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Cell Biolabs VPK-411-SER6 AAV-6 Helper Free Promoterless Expression System AAV-6 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit

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上海金畔生物科技有限公司提供Cell Biolabs VPK-411-SER6 AAV-6 Helper Free Promoterless Expression System AAV-6 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购

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Cell Biolabs VPK-411-SER6 AAV-6 Helper Free Promoterless Expression System AAV-6 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-SER5 AAV-5 Helper Free Promoterless Expression System AAV-5 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-SER4 AAV-4 Helper Free Promoterless Expression System AAV-4 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-SER3 AAV-3 Helper Free Promoterless Expression System AAV-3 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-SER2 AAV-2 Helper Free Promoterless Expression System AAV-2 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-SER1 AAV-1 Helper Free Promoterless Expression System AAV-1 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-DJ-8 AAV-DJ/8 Helper Free Promoterless Expression System AAV-DJ/8 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411-DJ AAV-DJ Helper Free Promoterless Expression System AAV-DJ 腺相关病毒表达系统（不含启动子，Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-411 pAAV-MCS Promoterless Expression Vector pAAV-MCS 腺相关病毒表达载体（不含启动子） 10 µg 9095.00

Cell Biolabs VPK-410-SER6 AAV-6 Helper Free Expression System AAV-6 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-SER5 AAV-5 Helper Free Expression System AAV-5 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-SER4 AAV-4 Helper Free Expression System AAV-4 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-SER3 AAV-3 Helper Free Expression System AAV-3 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-SER2 AAV-2 Helper Free Expression System AAV-2 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-SER1 AAV-1 Helper Free Expression System AAV-1 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-DJ-8 AAV-DJ/8 Helper Free Expression System AAV-DJ/8 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410-DJ AAV-DJ Helper Free Expression System AAV-DJ 腺相关病毒表达系统（Helper Free) 1 kit 18104.00

Cell Biolabs VPK-410 pAAV-MCS Expression Vector pAAV-MCS 腺相关病毒表达载体 10 µg 9095.00

Cell Biolabs VPK-406 AAV-6 Helper Free Packaging System AAV-6 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-405 AAV-5 Helper Free Packaging System AAV-5 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-404 AAV-4 Helper Free Packaging System AAV-4 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit

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上海金畔生物科技有限公司提供Cell Biolabs VPK-404 AAV-4 Helper Free Packaging System AAV-4 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购

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Cell Biolabs VPK-404 AAV-4 Helper Free Packaging System AAV-4 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-403 AAV-3 Helper Free Packaging System AAV-3 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-402 AAV-2 Helper Free Packaging System AAV-2 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-401 AAV-1 Helper Free Packaging System AAV-1 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-400-DJ-8 AAV-DJ/8 Helper Free Packaging System AAV-DJ /8 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-400-DJ AAV-DJ Helper Free Packaging System AAV-DJ 腺相关病毒包装质粒系统（Helper Free) 1 kit 13986.00

Cell Biolabs VPK-252 RAPAd® CMV Adenoviral Expression System RAPAd® CMV腺病毒表达系统 1 kit 15016.00

Cell Biolabs VPK-250 RAPAd® Universal Adenoviral Expression System RAPAd® 通用型腺病毒表达系统 1 kit 15016.00

Cell Biolabs VPK-217-PAN ViraSafe™ Lentiviral Bicistronic Expression System (Hygro), Pantropic ViraSafe™ 慢病毒双顺反子表达系统（Hygro），Pantropic 1 kit 16903.00

Cell Biolabs VPK-217 pSMPUW-IRES-Hygro Lentiviral Expression Vector pSMPUW-IRES-Hygro慢病毒表达载体 10 µg 8666.00

Cell Biolabs VPK-216-PAN ViraSafe™ Lentiviral Bicistronic Expression System (Neo), Pantropic ViraSafe™ 慢病毒双顺反子表达系统（Neo），Pantropic 1 kit 16903.00

Cell Biolabs VPK-216 pSMPUW-IRES-Neo Lentiviral Expression Vector pSMPUW-IRES-Neo慢病毒表达载体 10 µg 8666.00

Cell Biolabs VPK-215-PAN ViraSafe™ Lentiviral Bicistronic Expression System (Puro), Pantropic ViraSafe™ 慢病毒双顺反子表达系统（Puro），Pantropic 1 kit 16903.00

Cell Biolabs VPK-215 pSMPUW-IRES-Puro Lentiviral Expression Vector pSMPUW-IRES-Puro慢病毒表达载体 10 µg 8666.00

Cell Biolabs VPK-214-PAN ViraSafe™ Lentiviral Expression System (Hygro), Pantropic ViraSafe™ 慢病毒表达系统（Hygro），Pantropic 1 kit 16903.00

Cell Biolabs VPK-214 pSMPUW-Hygro Lentiviral Expression Vector pSMPUW-Hygro慢病毒表达载体 10 µg 8666.00

Cell Biolabs VPK-213-PAN ViraSafe™ Lentiviral Expression System (Neo), Pantropic ViraSafe™ 慢病毒表达系统（Neo），Pantropic 1 kit 16903.00

Cell Biolabs VPK-213 pSMPUW-Neo Lentiviral Expression Vector pSMPUW-Neo慢病毒表达载体 10 µg 8666.00

Cell Biolabs VPK-212-PAN ViraSafe™ Lentiviral Expression System (Puro), Pantropic ViraSafe™ 慢病毒表达系统（Puro），Pantropic 1 kit 16903.00

Cell Biolabs VPK-212 pSMPUW-Puro Lentiviral Expression Vector pSMPUW-Puro慢病毒表达载体 10 µg 8666.00

新品上市 | 腺相关病毒（AAV）滴度检测试剂盒

发表于由

常用的病毒基因传递载体包括逆转录病毒（RV）、腺病毒（AdV）、腺相关病毒（AAV）、慢病毒（LV）和单纯疱疹病毒（HSV）。其中，AAV属于细小病毒科，是其中最小的单链和无囊膜DNA病毒，目前已发现的血清型有11种。在所有不同血清型的AAV中，重组AAV-2是最常用的一种，它可以通过辅助病毒或Cell Biolabs提供的AAV Helper-Free System来体外生产出高滴度的重组病毒。AAV-2可以感染分裂细胞和非分裂细胞，并能在人类宿主细胞中维持，具有一定的基因稳转潜力。由于AAV-2是一种天然缺陷型病毒，需要在反式结构中提供若干因子才能进行生产性感染，因此被公认为最安全的病毒载体。近年来，利用DNA重组技术开发了一种新型的载体AAV-DJ，是从8种不同血清型AAV重组而来的一个混合衣壳，使其能在各种不同细胞和组织中都具有显著较高体外感染效率的载体。重组的AAV-2和AAV-DJ病毒都可通过CsCl梯度超离法、碘二醇密度梯度超离法或Cell Biolabs的AAV纯化试剂盒来纯化。

利用病毒载体来转导基因必须要准确地测量病毒滴度。传统检测AAV滴度是通过DNA斑点杂交或类似方法来定量AAV基因组拷贝数（GC）。然而这些方法耗时耗力，且稳定性不佳。对于已经高度纯化的病毒样品，也通常用其在260nm的吸光度来估算病毒粒子总数，但这种方法不适用于未纯化的病毒上清，因为其中的杂质成分会影响260nm的光吸收度。

上海金畔生物科技有限公司代理的Cell Biolabs提供了一种快速全面的用于检测纯化后的AAV滴度的试剂盒QuickTiter™ AAV Titer ELISA Kit。该试剂盒包含一个96孔板和足够检测96个样本的试剂，包括已灭活的AAV标准品，通过标准曲线能够计算出样品中纯化后的AAV滴度。该试剂盒检测灵敏度为6.25×108 GC/mL，能够检测AAV-1，AAV-2，AAV-3，AAV-5，AAV-6，AAV-8，AAV-9，AAV-10，AAV-DJ和AAV-DJ/8多种血清型的AAV滴度，并且适用于所有表达系统生产的AAV。

检测原理

AAV衣壳是由VP1、VP2和VP3三种蛋白质混合构成，平均每一个病毒粒子中包含60个VP分子，其比例为5 VP1 : 5 VP2 : 50 VP3。试剂盒中提供的96孔板已预包被了可以结合三种VP蛋白的捕获抗体，当AAV样品或标准品加入到96孔板中，其AAV衣壳蛋白就会与捕获抗体结合。经过孵育和洗板等步骤后，再分别加入AAV VP衣壳抗体和HRP标记的二抗，而未结合的抗体将被洗脱下来。经底物显色后，测定450nm处的吸光度，最后通过AAV标准曲线计算未知样品中AAV衣壳蛋白浓度，进而计算出样本中AAV滴度。

下图展示了AAV滴度检测试剂盒的标准曲线结果。

新品上市 | 腺相关病毒（AAV）滴度检测试剂盒

产品特点

  • 通过检测纯化后的重组AAV衣壳蛋白来确定AAV滴度；
  • AAV定量结果由标准酶标仪读取；
  • 试剂盒中提供灭活的AAV标准品；
  • 适用于多种血清型AAV滴度测定，包括AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-5, AAV-6, AAV-8, AAV-9, AAV-10, AAV-DJ and AAV-DJ/8

产品信息

货号

品名

规格

VPK-5146

QuickTiter™ AAV Titer ELISA Kit

96 assays

VPK-5146-5

QuickTiter™ AAV Titer ELISA Kit

5 x 96 assays

新品上市 | 腺相关病毒（AAV）滴度检测试剂盒

Cell Biolabs公司坐落于美国加利福尼亚州圣地亚哥市，一直致力于开发生命科学研究领域的技术和工具，并将所开发的创新性技术成果商业化。Cell Biolabs孜孜不倦的完善产品，以期使细胞功能和疾病机制研究达到新高度。Cell Biolabs公司的产品独具特色并且处于行业前沿水平，全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用。上海金畔生物科技有限公司是Cell Biolabs中国一级代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。如您对上述产品感兴趣，欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

引用文献

1. Rabinowitz, J, and Samulski, R. J. (1998) Curr. Opin. Biotechnol., 9, 470-475.

2. Summerford, C., and Samulski, R. J. (1999) Nat. Med., 5, 587-588.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Sonntag, F., Schmidt, K., and Kleinschmidt, J.A. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A., 107, 10220-5.

cell biolabs腺相关病毒（AAV）载体

发表于由

腺相关病毒AAV具有表达滴度高、宿主免疫反应轻微、感染谱广、安全性高等优势，成为近年来在基因治疗领域应用广泛的病毒载体之一。上海金畔生物科技有限公司代理的Cell Biolabs （AAV Helper Free Expression System）的AAV三质粒表达系统也是目前常用的一类AAV载体系统。

cell biolabs腺相关病毒（AAV）载体

如下图所示，该套AAV系统包含表达载体（Expression vector）、包装质粒（Rep-Cap plasmid）和辅助质粒（pHelper plasmid）。其中表达载体是AAV病毒的核心，包含了ITR序列、CMV启动子、多克隆位点等，用于携带外源基因；包装质粒负责表达AAV病毒的结构蛋白，决定AAV的血清型和组织嗜性。由于野生型AAV是复制缺陷型的，必须依赖辅助病毒（如腺病毒）才可以感染靶细胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同质粒上提供这些必要的辅助基因来确保重组AAV病毒具有感染性，消除AAV对辅助病毒的依赖，解决了AAV生产过程中要去除腺病毒污染的难题。

cell biolabs腺相关病毒（AAV）载体

      Expression vector包含ITR序列，多克隆位点，携带目的基因；

      Rep-Cap plasmid包含Rep和Cap基因，决定了重组AAV的血清型和组织嗜性；

      pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2A和E4基因，使重组AAV具有感染性。

  1. AAV表达载体

AAV基因组为4.7kb，能够携带的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8种AAV的表达载体，兼容常用的各种AAV包装系统，表达载体都携带有2个ITR序列，使AAV基因组能正确形成T-形二级结构，进而保证了病毒的有效复制和包装。载体上有氨苄抗性基因、多克隆位点，还可以根据实验需要选择带标签、无标签、不含启动子或自身互补型（self-complementary）AAV表达载体（产品详情如下表）。

货号

质粒名称

载体容量（kb）

特征

VPK-415

pAAV-IRES-Puro

1.8

Puro标签

VPK-416

pAAV-IRES-Neo

1.6

Neo标签

VPK-417

pAAV-IRES-Hygro

1.4

Hygro标签

VPK-418

pAAV-IRES-GFP

1.7

GFP标签

VPK-419

pAAV-IRES-Bsd

2

BSD标签

VPK-410

pAAV-MCS

3

无标签

VPK-411

pAAV-MCS Promoterless

4

无启动子

VPK-430

pscAAV-MCS

1.5

self-complementary

  1. AAV包装质粒

AAV共有12个血清型，其中AAV1-6是从人类组织中分离获得，并且具有明确的的抗体反应性，是目前常用的经典AAV载体。尽管不同血清型AAV都具有正二十面体结构，但其衣壳蛋白在序列与空间构象上的多样性，使得AAV与不同细胞表面受体亲和力及组织嗜性存在显著差异。在感染嗜性方面，AAV-2的感染谱较广应用较多，AAV-1在骨骼肌中的转导效率较高，AAV-3易于转导巨核细胞，AAV-5和AAV-6感染呼吸道上皮细胞的优势较为显著。因此，根据AAV不同血清型在组织感染性的相对特异性，可以用于在针对不同靶向组织的基因治疗中寻求最佳的AAV载体类型与组合。除了常见的六个血清型AAV之外，Cell Biolabs还提供两种重组型AAV包装质粒即AAV-DJ与AAV-DJ-8，如下图所示，这两种AAV的Rep-Cap基因是由多个野生型AAV的结构基因重组而来，与其他野生型相比，AAV-DJ在体外细胞转导效率更高，AAV-DJ-8则更适用于体内感染实验。

cell biolabs腺相关病毒（AAV）载体

以常用的AAV-2为参照，下表比较不同血清型AAV对种属、组织细胞的感染率。值得一提的是，AAV-DJ对不同物种的肝细胞、黑色素瘤细胞以及胚胎干细胞的感染能力都有绝对优势，甚至高于常用的AAV-2。

辅助质粒pHelper plasmid是确保重组AAV具有感染性的重要质粒，pHelper载体中包含了腺病毒的E2A、E4基因和VA RNA，由于我们常用的AAV包装细胞系293和293T都含有E1基因，因此该系统中的pHelper质粒上没有再提供E1基因。

AAV包装质粒货号（Rep-Cap&pHelper plasmids）

VPK-401

VPK-402

VPK-403

VPK-404

VPK-405

VPK-406

VPK-400-DJ

VPK-400-DJ-8

细胞系

组织类型

AAV-1

AAV-2

AAV-3

AAV-4

AAV-5

AAV-6

AAV-DJ

AAV-DJ/8

Huh-7

人肝脏

13

100

2.5

0.0

0.1

10

500

0.2

HEK293

人肾脏

25

100

2.5

0.1

0.1

5

500

0.3

HeLa

人子宫

3

100

2.0

0.1

6.7

1

667

0.2

HepG2

人肝脏

3

100

16.7

0.3

1.7

5

1250

0.5

Hep1A

小鼠肝脏

20

100

0.2

1.0

0.1

1

400

0.1

911

人视网膜

17

100

11

0.2

0.1

17

500

0.0

CHO

仓鼠卵巢

100

100

14

1.4

333

50

25000

5.0

COS

非洲绿猴肾脏

33

100

33

3.3

5.0

14

500

0.3

MeWo

人皮肤

10

100

20

0.3

6.7

10

2857

1.0

NIH3T3

小鼠成纤维

10

100

2.9

2.9

0.3

10

500

0.1

A549

人肺脏

14

100

20

ND

0.5

10

1000

0.1

HT1180

人成纤维

20

100

10

0.1

0.3

33

333

0.2

Monocytes

人原代单核细胞

1111

100

ND

ND

125

1429

100

ND

Immature DC

人树突细胞

2500

100

ND

ND

222

2857

200

ND

Mature DC

人树突细胞

2222

100

ND

ND

333

3333

100

ND

ND = Not Determined

上海金畔生物科技有限公司代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套载体系统外，还有腺病毒（Adenovirus），慢病毒（Lentivirus）和逆转录病毒（Retrovirus）载体系统，为广大科研用户提供了高效、便捷的病毒载体产品库，小编之后还会一一为大家介绍这些病毒载体，敬请期待！

上海金畔生物科技有限公司作为Cell Biolabs中国区代理，始终秉承着专业、严谨的态度为广大生物科技领域科研与企业客户提供高品质产品与优质服务，如果您对上述产品感兴趣，欢迎随时拨打全国客服热线021-50837765或登录上海金畔生物科技有限公司官方网站www.jinpanbio.cn查询订购！

腺相关病毒定量——Cell Biolabs的AAV滴度滴定及定量试剂盒

发表于由

腺相关病毒（Adeno-Associated Virus, AAV）作为基因治疗的载体存在一些非常突出的优点，比如能感染分裂和非分裂细胞、不具有明显的致病性、整合至宿主特定染色体长期表达目的蛋白等，已成为基因治疗被广泛应用的安全、有效的载体。腺相关病毒定量——Cell Biolabs的AAV滴度滴定及定量试剂盒

在腺相关病毒的应用过程中，我们经常需要获得病毒液的病毒含量或者腺相关病毒的滴度数据。传统的方案是使用DNA点杂交或其他类似方法来测量腺相关病毒感染滴度，但是这种传统的方法实验周期较长，操作繁琐。对于已获得了高纯度AAV颗粒的检测，使用OD260nm处光吸收度数值来衡量AAV的病毒颗粒含量不失为一种更便捷的方案，遗憾的是，这种方法不适用于未纯化的病毒颗粒，因为其它的杂质会干扰260nm处的吸收度。另外，采用免疫学的办法，使用与AAV病毒颗粒结合的抗体来检测腺相关病毒含量也有被使用，但是很显然，这种方法将会检测所有AAV病毒，包括不含有基因组DNA的包装颗粒。

Cell Biolabs的QuickTiter™ AAV Quantitation Kit试剂盒（目录号：VPK-145）很好的解决了上述问题，该试剂盒包括试剂A、试剂B、捕获Matrix、洗脱液、溶液C、Dye染料以及AAV DNA标准物。本腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺病毒DNA含量来测定其病毒含量。

该腺相关病毒定量试剂盒的工作步骤是首先降解悬液里的核酸成分，然后使用Matrix胶有效结合腺相关病毒颗粒，从而分离出杂质蛋白及蛋白复合物，洗脱下AAV颗粒后进行变性，随后用染料对核酸进行染色。

由于采用了专利技术的捕获Matrix胶，不但能专一性的结合腺相关病毒颗粒，因此能有效的提高检测效度；而且可以用于未纯化的AAV病毒液，因此可定量已经纯化的AAV病毒以及未纯化的AAV病毒。经过相关步骤后，通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据，对照AAV DNA标准曲线得出AAV滴度。该试剂盒检测灵敏，对于已经纯化的AAV DNA，可以在2小时内获得数据，可检测1×109GC/ml的AAV；对于未纯化的DNA，需要使用Kit提供的提纯试剂纯化再测量，大概在3-4小时左右完成，可检出5×1010GC/ml腺相关病毒。该试剂盒能从无辅助病毒的AAV病毒液内完成20次检测。 

产品名称 货号 产品说明（点击查看说明书）
QuickTiter™ AAV Quantitaiton Kit VPK-145 荧光检测，20次分析

美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺相关病毒相关产品和服务，产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术，无需超速离心，在大大减少试验时间的同时还保证了AAV的纯度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺相关病毒DNA含量来测定其病毒含量，只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转导试剂能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转导效率，包括传统转染方法转导效率低的非分裂细胞，如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。