PROTEOSTAT® Aggresome detection kit
蛋白聚集小体检测试剂盒
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蛋白聚集小体检测试剂盒
PROTEOSTAT® Aggresome detection kit
◆原理
聚集小体(Aggresome)是由一群不正常堆叠在一起的蛋白质所形成的包涵体(Inclusion Bodies)。聚集小体的出现往往也表明细胞正处于某种应激状态,比如高温、病毒感染、活性氧自由基攻击等。聚集体通常是响应细胞应激而形成,并通过分离错误折叠的蛋白质提供细胞保护机制,最终导致它们被自噬清除。此外,蛋白质聚集体的形成是多种人类疾病的标志,例如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症、肌萎缩侧索硬化症或酒精性肝病。
PROTEOSTAT® Aggresome detection kit中包含的 PROTEOSTAT® 是一种分子转子染料,在溶液中沿着单个中心键的自由分子内旋转可防止荧光产生。当它特异地插入到错误折叠和聚集的蛋白中的交叉β-sheet四级结构中,旋转受到抑制并导致发出强烈的荧光。
PROTEOSTAT® 聚集小体检测试剂盒提供了一种快速、特异、定量的方法来标记细胞中的聚集小体,且无需进行人工蛋白定点突变。PROTEOSTAT® 染料已在广泛的条件下对多种小分子调节剂进行验证,适用于具有治疗价值的化学物的筛选。此外,本试剂盒还适用于多重免疫荧光,以在自噬和聚集体形成的背景下研究您的目标分子。
◆试剂盒组成
组分 |
包装 |
PROTEOSTAT® Aggresome Detection Reagent |
10 μL |
Hoechst 33342 Nuclear Stain |
50 μL |
Proteasome Inhibitor (MG-132) |
120 nM |
10×Assay Buffer |
25 mL |
◆特点
● 提供基于细胞的灵敏的药物反应性测定,以在真实的细胞环境中识别与神经退行性疾病相关的抑制剂
● 可靠且简单的检测,不需要非生理性蛋白质突变或基因工程细胞系
● 作用条件广泛,适用于筛选具有潜在治疗价值的小分子化合物
● 已进行优化以兼容免疫染色
● 可通过流式细胞术轻松量化聚集体和相关包涵体
● 可用于神经退行性疾病、肝病、毒理学研究等的研究
◆案例・应用
■ 应用实例 1:流式细胞术检测聚集小体
流式细胞术的分析:Jurkat细胞在37°C下用 0.2% DMSO对照或用5 µM MG-132诱导过夜。处理后,将细胞固定并与PROTEOSTAT® 染料一起孵育,无需洗涤即通过流式细胞术在FL3通道中使用488 nm激光进行分析。在 MG-132处理的细胞中,红色荧光信号增加约3倍。所描述的测定允许评估蛋白质聚集的影响。