RCPB 重组羧肽酶B 品牌:IMD


RCPB

重组羧肽酶B

品牌:IMD
CAS No.:
储存条件:-15℃以下
纯度:≥90% by SDS-PAGE
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

IMD-RCPB-C010

10 ug 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

RCPB 重组羧肽酶B 品牌:IMD


RCPB

重组羧肽酶B

品牌:IMD
CAS No.:
储存条件:-15℃以下
纯度:≥90% by SDS-PAGE
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

IMD-RCPB-M010

10.0mg/支 咨询


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RTrypsin 重组胰蛋白酶 品牌:IMD


RTrypsin

重组胰蛋白酶

品牌:IMD
CAS No.:
储存条件:-15℃以下
纯度:≥95% by SDS-PAGE
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

IMD-RTP-C010

for Proteome Research 10 ug 咨询


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RTrypsin 重组胰蛋白酶 品牌:IMD


RTrypsin

重组胰蛋白酶

品牌:IMD
CAS No.:
储存条件:-15℃以下
纯度:≥95% by SDS-PAGE
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

IMD-RTP-M010

for Proteome Research 10 mg 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


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重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

  • 产品特性
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  • 参考文献

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

用于免疫反应中协同刺激激活的高活性、高纯度CD40L蛋白质

◆特点

● 高活性MEGACD40L® 低聚物模拟体内膜辅助CD40L聚合和激活而无需增强剂

● 高纯度,低内毒素水平

● 丰富的生产经验保证产品批次间一致性和可靠性

● 优化的配方以增强稳定性并提高活性

MEGACD40L是一种高活性蛋白,是两个三聚体CD40配体分子通过Adiponectin/ACRP30/AdipoQ的胶原域人工连接而成。在体内,这种蛋白质能有效的模拟CD40L的天然膜辅助聚合。可简单有效的替代 [CD40L+增强剂]组合(产品编号:ALX-850-064)。

◆产品规格

别名

  CD40L:ACRP30headless, CD154:ACRP30headless TNFSF 5:ACRP30headless, gp39:ACRP30headless

分子量

  ~38 kDa

来源

  CHO细胞表达。人CD40L(CD154)(aa 116-261)与小鼠ACRP30headless(aa 18-111)N端以及一个

  FLAG® -tag融合。

UniProt ID

  P29965 (human CD40L), Q60994 (mouse Adiponectin)

浓度

  复溶后0.1 mg/mL

产品类型

  冻干,含PBS

纯度

  ≥90%(SDS-PAGE)

纯化细节

  多步层析纯化

内毒素含量

  ≤0.01EU/μg 纯化蛋白(LAL 测试;Cape Cod Associates)

生物活性

  与人CD40结合。B细胞激活(已证明存在CD86剂量依赖性上调)

应用

  可用于调节免疫和炎症反应,作为免疫治疗的临床前研究的一种蛋白质工具,用来监测病人接受化疗的过程

  以及模拟自体免疫反应表型。

配制

  用100 μL的无菌水溶解。以含5%胎牛血清的培养基进行进一步稀释。

运输

  冰袋运输

长期储存

  -20℃

使用/稳定性

  收货后可稳定储存在-20℃至少6个月

处理

  避免反复冻融。复溶后,分装成小份储存于-20℃。

技术信息/产品说明

  FLAG是Sigma-Aldrich Co.的注册商标。

◆应用实例

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

MEGACD40L® (产品编号:ALX-522-110)激活B淋巴细胞。方法:外周血单核细胞(PBMCs)37℃、5%CO2 在48孔板(1×106 细胞/孔)中培养48小时。每孔包含200 μL已梯度稀释的MEGACD40L® 无血清测试培养基。处理后,清洗细胞,用小鼠anti-human CD19-PE和小鼠anti-humanCD86-APC进行双重染色,然后用流式细胞术进行分析。所示数据为在不同的MEGACD40L® 浓度下,共染色为CD19+ 和CD86+ B细胞的百分数。

重组人MEGACD40L®(可溶)(产品编号:ALX-522-110)结构示意图


重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

PBMCs(外周血单核细胞)37℃、5%CO2 在48孔板(1×106细胞/孔)中培养48小时,每孔包含200 μL已梯度稀释的MEGACD40L®(产品编号:ALX-522-110)无血清测试培养基、CD40L(产品编号:ALX-522-015)和CD40L+2 μg/mL 增强剂(产品编号:ALX-804-034)。处理后,用PBS+1%BSA清洗细胞3次。用小鼠anti-human CD19(PE偶联)和小鼠anti-humanCD86(APC偶联)进行双重染色,4℃,2小时。用PBS+1%BSA清洗细胞3次,用PBS重悬。样品用BD Facs Calibur 流式细胞分析仪进行分析。所示数据为在不同的浓度下CD86+B细胞百分数/CD19+B细胞百分数。

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

1000 ng/mL、7个连续批次的MEGACD40L® 用于B细胞激活实验数据


重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

通过在指定的温度下储存蛋白2个月来进行MEGACD40L® 稳定性测试。用B细胞激活实验来进行蛋白活性测试。结果显示在严苛的储存条件下MEGACD40L® 仍能保持较好的活性。

◆相关产品


产品编号

产品名称

包装

产品描述

ALX-522-120-C010

MEGACD40L (soluble) (mouse), (recombinant)
MegaCD40L (可溶性) (小鼠), (重组)

10 μg

用于免疫反应中协同激活活性的高活性、高纯度CD40L蛋白。

ALX-850-064-KI01

CD40L, soluble (human) (recombinant) set
CD40L, 可溶性 (人) (重组) 套装

1 set

配体+增强剂用于提高稳定性和增强免疫活性。

ADI-CSA-187-E

CD 40L monoclonal antibody (5F3)
CD40L, 单抗 (5F3)

100 μg

流式细胞术

ALX-805-037-C100

CD40L (human) monoclonal antibody (blocking) (MK13A4)
CD40L (人), 单抗 (封闭作用) (MK13A4)

100 μg

流式细胞术,FUNC

ALX-522-015-6010

CD40L (soluble) (human), (recombinant)
  CD40L (可溶性) (人), (重组)

6×10 μg

增加对B细胞的刺激。
E.coli 表达。人CD40L(CD154)(aa 116-261)胞外区域与一个短肽(6 aa)的N端以及一个FLAG®-tag融合,≥95%(SDS-PAGE),ELISA

ALX-522-015-2010

2×10 μg

ALX-522-015-C010

10 μg

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

相关资料

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)megaCD40L_QF.PDF

参考文献

重组人MEGACD40L® 蛋白(可溶)


MEGACD40L-cited-examples

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Artesunate shows potent anti-tumor activity in B-cell lymphoma: T. K. Vatsveen, et al.; J. Hematol. Oncol. 11, 23 (2018)


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CD40L and TNF both activate the classical NF-κB pathway, which is not required for the CD40L induced alternative pathway in endothelial cells: J. Seigner, et al.; Biochem. Biophys. Res. Commun. 495, 1389 (2018)


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CD40L mediated alternative NFκB-signaling induces resistance to BCR-inhibitors in patients with mantle cell lymphoma: H. Rauert-Wunderlich, et al.; Cell Death Dis. 9, 86 (2018)


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 5.

Engineering protein-secreting plasma cells by homology-directed repair in primary human B cells: K.L. Hung, et al.; Mol. Ther. 26, 456 (2018)


 6.

High PD-L1/CD86 MFI ratio and IL-10 secretion characterize human regulatory dendritic cells generated for clinical testing in organ transplantation: A.F. Zahorchak, et al.; Cell. Immunol. 323, 9 (2018)


 7.

In vitro antineoplastic effects of auranofin in canine lymphoma cells: H. Zhang, et al.; BMC Cancer 18, 522 (2018)


 8.

CD40 signaling in Graves disease is mediated through canonical and noncanonical thyroidal nuclear factor κB activation: H.J. Lee, et al.; Endocrinology 158, 410 (2017)


 9.

Cutting Edge: Active TGF-β1 Released from GARP/TGF-β1 Complexes on the Surface of Stimulated Human B Lymphocytes Increases Class-Switch Recombination and Production of IgA: O. Dedobbeleer, et al.; J. Immunol. 199, 391 (2017)


10.

Down‐regulation of CD73 on B cells of patients with viremic HIV correlates with B cell activation and disease progression: E.S. Kim, et al.; J. Leukoc. Biol. 101, 1263 (2017)


11.

Human secretory IgM emerges from plasma cells clonally related to gut memory B cells and targets highly diverse commensals: G. Magri, et al.; Immunity 47, 118 (2017)


12.

Regulation of cell surface CB2 receptor during Human B cell activation and differentiation: J.T. Castaneda, et al.; J. Neuroimmune Pharmacol. 12, 544 (2017)


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CD40 expression in fibrocytes Is induced by TSH: potential synergistic immune activation: T. Mester, et al.; PLoS One 11, e0162994 (2016)


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22.

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23.

NF-κB, p38 MAPK, ERK1/2, mTOR, STAT3 and increased glycolysis regulate stability of paricalcitol/dexamethasone-generated tolerogenic dendritic cells in the inflammatory environment: K. Danova, et al.; Oncotarget 6, 14123 (2015)


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Systemic agonistic anti-CD40 treatment of tumor-bearing mice modulates hepatic myeloid-suppressive cells and causes immune-mediated liver damage: J. Medina-Echeverz, et al.; Cancer Immunol. Res. 3, 557 (2015)


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A GPBAR1 (TGR5) small molecule agonist shows specific inhibitory effects on myeloid cell activation in vitro and reduces experimental autoimmune encephalitis (EAE) in vivo: N. Lewis, et al.; PLoS One 9, e100883 (2014), Application(s): Assay of human PBMC


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Exosomes Derived from Burkitt’s Lymphoma Cell Lines Induce Proliferation, Differentiation, and Class-Switch Recombination in B Cells: C. Gutzeit, et al.; J. Immunol. 192, 5852 (2014), Application(s): PCR, Assay of human B cells


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Blood CD4+CD45RO+CXCR5+ T cells are decreased but partially functional in signal transducer and activator of transcription 3 deficiency: F. Mazerolles, et al.; J. Allergy Clin. Immunol. 131, 1146 (2013), Application(s): Assay of blood cells


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CD40 ligand is necessary and suffi cient to support primary diff use large B-cell lymphoma cells in culture: a tool for in vitro preclinical studies with primary B-cell malignancies: D. Ito, et al.; Leuk. Lymphoma 53, 1390 (2012), Application(s): Flow cytometry of human B cells


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Siglec-7 tetramers characterize B-cell subpopulations and leukemic blasts: F. Gieseke, et al.; Eur. J. Immunol. 42, 2176 (2012), Application(s): ELISA of human B cells


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New mechanism of X-linked anhidrotic ectodermal dysplasia with immunodeficiency: impairment of ubiquitin binding despite normal folding of NEMO protein: M. Hubeau, et al.; Blood 118, 926 (2011)


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Reconstitution of huPBL-NSG mice with donor-matched dendritic cells enables antigen-specific T-cell activation: A. Harui, et al.; J. Neuroimmune Pharmacol. 6, 148 (2011), Application(s): Activation of dendritic cells


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Study of patients with Hyper-IgM type IV phenotype who recovered spontaneously during late childhood and review of the literature: N. Karaca, et al.; Eur. J. Pediatr. 170, 1039 (2011), Application(s): Determining human B-cell function in Hyper-IgM blood samples


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Human TRAF3 adaptor molecule deficiency leads to impaired Toll-like Receptor 3 response and susceptibility to Herpes Simplex Encephalitis: R. Perez de Diego, et al.; Immunity 33, 400 (2010)


42.

Multimeric soluble CD40 ligand (sCD40L) efficiently enhances HIV specific cellular immune responses during DNA prime and boost with attenuated poxvirus ventors MVA and NYVAC expressing HIV antigens : C.E. Gomez, et al.; Vaccine 27, 3165 (2009)


43.

Impaired CD40L signaling is a cause of defective IL-12 and TNF-alpha production in Sezary syndrome: circumvention by hexameric soluble CD40L: L.E. French, et al.; Blood 105, 219 (2005)


44.

Two adjacent trimeric Fas ligands are required for Fas signaling and formation of a death-inducing signaling complex: N. Holler, et al.; Mol. Cell. Biol. 23, 1428 (2003)

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
ALX-522-110-C010  MEGACD40L (soluble) (human), (recombinant)
重组人Mega CD40L(可溶) 
10 μg

重组人白蛋白(Recombumin®)的应用


重组人白蛋白(Recombumin®)的应用

——细胞和基因治疗的开发

重组人白蛋白(Recombumin®)的应用


◆优化细胞治疗效果


细胞治疗,包括基于免疫细胞和干细胞治疗,是目前开发中的一些十分复杂的疗法。在医学研究的科学前沿,细胞治疗为更广泛使用的治疗选择提供了一种有吸引力的替代方法。然而,该领域也面临着多个方面的挑战,如升级、物流和确保效果一致性。因此,我们需要优化细胞性能以获得对患者而言可行的细胞产品和安全的治疗方案。

 


◆用于干细胞培养、冻存和制剂的重组人白蛋白


白蛋白是细胞培养介质的常见成分,众所周知,它可以促进多种类型细胞的生长,如间充质干细胞(MSC),胚胎干细胞(ESC),诱导多能干细胞(iPSC)和免疫细胞。

虽然白蛋白在细胞培养中的确切作用尚未完全明了,但是经过数十年的使用,其在细胞治疗应用中的相关性和效果是毋庸置疑的。如今,白蛋白的数种生物学特性已在整个细胞疗法价值链中得到了证明,包括:

● 与金属或其他有益分子实体的运输和络合,为持续的细胞活力创造了理想的微环境

● 充当丰富的营养源,确保条件满足,特别是细胞增殖期间。

● 用作pH缓冲液,防止分化过程中产生不良影响。

● 我们的高纯度重组白蛋白能够在冻存过程中保持细胞的活性。

● 白蛋白可作为毒素和其他活性氧的清除剂,从培养到患者的所有过程中均能保护细胞免受化学应激

● 由于白蛋白倾向于均匀分布在溶液之中,因此可以为介质提供绝缘效果

● 白蛋白在细胞培养,冷冻保存和干细胞制剂中表现出这些特性的组合。我们的重组人白蛋白产品(Recombumin®)正是为了增强这些功能特性而开发的,让您对您的细胞治疗更有信心。

 


◆疫苗稳定

 

维持疫苗稳定性


因可以为患者提供宝贵的治疗和预防效果,疫苗仍然是药物研究的重要领域。

与其他生物制剂一样,疫苗同样很容易受到如温度变化和其他物理条件等环境压力的影响。因此,在疫苗的制造、存储和运送过程中保持其稳定性是一项艰巨的任务。

例如,面向发展中国家流通的疫苗通常需要面临高温考验,因此这些疫苗的热稳定性非常重要。在这种情况下,疫苗能保持稳定性的话可以降低成本,从而为全世界的人们提供更有效的疫苗接种计划。即使选择冻干产品作为配方,温度敏感性疫苗的细胞活力和疫苗效力也会降低。因此,辅料的选择对于降低导致疫苗灭活的负面影响至关重要[Life Science Journal 6(2009)13-17]。

 


使用白蛋白克服疫苗挑战


● 保护疫苗免受剪切应力:重组人白蛋白对病毒载体疫苗具有绝缘作用,可在生产和处理过程中防止其受到物理损伤,保持疫苗的效力和疗效。

● 防止表面吸附:下游加工过程中疫苗颗粒吸附在表面上的流失会导致产量显著下降。此外,还可能吸附到最终疫苗容器上导致剂量控制不当。通过使用Recombumin® 包被其表面,可以防止这些问题发生。

● 热稳定性:温敏性疫苗会在运输过程中因冻融和/或温度波动失去活性和疗效。Recombumin® 可以将白蛋白的高热稳定性拓展至其共同配制的疫苗中。

 

经验证,Recombumin® 的这些特性可广泛用于疫苗构建,例如减毒活疫苗、全病毒灭活亚单位疫苗、病毒载体疫苗、病毒样颗粒(VLP)疫苗和包膜疫苗。其应用在全球范围内超过7,000万剂的疫苗之中:如默沙东的儿童疫苗MMR® II和ProQuad®,证实了Recombumin® 是一种在维持疫苗产品稳定性方面的经过验证且安全的辅料。

 


◆蛋白质和多肽制剂

 

鉴于蛋白质和多肽的不稳定性,优化此类治疗药物的稳定性是任何药物研发计划中不可或缺但却极具挑战性的目标。解决这些挑战便可充分利用药物的全部治疗潜力,确保理想的治疗选择。

 

制剂挑战


制剂产品 “完整性”的缺失可能会削弱药物的安全性和活性。蛋白和多肽稳定性较弱,并且可以通过以下几种机制降解:

● 疏水相互作用和多肽纤维化可能导致聚集亚可见颗粒的出现,从而导致药效降低和免疫原性增加。

● 与表面的结合可引起结构变化,进而导致自缔合和/或聚集。除此之外,与药物容器的非特异性吸附可能会导致材料损耗和剂量使用错误。

● 化学应激,如被氧化性物质降解,会引起一系列功能改变,例如结合活性改变、聚集和蛋白水解敏感性增加、细胞摄

● 取的增加或减少以及免疫原性改变。

 


选择正确的制剂策略

 

制药公司通常都在标准的辅料范围内进行制剂开发。尽管这些试剂中很多是有效的稳定剂,但就局部毒性和潜在免疫原性而言,仍然需要谨慎使用。通常使用的是辅料混合物。但在某些情况下,要将各种“成分”组合成需求的稳定水平是非常困难的。于是,随着制剂逐渐复杂,制药公司对先进的解决方案需求也相应增加。

白蛋白是自然界自身的稳定剂,具有体内运输、保护重要分子的功能。我们的重组人白蛋白——Recombumin® 利用了白蛋白的多功能特性,可用作有效的通用稳定剂。它特别适合用于生物药物(如蛋白质或多肽等难以在传统制剂方案中保持稳定的物质)的精简制剂方案。

 


◆医疗器械涂层

 

使用重组人白蛋白对生物相容性医疗器械涂层

 

医疗器械领域上的创新持续为我们提供更新颖的治疗选择。但是,医疗器械开发商也面临着产品安全和生物相容性的挑战。为确保患者在使用医疗设备时不会引起不良反应,医疗器械的生物相容性至关重要。

由于白蛋白的天然特性,其被广泛应用于医疗器械行业,例如用作透析时使用的支架和导管的涂层,以提高其生物相容性。

 


白蛋白的天然表面涂层能力

 

经验证,白蛋白几乎可以在单个分子层内覆盖了疏水和亲水表面。这意味着仅凭少量的白蛋白也可以有效覆盖大面积的表面。我们的重组人白蛋白(rAlb)产品,已证明:

1-2 mg的白蛋白可有效覆盖1 m的表面

通过使用白蛋白涂覆在设备表面形成的生物界面,限制原本不相容的表面对患者的暴露,从而提高了产品安全性。我们的rAlb产品Recombumin® 的高纯度和稳定的性质能够始终如一地提供相同的表面覆盖率。这使得Recombumin® 特别适合用于医疗器械行业,因为它大限度地减少了对复杂放行程序和产品性能监控的需要。另外,由于重组蛋白的重组性质,可以排除人源性病原体和病毒的风险,进一步保证了安全的产品。

更多产品信息请点击查看:重组人白蛋白Recombumin® 

利用重组鲎试剂进行内毒素检测


利用重组鲎试剂进行内毒素检测

利用重组鲎试剂进行内毒素检测

富士胶片株式会社 生命科学&工程研究所

福地 大树

◆前言

内毒素是存在于革兰氏阴性菌细胞壁外膜的脂多糖(Lipopolysaccharide),进入血液后,只需极少量即可引发出发热症状,大量存在则表现出强毒性,可导致内毒素休克甚至死亡1)。由于革兰氏阴性菌广泛分布于环境中,存在混入生产过程的风险,而混入的内毒素具有耐热性,不易灭活,因此要求注射剂和医疗器械接受严密的内毒素污染管理。近年备受关注的再生医疗、疫苗、抗体和核酸医药相关的产品,内毒素管理对这类产品而言非常重要。

目前检测主流是使用一种利用了马蹄蟹血细胞提取物成分凝血系统的试剂——鲎试剂,来检测内毒素,但为了保护鲎科、稳定供应鲎试剂、减少产品批间差异、提高检测稳定性,各鲎试剂厂家开始促进使用人工原料生产的重组蛋白来研发内毒素检测试剂。

 


内毒素检查法的检测原理

       内毒素检查法是使用从马蹄蟹血细胞成分制备得到的裂解试剂进行内毒素检测或定量的方法。马蹄蟹的血细胞提取物成分具有使内毒素凝固的反应体系,这种凝固反应以多个丝氨酸蛋白酶前体依次活化的级联反应为基础(图1)。

       内毒素激活马蹄蟹血细胞提取物中含有的C因子,随后活化C因子激活B因子。活化B因子再激活凝血酶原,激活的凝血酶将凝血蛋白原底物水解,并将其转化为凝固蛋白,生成不溶性凝胶。

       另外,在马蹄蟹血细胞提取物中,级联反应还会以G因子为起点,与β-葡聚糖发生反应,由β-葡聚糖引起凝血反应(图1)。若想要特异性检测内毒素,需要通过去除G因子或抑制以G因子为起点的级联反应来检测。

利用重组鲎试剂进行内毒素检测

图1. 由内毒素、β-葡聚糖引起的凝血级联反应

内毒素的检测方法

内毒素检测大致可分为以下3种:凝胶法(以裂解物试剂的凝胶形成作为指标)、浊度法(检测伴随凝胶化变化的吸光度或透射率来测定浊度变化)、显色法(以合成底物水解产生的显色作为指标)。显色法比凝胶法、浊度法的灵敏度要高。利用重组蛋白的内毒素检测试剂中,除了使用显色合成底物的显色法之外,还有荧光合成底物的检测方法。

 


利用重组蛋白的内毒素检测试剂

       目前各公司销售的重组蛋白内毒素检测试剂可分为两种,使用C因子重组蛋白的单因子鲎试剂和使用C因子、B因子、凝血酶原重组蛋白的三因子鲎试剂(图2)。

       单因子试剂由于级联反应没有放大,产生的蛋白酶活性小,需要使用荧光底物进行荧光检测。三因子体系试剂与单因子体系试剂相比,酶活性较大,可产生显色反应,因此可以用普通的酶标仪来检测。

       另外,近年有报告称,B因子对内毒素的特异性具有重要作用2,3),相比只含有C因子的单因子鲎试剂,含C因子、B因子和凝血酶原三因子鲎试剂更接近于天然鲎试剂。富士胶片和光一直致力于研发三因子重组鲎试剂,目前最新推出的使用重组蛋白的重组鲎试剂(PYROSTAR™ Neo),有着良好的检测性能。

利用重组鲎试剂进行内毒素检测

图2. 利用重组蛋白的内毒素检测试剂种类

PYROSTAR™ Neo

本次富士胶片和光发售的重组鲎试剂PYROSTAR™ Neo,具有以下的特点:对空白值进行了控制,空白值更低,因此可检测到更低的内毒素浓度(表1)。另外,使用显色法进行检测是裂解试剂的常规分析方法之一,重组鲎试剂PYROSTAR™ Neo检测和分析时可使用能够进行动力学测定的恒温酶标仪和软件进行读数。PYROSTAR™ Neo可以定量0.001 EU/mL~50 EU/mL范围内的内毒素浓度,并能够获得线性良好的标准曲线(相关系数在0.980以上)。

 

表1. PYROSTAR™ Neo与其他公司产品的比较

PYROSTAR™ Neo

其他公司产品1

其他公司产品2

其他公司产品3

因子

三因子系统

单因子系统

定量范围

(EU/mL)

0.001~50
    (显色时间分析法)

0.005~50
(显色时间分析法)
0.002~0.1
(反应速度法)

0.005~5

0.005~50

检测方法

显色法

显色法

荧光法

荧光法

结语

目前内毒素检测试剂多为以鲎血为原料的裂解液鲎试剂,而使用人工重组蛋白的内毒素检测试剂,其历史较短,并未得到广泛应用。

在此背景下,为推进重组鲎试剂的应用,2021年欧洲药典收录了采用荧光法的重组C因子鲎试剂并作为常规检测方法。在日本药典第十八次修订的最新版本中,收录了《内毒素检测方法与使用重组鲎试剂的替代法》(「エンドトキシン試験法と測定試薬に遺伝子組換えタンパク質を用いる代替法」)作为补充参考信息,但重组鲎试剂并不属于内毒素检查法中规定的“马蹄蟹血细胞提取物成分制备的裂解试剂”。同样,美国药典也将重组鲎试剂视为替代法。据报告,使用替代法时,相比使用裂解试剂的内毒素检查法,需要对这两种方法进行对比研究,确保重组鲎试剂有相同或更高水平的真实性、准确度、灵敏度、特异性等 4)

今后富士胶片和光将会继续推进重组鲎试剂应用于内毒素检测中的研究,但需满足真实性、准确度、灵敏度、特异性这几点才能满足考虑替代法的制药公司等用户的需求。我们将继续推进鲎试剂的研究,努力实现用户需求、环境和马蹄蟹保护之间的平衡。

参考文献

1)棚元憲一:エンドトキシンと医薬品の品質管理,国立医薬品食品衛生研究所報告,126,19(2008).

2)Kobayashi, Y. et al. : J. Biol. Chem., 290, 19379 (2015).

3)Tsuchiya, M. : Int. J. Dev. Res., 10, 36751 (2020).

4)菊池裕 他:医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス,48,252(2017).

相关产品

内毒素检测重组鲎试剂 PYROSTAR™ Neo

AMV Reverse Transcriptase AMV来源重组逆转录酶

AMV Reverse Transcriptase
AMV来源重组逆转录酶

  • 产品特性
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  • 参考文献

AMV来源重组逆转录酶AMV Reverse Transcriptase                              AMV来源重组逆转录酶

AMV Reverse Transcriptase



本产品是来源于大肠杆菌表达的Avian Myeloblastosis Virus(AMV)的重组逆转录酶,酶活性高,能够高灵敏度地检测出RNA。

该酶在引物存在时,以单链RNA和单链DNA作为模板合成DNA。由于它具有解链活性和分解双链RNA-DNA中RNA的RNase H活性,因此可以高效地进行RT-PCR。可应用于first strand cDNA合成、制备cDNA探针、RT-PCR。

◆特点

● 高灵敏度检测RNA

● 长链RNA的逆转录

● 热稳定性高

● GC-rich RNA的逆转录

◆应用

● RT-LAMP法

● 合成first strand cDNA

● 制备cDNA探针

● 应用于RT-PCR


来源

 Escherichia coli (Recombinant)

活性

 20 units/μL

反应温度

 42°C-65°C

单位定义

 1 unit指以poly(A)/(dT)15为模板/底物,在37°C,10 min的条件下将1 nmol的脱氧核糖核苷酸摄入酸不溶性沉淀物中的活性

纯度试验

 DNase试验、RNase试验

◆产品组成


AMV Reverse Transcriptase (500 units)

组成内容

包装

储存

备注

AMV Reverse Transcriptase

 (20 units/μL)

500 units × 1

-20°C

 200 mmol/L磷酸钙(pH 7.2,25°C),

 2 mmol/L DTT、0.2% Triton X-100, 

 50% Glycerol

5xAMV RT Reaction Buffer

1 mL× 1

-20°C

 250 mmol/LTris-HCl(pH 8.5,25°C)、

 150 mmol/LKCl, 40 mmol/L MgCl2

◆应用实例


实验案例 Isothermal Master Mix合用(高灵敏检测RNA)


用ISOGEN从感染瓜类褪绿黄化病毒(简称CCYV)的蜜瓜叶中提取RNA,将提取的RNA溶液作为模板使用。用等温基因扩增试剂Isothermal Master Mix和一组引物扩增目标区域,然后用等温扩增荧光检测装置Genie® II检测出了CCYV RNA。

AMV Reverse Transcriptase                              AMV来源重组逆转录酶

<反应条件>

Isothermal Master Mix    15 μL

AMV RT                           0.25 units

引物                                 2.5 μL

模板RNA                          2 μL


反应体积                          25 μL

扩增:                             63°C 30 min

※ 检测瓜类褪绿黄化病毒的引物为独立行政法人农业、食品产业技术综合研究机构九州冲绳农业研究中心在推进新农林水产政策的实用

※ 技术开发产业“开发以粉虱为媒介的新型瓜类蔬菜病毒病的综合性防治技术系统”中开发的产品。

结果


由于Isothermal Master Mix中含有的DNA聚合酶具有逆转录活性,即使不添加逆转录酶也能检测出RNA,但通过添加本产品,可提高检测速度。另外,模板RNA量为0.5 ng时也能使目标区域扩增(绿色实线)。


备注

本产品为实验研究用试剂。不可作为医药品使用。

◆产品列表


产品编号

产品名称

包装

311-07501

AMV Reverse Transcriptase
AMV逆转录酶

500 units

◆相关产品

产品编号

产品名称

包装

316-08151

GeneAce Reverse Transcriptase

10,000 units

312-08153

10,000 units × 5

313-08161

M-MLV Reverse Transcriptase

10,000 units

319-08163

10,000 units × 5


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。