast VPS3 Gene and the Role of Its Product in Vacuolar Protein Sorting and Vacuolar Segregation during the Cell Cycle”, J. Cell Biol., 1990, 111, 877.

5) G. Radcliff, R. Waite, J. Lefevre, M. D. Poulik and D. M. Callewaert, “Quantification of Effector/Target Conjugation Involving Natural Killer(NK) or Lymphokine Activated Killer(LAK) Cells by Two-color Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1991, 139, 281.

6) S. A. Weston and C. R. Parish, “Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph Nodes”, Cytometry, 1992, 13, 739.

7) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

常见问题Q&A

Q1 请告诉我如何使用CFSE。

A1：参考文献[1]中的描述如下所示。

杀死7-10周大的CBA / H小鼠，去除脾脏（或其他目标器官），然后浸入F15培养基（1％FCS）中。

然后，通过金属网获得细胞悬液，并通过离心除去红细胞，死细胞等。

将纯化的淋巴细胞悬浮在pH 7.0的PBS中至50,000,000细胞/ mL。

加入5.0μM浓度的CFSE，并在37°C下标记15分钟。悬浮在冰冷却的F15培养基（1％FCS）中并离心

用（350g，5分钟，20℃）洗涤两次。悬浮在F15培养基中。

静脉注射到CBA / H小鼠中。一定时间后，杀死鼠标并去除脾脏（或其他目标器官）。

切除淋巴细胞并分离并通过流式细胞仪分析。

参考文献[2]是关于钙黄绿素-AM的，但也通过与[1]相同的步骤将其与CFSE进行了比较。

【参考文献】

1. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, J. Immunol. Methods, 133, 87 (1990).

2. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, Cytometry, 13, 739 (1992).

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

Q3:细胞染色试剂Cellstain的哪些活细胞染色染料可以在细胞中长时间停留？

A3: “就细胞内保留而言，“ CFSE”可以在细胞中停留最长时间。尽管荧光强度降低，但是已经证实细胞中存在荧光染料达8周。用“ Calcein-AM”和“ BCECF-AM”观察到荧光达3天。也有报道称“钙蛋白-AM”在6小时内在细胞中保留了90％”

・S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)

・H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)”

但是，“钙调蛋白-AM”和“ BCECF-AM”对细胞毒活性没有影响。

・L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)

还要注意的一点是，原始的基本骨架是荧光素，因此由于激发光而褪色由于容易发生，因此可能难以通过长期激发来观察荧光。

（尽管最好使用防褪色剂等）

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日本同仁化学Cellstain- MitoRed试剂货号：R237| DOJINDO

发表于2024年6月5日由Whatman官网

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Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

9-[2-(4′-MethylcoumariN-7′-oxycarbonyl)phenyl]-3,6-bis(diethylamino)xanthylium chloride

Cellstain- MitoRed

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

分子式：

C₃₈H₃₇ClN₂O₅

分子量：

637.17

特点：

● 基于膜电位对线粒体染色

● 红色荧光

● 激发和发射波长分别为560 nm和580 nm

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选择规格：

50μg*8

期货

线粒体检测方案

规格性状

产品概述

荧光特性

操作说明

文献

常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产物为品红色至紫棕色固体，可溶于二甲基亚砜和甲醇。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验适合

产品概述

MitoRed为基于罗丹明的可透过细胞膜的染料。它集中于线粒体内并发出红色荧光。MitoRed与线粒体的相互作用取决于线粒体的膜电位。

可用20-200 nM MitoRed对线粒体染色。MitoRed的激发和发射波长分别为560 nm和580 nm。

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

荧光特性

λex=560 nm, λem=580 nm

操作说明

染色步骤

1. 将50 µg MitoRed溶解到78 µl DMSO中制备成1 mM MitoRed-DMSO溶液。

2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×10⁴-5×10⁵个/ml。

3. 孵育该载玻片，用PBS或Hank’s液洗涤细胞。

4. 用培养基稀释1 mM MitoRed溶液以制备20-200 nM MitoRed缓冲液。

5. 将MitoRed缓冲液^a) 加入载玻片并在37℃下孵育30分钟至1小时。

6. 去除MitoRed缓冲液并用培养基洗涤细胞。^b)

7. 用带有罗丹明滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a) 加入细胞前将MitoRed缓冲液放在37℃下孵育。

b) 洗涤细胞后为了固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15-20分钟，接着用PBS洗涤。

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

文献

1) R. Ikeda, T. Sugita, E. S. Jacobson and T. Shinoda, “Effects of Melanin upon Susceptibility of Cryptococcus to Antifungals”, Microbiol. Immunol., 2003, 47(4), 271.

常见问题Q&A

Q1:如何使用Mito Red。

A1：

下面显示了一个使用HeLa细胞的示例。

*根据细胞类型和观察条件，有必要检查试剂浓度和染色条件。

<试剂>

-Cellstain®-MitoRed

二甲基亚砜

用DMSO 78μL→1 mmol / L溶液溶解MitoRed 50μg（1瓶）

<操作方法>

1.培养小室玻片上的细胞，以使细胞密度合适。

（1×105至1×106细胞/ mL）

2.除去培养基，并轻轻洗涤（培养基，PBS，Hank溶液等）。

用中等浓度将3.1 mmol / L的MitoRed溶液稀释至最终浓度为20-200 nmol / L。

（最好先将其在37°C的温度下保温，然后再添加到细胞中）

将稀释的MitoRed溶液加入孔中，并在培养条件下孵育大约30分钟至1小时。

4.除去MitoRed溶液，并用中性溶液洗涤。

5.在荧光显微镜G激发下观察。

（Λex= 560 nm，λem= 580 nm）

固定电池时，请执行以下（3）之后的操作。

4.除去MitoRed溶液并洗涤。

（无血清培养基，PBS，Hank溶液等）

5.用5.10％中性福尔马林缓冲液固定15至20分钟。

6.用PBS清洁。

7.在荧光显微镜下观察。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

Q3：不管是活细胞还是死细胞，它都会染色细胞内线粒体吗？

A3:仅活细胞。它不能用于死细胞，因为线粒体的膜电位会丢失。

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