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Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！

发表于由

Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！

Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！




蛋白质免疫印迹法（也称蛋白印迹、免疫印迹或Western Blot）使用抗体来识别与转印膜结合的特定蛋白质靶标，利用抗体-抗原相互作用的特异性，从复杂的蛋白质混合物（例如细胞或组织裂解液）中鉴定目的蛋白。目前广泛应用于分子生物学、生物化学和免疫遗传学实验中。

然而，Western Blot步骤多、耗时长，忽略每一个细节都可能影响最终的结果。因此我们总结了一份WB专用试剂清单，全方位助您在样品准备、凝胶电泳、转膜步骤过程中避雷，提升实验效率！


◆样品制备

RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解缓冲液，是一种传统的可用于裂解细胞或组织的快速裂解液。通常使用RIPA buffer从组织或细胞中抽提可溶性蛋白，用于后续的WB、IP、co-IP等实验。

然而，不少细胞膜上的功能性蛋白，会形成不溶性的脂筏（Lipid Raft）结构，常规的RIPA buffer不能溶解。SDS 能溶解脂筏但具有很强的变性作用，会破坏蛋白的结构和功能。UltraRIPA buffer kit则能很好地解决这个两难，使用buffer A和buffer B的组合，实现迅速、高效地提取抗去垢剂的脂筏蛋白质，且不会使蛋白失活，后续可对脂筏中蛋白进行下游分析和活性测试。


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产品编号

产品名称

规格

182-02451

RIPA Buffer

100 mL

188-02453

250 mL

F015

UltraRIPA kit for Lipid Raft
UltraRIPA 脂筏提取缓冲液套装

1 kit

◆凝胶电泳

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ是预染蛋白SDS-PAGE用分子量标记，可直接使用无需稀释，可以跑出12条偶联染料的有色条带，并且不会发生弯曲，用于指示各条带的位置、判断蛋白质转膜效率。

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产品编号

产品名称

规格

236-02463

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ
WIDE-VIEW™ 预染蛋白质标记Ⅲ

25 μL

230-02461

500 μL

234-02464

500 μL×3

Phos-tag™ Magenta是最受欢迎的Phos-tag™凝胶荧光染料，无需放射性物质、化学物质标签、抗体，即可在生理pH范围内对SDS-PAGE凝胶的磷酸化蛋白进行特异性染色。另还有多种颜色供选择。

产品编号

产品名称

规格

386-15221

Phos-tag™ Magenta
Phos-tag™品红荧光染料

0.2 mg

382-15201

Phos-tag™ Aqua
Phos-tag™ 浅绿荧光染料

0.2 mg

380-15241

Phos-tag™ Yellow
Phos-tag™ 黄色荧光染料

0.2 mg

389-15211

Phos-tag™ Cyan
Phos-tag™ 蓝绿荧光染料

0.2 mg

含2-巯基乙醇的传统样品缓冲液（产品编号#196-11022）适用于Laemmli体系凝胶，是一种可广泛兼容各种应用的常规缓冲液。

产品编号

产品名称

规格

196-11022

Sample Buffer Solution(2ME+)(×2)

25 mL

然而当需要分离分子量范围宽广的蛋白时，只需将独特的大范围分离缓冲液AllView PAGE Buffer替代常规电泳buffer，即可在固定浓度凝胶上实现梯度胶电泳效果，不需要花时间配梯度胶或购买昂贵的商业化梯度胶。

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产品编号

产品名称

规格

DS520

AllView PAGE Buffer

500 mL

◆蛋白质转印

为了进一步特异性检测靶蛋白，通常需要将蛋白从电泳凝胶上转印到NC膜或PVDF膜上，因此转膜是决定WB成败的最关键因素之一，转膜效率的提升对于优化实验也至关重要。高效转膜液AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer均通用于湿转和半干转，比传统的Towbin buffer（Tris-甘氨酸）及Towbin SDS buffer效率高。尤其适用于分析磷酸化水平的Phos-tag™凝胶的转印。

产品编号

产品名称

规格

019-26211

AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer 

30 mL

015-26213

1 L

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，不受氨基酸种类和序列的影响，可直接灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白，无需PVDF膜的封闭处理，无需预先进行电泳分离。其中以BTL-111的灵敏度最高。

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使用Phos-tag™ Biotin检测

产品编号

产品名称

规格

308-97201

Phos-tag™ BiotinBTL-111 1mM AqueousSolution

 Phos-tagWestern Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！ 生物素1mM水溶液

0.1 mL

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Immuno-enhancer是免疫印迹抗原抗体反应促进剂。当抗体的反应性不理想时，Immuno-enhancer可以作为稀释液和抗体混合，促进抗原-抗体反应，提高WB检测灵敏度，获得高信噪比的成像效果。

产品编号

产品名称

规格

290-68603

Immuno-enhancer

免疫印迹抗原抗体反应促进剂

10 tests

298-68604

40 tests

还在排队等成像系统？

Enzo的WESTERNVIEW™ Detection Kit是专用于Western Blot检测的免疫印迹显色试剂。在抗体孵育后加入，无需显影、无需专用设备，即可肉眼观测到低背景、信号持久的清晰条带。无需成像设备和显影液也可使用！


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使用抗体孵育后，再用WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)显影

产品编号

产品名称

规格

ENZ-KIT182-0001

WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠）

1 kit

ENZ-KIT183-0001

WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Rabbit)

WESTERNVIEW™检测试剂盒（抗兔）

1 kit

ENZ-KIT163-0001

WESTERNVIEW™ Dual Detection Kit (Anti-Mouse/Anti-Rabbit) 

1 kit

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠） Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

发表于由

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠）
Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠）免疫印迹显色试剂盒（抗小鼠） Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

Chromogenic Western Blot Kit (Anti-Mouse)

信号、灵敏度更强的蛋白印迹显色试剂盒

Chromogenic Western Blot kit with increased signal and sensitivity

●　更灵敏的检测——能够检测较低浓度的蛋白质

●　易于使用——所有试剂均可随时使用或即可稀释，节省宝贵的时间

●　适应性好——适用于各种小鼠来源的蛋白质

显色蛋白质印迹试剂盒（抗小鼠）能通过免疫检测来识别蛋白质印迹上的一抗。该试剂盒内有完整的一套试剂，包含经优化的即用型或即可稀释试剂。

高灵敏度，可检测ng级蛋白，低表达蛋白无需纯化或浓缩样品，节省1~2h实验时间。


原装进口美国KPL公司WB化学发光底物–现货供应

发表于由

Western Blot（免疫印迹，简称WB）法是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出专一目的蛋白。将聚丙烯酰胺凝胶上分辨出的蛋白转移到硝酸纤维素膜上，膜以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及免疫原性。一抗特异地与蛋白上的抗原决定簇结合，然后用二抗检测已结合上去的抗体。再加入底物进行显色或发光，从而实现对目的蛋白进行定性或定量检测。该技术已广泛应用于检测蛋白水平的表达。

Western Blot的优点是灵敏度高，可达ng级，用化学发光显色法可达pg 或fg级，方便，特异性高。经典的Western Blot 包括蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色等五个步骤。

Western Blot 实验要得到一个优质的实验图片，除了与使用高质量的一抗、二抗以外，还与后期的检测系统的灵敏度有很重要的关系。Western Blot目前使用最多的是化学发光显色，当然也有采用普通沉淀型底物进行比色法分析，或者使用荧光二抗进行的荧光法检测也越来越受欢迎。上海金畔生物科技有限公司代理的KPL公司为您提供各种检测方法，各种灵敏度的WB显色底物，可以满足您不同的实验需求。

上海金畔现货供应KPL公司Western Blot （WB）底物产品信息

检测方法

酶

热销度

品名

货号

组分

膜张数
(10cm2)

颜色

灵敏度
(HRP g/ml)

化

学

发

光

HRP

AAAAA

LumiGLO 2-C

54-61-00

2*120 ml(A液+B液)

240

–

(pg)10-12

AAA

LumiGLO Reserve 3-C

54-71-02

1*17 mL A液,1*34 mL B液,1*100 mL 20X洗脱液

100

–

(pg~fg)

10-15~10-12

AAA

LumiGLO Ultra 2-C

54-51-00

2*25 ml(A液+B液)

100

–

(fg)10-15

AP

AA

PhosphaGLO 1-C

55-60-03

1* 30 mL

60

–

(pg)10-12

AA

PhosphaGLO Reserve 1-C

55-60-01

1*30 mL

60

–

(fg)10-15

比

色

法

HRP

AAAA

TMB 1-C

50-77-18

1* 100 mL

100

深蓝色

(pg)10-12

AAA

TMB Membrane System  3-C

50-77-00

4*100 ml(A液+B液)
1*40 ml增强剂

400

深蓝色

(ng)10-9

AP

AAA

BCIP/NBT 1-C

50-81-18

1* 100 mL

100

蓝紫色

(ng~pg)

10-12~10-9

AAA

BCIP/NBT System 2-C

50-81-00

2*100 ml(A液+B液)
1*100 ml缓冲液

200

蓝紫色

(ng~pg)

10-12~10-9

AAA

FirePhos 1-C

50-81-30

1* 100 mL

100

红色

(ng~pg)

10-12~10-9

LumiGLPeroxidase Chemiluminescent Substrate是基于鲁米诺开发的一种非同位素的HRP底物，当有H2O2存在时，HRP可催化鲁米诺发光，且这个反应相当迅速。该底物检测信号与被检蛋白浓度呈非常好的正相关关系，灵敏度高达pg级别。此外，反应物可从膜上洗去，然后重新加入底物反应，如此进行实验结果的优化而不再需要重复全部WB过程。LumiGLO Reserve是对LumiGLO的第二代升级产品，可检测pg-fg级(HRP g/ml)，LumiGLO Ultra则是第三代产品，信号超强，能检测fg级。

产品特点：

1.既可用于WB又可用于ELISA；

2.信号产生迅速；

3.灵敏度高，是同类产品的2倍以上

4.全部试剂均为即用型的，使用方便；

5.工作液可存放8~24h；

6.发光时间长，可持续1~2小时；

7.可于2~8℃稳定保存1年以上。

KPL是世界上很大的二抗和底物显色系统生产商，也是世界上很早实现亲和纯化二抗商业化的生物公司。 KPL拥有近 40 年的产品研发经验， 通过ISO 9001 质量体系认证，所有产品具有质量批间差小，品质可靠，高纯度、高灵敏度、高信噪比 (信号强、背景低)等特点，成为深受广大诊断企业好评。

上海金畔作为KPL的中国一级代理商，致力于KPL优秀产品的中国推广，为国内的广大科研工作者提供专业的产品和服务。如果你对上述产品及相关技术信息感兴趣，请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案，或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多！