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品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.：58319-92-9 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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011-14441 |
for Biochemistry | 10 ug | – |
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– | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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特点：
●可获得稳定的ADP/ATP比值
●溶液配制后可以保存
●冷藏保存(无需解冻操作)
产品解说
产品概述
通常情况下，当细胞内ATP浓度降低时，会由二磷酸腺苷(ADP)重新合成为ATP，以维持细胞内一定的ATP浓度。当产生ATP的相关代谢发生紊乱时，ADP无法再合成为ATP，ATP却不断地分解成为ADP，导致ADP/ATP的比例上升。而ADP/ATP比率的变化与细胞凋亡、细胞自噬、能量代谢等诸多途径息息相关，因此经常被作为细胞活性的指标之一检测。
参考文献
1、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”，2023, Advanced Science, doi：10.1002/advs.202302136
2、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, and Xinquan Jiang，“Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration”，2023，Advanced Science ，DOI: 10.1002/advs.202302136
3、Takeshi Ikizawa , Kazutaka Ikeda, Makoto Arita, Shojiro Kitajima , Tomoyoshi Soga , Hidenori Ichijo, and Isao Naguro，“Mitochondria directly sense osmotic stress to trigger rapid metabolic remodeling via regulation of pyruvate dehydrogenase phosphorylation”，2022，Research Article，doi.org/10.1016/j.jbc.2022.102837
规格性状
检测原理
本试剂盒可以检测细胞中ADP与ATP的比率。首先用萤火虫荧光素酶法检测细胞内的ATP。
之后用酶将细胞内的ADP全部转化为ATP，再用相同的发光原理检测ATP，即可算出细胞内ADP/ATP的比率。
与其他公司产品比较
本试剂盒的检测结果，不受ATP和ADP的总量影响，比值的结果稳定。
实验例
使用Staurosporine诱导细胞凋亡后，用本试剂盒检测细胞中ADP/ATP的比值。另外，用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI染料标记的Staurosporine诱导凋亡的细胞。
结果显示，Staurosporine诱导后的细胞中ADP/ATP的比例明显上升。相同条件的细胞中也观察到磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻以及细胞膜破损。说明凋亡细胞中的ADP/ATP的比率上升。
＜ADP/ATP比的检测结果＞
常见问题Q&A
| Q：一个试剂盒可以检测多少个样品？ |
| A：按照每个样品3个复孔计算，可以检测32个样品，96孔板的孔板设置请参考说明书。 |
| Q：检测时是否可以用白色96孔板以外的孔板？ |
| A：黑色和透明孔板都会造成发光强度的降低，透明孔板还会导致背景升高。因此建议使用白色96孔板。 |
| Q：配制好的working solution是否可以保存？ |
| A：本试剂盒共包含4种working solution，ADP working solution无法保存，请现配现用。其他3种的保存条件及保存时间如下： |
| Q：确定最佳细胞数的方法是什么？ |
| A：配制梯度浓度的细胞悬液播种至孔板中，按照最终实验相同的条件进行培养。使用本试剂盒制作标准曲线(参照图1)，选择呈直线性的范围，并且ADP/ATP比率(参考图2)在相对稳定的范围内进行最终实验的检测。下图的情况，最细胞数的范围是2,000~4,000个。 |
| Q：发光法检测波长为多少？ |
| A：由于是通过萤光素检测，所以检测波长为556 nm。 |
关联产品
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线粒体呼吸
| ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence | A552 | 检测细胞中ADP与ATP的比率 |
| Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒 | E297 | 氧消耗量检测 |
| Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒 | CK18 | ATP活性检测 |
| Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 | G268 | 谷氨酰胺的定量检测 |
| Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 | G269 | 谷氨酸的定量检测 |
| NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒 | N509 | NAD/NADH检测试剂盒 |
| NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒 | N510 | NADP/NADPH检测 |
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特点：
●可获得稳定的ADP/ATP比值
●溶液配制后可以保存
●冷藏保存(无需解冻操作)
产品解说
产品概述
通常情况下，当细胞内ATP浓度降低时，会由二磷酸腺苷(ADP)重新合成为ATP，以维持细胞内一定的ATP浓度。当产生ATP的相关代谢发生紊乱时，ADP无法再合成为ATP，ATP却不断地分解成为ADP，导致ADP/ATP的比例上升。而ADP/ATP比率的变化与细胞凋亡、细胞自噬、能量代谢等诸多途径息息相关，因此经常被作为细胞活性的指标之一检测。
产品文献
1、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”，2023, Advanced Science, doi：10.1002/advs.202302136
规格性状
检测原理
本试剂盒可以检测细胞中ADP与ATP的比率。首先用萤火虫荧光素酶法检测细胞内的ATP。
之后用酶将细胞内的ADP全部转化为ATP，再用相同的发光原理检测ATP，即可算出细胞内ADP/ATP的比率。
与其他公司产品比较
本试剂盒的检测结果，不受ATP和ADP的总量影响，比值的结果稳定。
实验例
使用Staurosporine诱导细胞凋亡后，用本试剂盒检测细胞中ADP/ATP的比值。另外，用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI染料标记的Staurosporine诱导凋亡的细胞。
结果显示，Staurosporine诱导后的细胞中ADP/ATP的比例明显上升。相同条件的细胞中也观察到磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻以及细胞膜破损。说明凋亡细胞中的ADP/ATP的比率上升。
＜ADP/ATP比的检测结果＞
常见问题Q&A
| Q：一个试剂盒可以检测多少个样品？ |
| A：按照每个样品3个复孔计算，可以检测32个样品，96孔板的孔板设置请参考说明书。 |
| Q：检测时是否可以用白色96孔板以外的孔板？ |
| A：黑色和透明孔板都会造成发光强度的降低，透明孔板还会导致背景升高。因此建议使用白色96孔板。 |
| Q：配制好的working solution是否可以保存？ |
| A：本试剂盒共包含4种working solution，ADP working solution无法保存，请现配现用。其他3种的保存条件及保存时间如下： |
| Q：确定最佳细胞数的方法是什么？ |
| A：配制梯度浓度的细胞悬液播种至孔板中，按照最终实验相同的条件进行培养。使用本试剂盒制作标准曲线(参照图1)，选择呈直线性的范围，并且ADP/ATP比率(参考图2)在相对稳定的范围内进行最终实验的检测。下图的情况，最细胞数的范围是2,000~4,000个。 |
| Q：发光法检测波长为多少？ |
| A：由于是通过萤光素检测，所以检测波长为556 nm。 |
上海金畔生物科技有限公司提供天然产物萜类及其苷类Terpenoids and Glycosides。
Carboxyatractyloside dipotassium (Synonyms: Gummiferin dipotassium) 纯度: 98.69%
Carboxyatractyloside dipotassium 是一种有毒性的天然产物，为 ADP/ATP 载体蛋白 (ADP/ATP carrier) 抑制剂，抑制线粒体 ADP/ATP 的转运。
Carboxyatractyloside dipotassium Chemical Structure
CAS No. : 33286-30-5
| 规格 | 价格 | 是否有货 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO | ￥5320 | In-stock | |
| 1 mg | ￥1500 | In-stock | |
| 5 mg | ￥3360 | In-stock | |
| 10 mg | ￥5710 | In-stock | |
| 50 mg | 询价 | ||
| 100 mg | 询价 |
* Please select Quantity before adding items.
| 生物活性 |
Carboxyatractyloside dipotassium is a toxic natural product, acts as an inhibitor of ADP/ATP carrier, inhibits mitochondrial ADP/ATP transport[1]. |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 分子量 |
847.00 |
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| Formula |
C31H44K2O18S2 |
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| CAS 号 |
33286-30-5 |
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| 运输条件 |
Room temperature in continental US; may vary elsewhere. |
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| 储存方式 |
-20°C, sealed storage, away from moisture and light *In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light) |
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| 溶解性数据 |
In Vitro:
H2O : 100 mg/mL (118.06 mM; Need ultrasonic) DMSO : 25 mg/mL (29.52 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C) 配制储备液
*
请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 In Vivo:
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂： ——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用； 以下溶剂前显示的百
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| 参考文献 |
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一种重要的翻译后修饰
![多聚ADP-核糖基化修饰[PARylation：Poly(ADP-ribosyl)ation]](http://www.boykyo.com.cn/wp-content/uploads/2024/04/2315402730481177.jpg "2315402730481177.jpg")
![多聚ADP-核糖基化修饰[PARylation：Poly(ADP-ribosyl)ation]](http://www.boykyo.com.cn/wp-content/uploads/2024/04/20240410_661629f23ec5e.jpg "0916284798391389.jpg")
图：多聚ADP-核糖基化修饰和PAR去除的原理示意图（源自N.J. Curtin & C. Szabo; Nat. Rev. Drug Discov. 19, 711 (2020)）
多聚ADP-核糖基化修饰[PARylation：Poly(ADP-ribosyl)ation]，是一种翻译后修饰过程（类似于磷酸化、甲基化或乙酰化等修饰），通过该过程，ADP-核糖的聚合物（ADP-核糖残基在2~200或以上的pADPr或PAR）可利用PAR聚合酶（PARP）酶共价结合至核蛋白上。多聚ADP-核糖基化的翻译后修饰[PARylation：Poly(ADP-ribosyl)ation]在细胞生理学和应激反应中发挥着重要的作用。这种修饰由多聚ADP-核糖聚合酶（PARPs，也称为ARTDs）的家族成员进行催化。它还参与许多生物学进程，包括基因组稳定性维持、DNA损伤反应、DNA修复、复制和转录、染色质重塑、应激反应、细胞代谢和细胞死亡的调控。此外，PARPs在癌症治疗中是具有应用潜力的靶点，可作为化疗增敏剂与传统的DNA损伤化疗结合使用，也可以单独作为药物应用于缺乏同源重组的肿瘤。
◆多聚ADP-核糖聚合酶（PARPs）
多聚ADP-核糖（PAR）对核蛋白的翻译后修饰，主要由多聚ADP-核糖聚合酶1（PARP-1/ARTD1）催化，少部分以NAD+为底物，由其他的多聚ADP-核糖聚合酶进行催化。PARP-1是一种高含量且高度保守的、呈组成性表达的蛋白。然而，其催化活性主要取决于DNA单链或双链断裂的出现，这种断裂的出现可以被该酶的DNA结合结构域中的两个锌指所识别。
PARP-1被DNA链断裂选择性激活后，会催化PAR的长支链添加至各种核蛋白上，尤其是PARP自身。在DNA损伤的活细胞所形成的PAR量与细胞损伤程度相称。在DNA损伤的条件下，PAR会发生急剧的衰变，半衰期只有几分钟，这是因为PAR被多聚ADP-核糖水解酶（PARG）迅速水解并转化为游离的ADP-核糖。
除自动修饰的PARP-1外，还有许多蛋白已被认定为多聚ADP-核糖基化修饰的靶蛋白（受体），其中包括染色质-结构蛋白DEK。更重要的是，已表明PAR是以非共价但特异性的方式与多种蛋白质结合的。PAR这种非共价结合与特异性结合的蛋白（即XPA、p53、WRN）之间有着高亲和力（nM级），其同时取决于PAR链长和结合蛋白，表明其中存在着一种“PAR代码”。
如上所述，PAR不仅参与调节细胞存活和细胞死亡的程序，还被发现可以调节与PARP家族新成员相关的越来越多的其他生物学进程，包括转录调节、细胞分裂、细胞内运输、炎症和能量代谢等进程。
参考文献：
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1. |
Functions of PARylation in DNA Damage Repair Pathways: H. Wei & X. Yu; Gen. Prot. Bioinform. 14, 131 (2016) |
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2. |
In Vivo Level of Poly(ADP-ribose): M. Miwa, et al.; Challenges 9, 23 (2018) |
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3. |
The Enigmatic Function of PARP1: From PARylation Activity to PAR Readers: T. Kamaletdinova, et al.; Cells 8, 1625 (2019) |
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4. |
Novel insights into PARPs in gene expression: regulation of RNA metabolism: Y. Ke, et al.; Cell. Mol. Life Sci. 76, 3283 (2019) |
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5. |
Poly(ADP-Ribose) Glycohydrolase (PARG) vs. Poly(ADP-Ribose) Polymerase (PARP) – Function in Genome Maintenance and Relevance of Inhibitors for Anti-cancer Therapy: D. Harrision, et al.; Front. Mol. Biosci. 7, 191 (2020) |
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6. |
Poly(ADP- ribose) polymerase inhibition: past, present and future: N.J. Curtin & C. Szabo; Nat. Rev. Drug Discov. 19, 711 (2020) |
◆用于PAR & PARP研究的高质量试剂
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标准抗体：抗多聚ADP-核糖[PAR]，mAb（10H） |
可提供批量包装的产品！ |
在PARP领域具有新进展的大部分研究，特别是与酶的催化活性相关的，都是得益于新型ADP核糖检测试剂的开发。几十年来，这个领域一直依赖于抗PAR单抗（产品编号：AG-20T-0001），这种单克隆抗体可以与长度超过10个ADP核糖单位的PAR链结合，甚至可以在完整细胞水平上通过免疫荧光对多聚ADP-核糖（PAR）可视化。因此，这种抗PAR（10H）抗体被认为是多聚ADP-核糖基化修饰领域的标准抗体，并已刊登于数百种出版物中。这种抗体目前已应用于western blot、免疫组化、免疫细胞化学和流式细胞术的研究中。该抗体可以识别由多种PARP多聚ADP-核糖聚合酶合成的多聚ADP-核糖，如人、小鼠、大鼠或果蝇的PARP酶。
![多聚ADP-核糖基化修饰[PARylation：Poly(ADP-ribosyl)ation]](http://www.boykyo.com.cn/wp-content/uploads/2024/04/20240410_661629f24ebd2.png "0916284803425369.png")
图：使用了抗PAR（10H）的典型western blot图。该图显示U937细胞对H2O2有着剂量依赖性，且使用H2O2诱导多聚ADP-核糖基化（PARP-1激
图：活），在10 min时检测到的PARP-1激活阈值为200 mM。根据对照泳道，表明PARP-1和PKA在相同实验条件下的蛋白水平不变。
图：（A. Brunyanszki, et al.; Mol. Pharmacol. 86, 450 (2014)）
◆产品列表
高活性PARPs＆PARG
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产品编号 |
产品名称 |
包装 |
产品描述 |
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AG-40T-0010 |
PARP-1 [ARTD1] (catalytic domain) (human) (rec.) (His) 重组人PARP-1 [ARTD1]（催化结构域）（His标签） |
20 µg |
人PARP-1 [ARTD1]（aa 656-1014）与MYC 和His-tag结合。 在Sf21细胞中产生。活性：形成多聚ADP-核糖 需要约50 ng。 |
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AG-40T-0011 |
PARP-1 [ARTD1] (human) (rec.) (His) (high purity) 重组人PARP-1 [ARTD1]（His标签）（高纯度） |
10 µg |
人全长PARP-1 [ARTD1]与MYC和His-tag结 合。在Sf21细胞中产生。活性：≥1200 U/mg 蛋白。 |
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AG-40T-0012 |
PARP-2 [ARTD2] (mouse) (rec.) (His) (high purity) 重组人PARP-2 [ARTD2]（His标签）（高纯度） |
10 µg |
小鼠全长PARP-2[ARTD2]与His-tag结合。在 Sf21细胞中产生。活性：≥600 U/mg蛋白。 |
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AG-40T-0013 |
PARP-3 [ARTD3] (human) (rec.) (His) (high purity) 重组人PARP-3 [ARTD3]（His标签）（高纯度） |
10 µg |
人全长PARP-3[ARTD3]与HA-tag和His-tag结 合。在Sf21细胞中产生。活性：10 U/mg蛋白 （仅指单ADP-核糖基转移酶活性）。 |
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AG-40T-0015 |
PARP-1[ARTD1](E988K Mutant) (human) (rec.) Control 重组人PARP-1 [ARTD1]（E988K 突变）对照 |
10 µg |
人全长PARP-1的失活突变E988K与HA-tag和 His-tag结合。在Sf21细胞中产生。活性：野生 型PARP-1的0.5%。 |
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AG-40T-0022 |
PARG (human) (rec.) (His) (highly active) 重组人PARG（His标签）（高活性） |
2 µg |
人PARG与His-tag结合。 在Sf21细胞中产生。活性：多聚ADP-核糖的降 解实验需要约100 ng。 |
特异性PARP抗体
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产品编号 |
产品名称 |
包装 |
产品描述 |
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AG-25T-0001 |
anti-PARP-1 [ARTD1] (mouse), pAb 抗小鼠聚ADP核糖聚合酶-1[ARTD1]多抗 |
100 µL |
可识别小鼠PARP-1[ARTD1]。与人PARP-1的 交叉反应较弱。适用于ICC、IHC、IP和 Western blot。 |
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AG-25T-0002 |
anti-PARP-1 [ARTD1] (human), pAb 抗人聚ADP核糖聚合酶-1[ARTD1]多抗 |
100 µL |
可识别人PARP-1[ARTD1]。与小鼠、猴PARP- 1的交叉反应较弱。适用于ICC、IHC、IP和 Western blot。 |
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AG-25T-0003 |
anti-PARP-2 [ARTD2] (mouse), pAb 抗小鼠聚ADP核糖聚合酶-2[ARTD2]多抗 |
100 µL |
可识别小鼠PARP-2[ARTD2]。与人PARP-2的 交叉反应较弱。适用于ICC、IHC、IP和 Western blot。 |
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AG-20T-0004 |
anti-PARP-10 [ARTD10] (human), mAb (5H11) 抗人PARP-10 [ARTD10]单抗（5H11） |
1 mL |
可识别抗原表位在aa 256-407之间的，包含 甘氨酸富集区的人PARP-10 [ARTD10]。适用 于ICC、IP和Western blot。 |
PARPs＆PARG的小分子调节剂
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产品编号 |
产品名称 |
包装 |
产品描述 |
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SYN-1190 |
AS-703026 |
1 mg |
具有选择性、非竞争性和口服生物有效性的 MEK1/2抑制剂，可通过caspase-3和PARP裂 解在多发性骨髓瘤细胞中诱导凋亡。 |
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5 mg |
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10 mg |
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50 mg |
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100 mg |
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SYN-3046 |
AZ9482 |
1 mg |
强效和选择性PARP抑制剂（PARP- 1、-2、-3、-6，TNKS1/PARP-5a和TNKS2对 应的IC50分别为1、1、46、640、9和160 nM）。 |
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5 mg |
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10 mg |
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50 mg |
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100 mg |
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BVT-0079 |
Benadrostin |
500 µg |
稀有的天然PARP抑制剂（IC50=35 μM）。 |
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1 mg |
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AG-CR1-0037 |
DPQ |
1 mg |
细胞渗透性强、有效的PARP-1抑制剂（IC50= 40 nM）。对PARP-2的效力比PARP-1低10倍 左右。 |
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5 mg |
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AG-CR1-3706 |
GeA-69 |
1 mg |
针对多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶14（PARP-14 M2）（Kd=0.86 µM）的macrodomain结构 域2的强效和选择性变构抑制剂。PARP-14是一 种与炎症性疾病和多种癌症相关的抗凋亡促活 蛋白。 |
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AG-CN2-0481 |
Genipin 京尼平 |
25 mg |
诱导PARP裂解和诱导由caspase-3-、 caspase-9介导的细胞凋亡。 |
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100 mg |
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500 mg |
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AG-CR1-0024 |
1,5-Isoquinolinediol 1,5-异喹啉二醇 |
5 mg |
细胞渗透性强、有效的PARP-1抑制剂 （IC50=0.39 μM）。 |
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25 mg |
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100 mg |
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AG-CR1-3581 |
IWR-1-endo Wnt抑制剂 |
5 mg |
细胞渗透性强的Tankyrase-1/PARP- 5a（IC50=131 nM）和Tankyrase-2/PARP- 5b（IC50=56 nM）抑制剂（体外自 PARylation研究）。 |
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25 mg |
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CDX-M0565 |
MK-4827 tosylate MK-4827甲苯磺酸盐 |
10 mg |
PARP-1和PARP-2的口服生物有效性抑制剂 （IC50分别为3.8、2.1 nM）。 |
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50 mg |
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CDX-O0144 |
Olaparib 奥拉帕尼 |
100 mg |
细胞渗透性强的PARP-1和PARP-2的有效抑制 剂（IC50分别为5、1 nM）。抗Tankyrase- 1/PARP-5a的效果较弱（IC50=1.5 μM）。 |
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1 g |
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AG-CR1-0100 |
PJ-34 PARP抑制剂 |
1 mg |
细胞渗透性强的水溶性PARPs有效抑制剂 （EC50 = 20 nM）。能结合并抑制 Tankyrase-1/PARP-5a（IC50=1 μM）。 |
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5 mg |
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25 mg |
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AG-CR1-3646 |
PARG Inhibitor PDD00017273 聚（ADP-核糖）糖水解酶(PARG)抑制剂PDD00017273 |
1 mg |
有效的PARG抑制剂。抑制人重组PARG酶 （IC50=26 nM）以及用于细胞研究（IC50=37 nM）。对ARH3和PARP-1s无活性 （IC50>30 µM）。 |
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5 mg |
Fluorospark® 激酶/ADP 多重-检测试剂盒
Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit
激酶分析筛选试剂盒
Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit
Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit 是富士胶片和光与日本东京大学新药研究机构共同研发的 ADP 荧光检测试剂盒。拥有高通量筛选（HTS）所必须的高灵敏度、高准确度、低成本、简便等特性。本产品不仅可检测激酶，同时可用于检测产生 ADP 的酶（如 ATP 酶、乙酰基— CoA 羧化酶）的活性。
◆原理
本试剂盒通过酶偶联反应简单、高灵敏度的定量检测 ADP 。通过激酶反应产生的 ADP 用红色荧光物质试卤灵定量。
◆优点、特色
● 适合终点（endpoint）和实时实验
● 优异的 Z'-factor 数据（数据差异小）
● 高灵敏度检测 ADP 量
● 检测直到 ADP 30 μmol/L 仍可保持线性关系
● 一步反应，检测时间短（~30分钟）
● 成本较低
与传统方法（发光）比较
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试剂名称 |
Fluorospark® Kinase |
传统发光法（Ａ公司） |
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原理 |
ADP 定量（荧光） |
ADP 定量（发光） |
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操作顺序 |
１步 |
２步 |
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所需时间 |
30 分钟 |
70~100 分钟 |
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ADP 定量范围 |
~30 μmol/L |
~1 mmol/L |
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价格 |
低成本 |
高成本 |
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优点 |
Z'-factor 数值高 |
动态范围大 |
◆试剂盒组成
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No. 试剂 |
用途 |
1,000次 |
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底物液 |
2×制备检测液 |
9 mL |
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酶液 |
500 μL |
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刃天青液 |
100 μL |
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还原封闭剂 |
400 μL |
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D 终止液 |
停止偶联反应 |
10 mL |
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10 mmol/L ATP 溶液 |
激酶反应，制作标准曲线 |
100 μL |
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10 mmol/L ADP 溶液 |
制作标准曲线 |
100 μL |
◆案例、应用
【实验流程（终点（endpoint）法）】
激酶反应液里添加等量的2×检测液（使用时制备）即可检测激酶活性
【制作 ADP 标准曲线】
用 0、10、20、30 μmol/L ADP 制作标准曲线。
良好的线性关系可定量最多至 30 μmol/L 的 ADP。
【低浓度 ADP 区域里定量】
制作各 ATP/ADP 浓度（ATP+ADP=1,10,100 μmol/L）里底物变换率 0-10% 标准曲线
ATP/ADP标准曲线里底物变换率低（=ADP浓度低）时线性关系依然较好
【荧光信号的稳定性】
20 μmol/L ADP 和 2x检测液混合，在30分钟~7小时候检测荧光强度。30分钟后的荧光强度标准化为100%，相关变动表格如下。
ADP和2×检测液混合后，在30分~7小时内的荧光信号十分稳定。
【数据：Z'-factor 实测值】
定量与各 ATP/ADP 浓度（ATP+ADP=1,10,100 μmol/L），5%底物变换率相当的 ADP 时，本试剂盒方法与传统发光法的 Z'-factor 比较。
Z'-factor：Fluorospark® Kinase >传统发光法（Ａ公司）
在各ATP浓度里，5%低底物变换率也有优异的 Z'-factor。
什么是 Z'-facotr
Z'-facotr 是一个关于信号区间和变异的组合，它已成为评估测试方法质量的主要参数。使用 Z'-factor = 1 – (3×SDH + 3×SDL)/(AvH-AvL) 公式计算（SDH 和 SDL 为阳性对照和阴性对照的方差，AVH 和 AVL 为阳性对照和阴性对照的平均值）。
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Z-factor |
Interpretation |
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1.0 |
理想情况下等于 1.0。Z factor 永远不可能超过 1.0。 |
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0.5 – 1.0之间 |
较好的实验。 |
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0 – 0.5 之间 |
临界的实验（较差的实验）。 |
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小于0 |
阳性对照和阴性对照的数值有很多重叠。 |
【制作抑制曲线】
制作 cAMP- 依赖性蛋白激酶（PKA）抑制剂 H-89 的抑制曲线
（PKA 0.02 U/μL，ATP 5 μmol/L，Kemptide 125 μg/mL 及各浓度的 H-89）
Fluorospark® Kinase 与传统发光法（Ａ公司）有几乎相同的 IC50 值。
（本方法得到的 H-89 IC50值与文献值*（IC50=40nmol/L）几乎相同）
* Hidaka, H. et al., Methods Enzymol., 201, 328-39(1991).
【实验流程（实时法）】
通过实时检测荧光强度，实时检测激酶活性。
【ADP 定量反应时间的比较（实时检测）】
对各浓度 ADP［ADP=0, 0.25, 0.5, 1, 2 μmol/L（ATP+ADP=10 μmol/L）］进行实时检测。
Fluorospark® Kinase 在约十分钟内完成 ADP 定量反应。背景（ADP=0 μmol/L）信号稳定。
【实时检测添加 DTT 的影响】
ADP=2 μmol/L（ATP+ADP=10 μmol/L）里添加还原剂 DTT（0.1、1 mmol/L），进行实时检测。
Fluorospark® Kinase在约十分钟内完成ADP定量反应。即使DTT浓度增高，结果依然稳定。
【通过实时检测计算 PKA 的 Km（ATP）值】
在各种 ATP 浓度下通过实时检测计算出 PKA 反应速度，并求取 ATP 的 PKA（Km 值）。
（PKa 0.02 U，各浓度的 ATP 及 Kemptide 100 μg/mL）
根据实时检测进行酶的动力学分析。
（本方法得到的 Km 值与文献值**（3~15 μmol/L）几乎相同）
** Flockhart, D.A. and Corbin, J.D., CRC Crit. Rev. Biochem., 12, 133-86(1982).
＜Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit 参考资料＞
1) Kumagai, K. et al.: Anal. Biochem., 447, 146-155 (2014).
2) 东京大学新药研究机构网址 http://www.ddi.u-tokyo.ac.jp/
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 291-77401 | Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit Fluorospark®激酶/ADP 多重-检测试剂盒 |
1000次 |
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品牌：Adipogen
CAS No.： 储存条件：-80°C 纯度：>95% (SDS-PAGE) |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
|
AG-20T-0001-M001 |
– | 1 mg | – | 9,960.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
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品牌：Adipogen
CAS No.： 储存条件：-20°C 纯度：>95% (SDS-PAGE) |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
|
AG-27B-6313-C050 |
– | 50 µg | – | 4,130.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
聚（ADP-核糖）糖水解酶（PARG）抑制剂PDD00017273
PARG Inhibitor PDD00017273
PARG Inhibitor PDD00017273
多聚（ADP-核糖）水解酶抑制剂
人多聚 ADP-核糖水解酶抑制剂用于体外研究
抑制人重组PARG酶（IC50 = 26 nm）和 PARG 在细胞中的测定（IC50 = 37 nm）。灭活相关糖基水解酶 ARH3和 PARP1s（IC50>30 µM）。无细胞毒性（IC50>30 µM）。
多聚 ADP-核糖水解酶在 DNA 单链断裂修复过程中，是一个重要组成成分，因此成为癌细胞的相关靶点。PARG 可以中和 ARTD 家族的多聚 ADP-核糖聚合酶的功能（PARPs），通过高效催化连接 ADP核糖多聚物的 O-糖苷键，从而逆转 PARPs 的影响。
|
[1] |
First-in-class chemical probes against poly(ADP-ribose) glycohydrolase (PARG) inhibit DNA repair with differential pharmacology to Olaparib: D.I. James, et al.; ACS Chem. Biol. 11, 3179 (2016) |
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[2] |
Specific killing of DNA damage-response deficient cells with inhibitors of poly(ADP-ribose) glycohydrolase: P. Gravells, et al.; DNA Repair 52, 81 (2017) |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| AG-CR1-3646-M001 | PARG Inhibitor PDD00017273 聚（ADP-核糖）糖水解酶(PARG)抑制剂PDD00017273 |
1 mg | – | – |
| AG-CR1-3646-M005 | PARG Inhibitor PDD00017273 聚（ADP-核糖）糖水解酶(PARG)抑制剂PDD00017273 |
5 mg | – | – |
