细胞重编程——3. mRNA 重编程


细胞重编程——3. mRNA 重编程

 

更快的重编程

最快16天内制备不含病毒的iPS细胞。系统节省了从细胞接种到转染后细胞筛选的时间。

非整合方式技术

高效,不含病毒,操作简单。免除安全顾虑和与病毒相关的生物污染问题。

mRNA 重编程试剂盒

试剂盒包括mRNA因子套装, Pluriton™ 培养基和 B18R 蛋白。功能验证步骤确保重编程的成功。优异的mRNA技术。

学习mRNA重编程

了解Stemgent科学家正在使用的实验室非整合方式,临床相关的制备iPS细胞技术。了解下一期mRNA重编程培训课程什么时候开始。

细胞重编程——3. mRNA 重编程

查看所有的科学家   |     观看 Dr. Rudolf   Jaenisch 谈论mRNA Reprogramming

◆最快16天内制备不含病毒的克隆

 Stemgent mRNA重编程系统使用非病毒,非整合方式,临床相关的方式重编程人细胞。与慢病毒、仙台病毒和其他方法相比,该系统经过优化后可以确保iPS细胞在20天内传代。慢病毒、仙台病毒和其他方法需要20周确认病毒不再残留。下面的时间轴显示mRNA重编程的6个主要步骤,每个步骤展示了人iPS细胞的形态T。第1~12天用相差显微镜拍照。第14天用TRA-1-60荧光染细胞,用相差显微镜拍照。

细胞重编程——3. mRNA 重编程

高效,安全的重编程方法

  在正常和疾病细胞上验证


细胞重编程——3. mRNA 重编程


Stemgent mRNA 重编程系统以迅速,安全有效的方式,制备非整合,不含病毒,与临床相关的人iPS细胞。该系统消除了病毒相关方法引起的生物污染问题。与其他方法相比,mRNA提供了超过1%的效率,重编程效率从0.00001-0.01%.

mRNA重编程不需要进行多次传代,筛选病毒,一旦产生新克隆需要基因组整合。上述的优点使其成为高效、快速、安全的重编程技术。

◆验证mRNA重编程试剂盒

包括特定培养基,mRNA套装, B18R 蛋白

Stemgent mRNA 重编程试剂盒包括5种mRNA重编程因子,监测转染效率的细胞核GFP标记蛋白,Pluriton™ 重编程培养基, B18R重组蛋白,还有操作流程都经过测试和验证。mRNA重编程可以让研究更容易调控蛋白的表达、量化控制各自重编程因子。

手册下载

   细胞重编程——3. mRNA 重编程

Figure: 成人帕金森病患者表皮成纤维细胞制备iPS。相差显微镜间隔时间拍摄照片显示20天内细胞形态的变化和TRA-1-81多能干细胞标志物的表达。所有图片用10×放大。

*   Stemgent mRNA 重编程因子和 Pluriton 重编程培养基单独销售。


◆相关产品

货号

名称

规格

00-0073

microRNA Booster Kit

microRNA增强试剂盒

1kit

00-0071

 Stemgent® mRNA Reprogramming Kit

 mRNA 重编程试剂盒

1kit

00-0075

Stemgent® StemRN™ SR Reprogramming Kit

StemRNATM-SR重编程试剂盒

1kit

细胞重编程——指南目录

 

1.    什么是细胞重编程

2.    细胞重编程概述

3.    mRNA重编程

4.    病毒重编程

5.    产品列表 

细胞重编程——2.概述


细胞重编程——2.概述



重编程工业

      ——来自Stemgent的解决方案


自从Dr. Shinya Yamanaka描述了体细胞重编程为多能性干细胞后,诱导性多能干细胞(iPS) 成为再生医疗,疾病模型,药物发现和细胞繁育基础研究的无价工具。

从传统的重编程方法(慢病毒,腺病毒)到非整合方式,非病毒方法(mRNA,蛋白),Stemgent为您提供重编程所需要的高质量产品,知识和经验。

选择重编程系统

Stemgent 提供一整套的细胞重编程系统。


非整合方式技术

高效,非病毒,操作简单。没有安全顾虑和与病毒相关的生物污染问题。


更快的重编程

可在16天内产生不含病毒的iPS细胞。节省了从接种细胞到筛选转染后细胞的时间。


◆重编程系统的比较

选择适合您的系统


mRNA

蛋白

腺病毒

逆转录病毒

慢病毒

产品描述

用于制备不含病毒的iPS细胞迅速、安全的非整合技术。

非整合方式,不非病毒方式。效率低。

瞬时病毒转绕方法。DNA转基因不需要整合后表达。

利用逆转录酶在宿主细胞内复制RNA产生RNA基因组的DNA。低效率。

使用病毒细胞制备iPS细胞。普遍使用的技术

重编程效率

>1%

0.00001%

0.0001 – 0.001%

0.001 – 0.01%

0.001 – 0.01%

不含病毒

细胞重编程——2.概述

细胞重编程——2.概述

筛选

细胞重编程——2.概述

细胞重编程——2.概述

不需要基因组整合

细胞重编程——2.概述

细胞重编程——2.概述

制备iPS细胞的时间

>3周

~9 周

验证

细胞重编程——2.概述

细胞重编程——2.概述

临床相关

细胞重编程——2.概述

生物安全要求Bio-safety requirements

BL2

BL2

BL2/BL2+

推荐使用

预期可用于临床,可扩展性,对照蛋白表达

研究重编程机理

可用于瞬时病毒系统

重编程机理研究

与其他重编程系统相比,Stemgent mRNA重编程系统的优势

细胞重编程——2.概述

与其他方法相比,mRNA的效率高于 1% ,重编程效率从0.00001-0.01%。mRNA重编程不需要使用多个步骤,包括细胞传代,筛选病毒,或者传代细胞的基因组整合情况等。



◆实验时间轴比较


使用mRNA重编程系统最快16天内制备克隆

细胞重编程——2.概述

细胞重编程——指南目录

 

1.    什么是细胞重编程

2.    细胞重编程概述

3.    mRNA重编程

4.    病毒重编程

5.    产品列表 


细胞重编程——1. 什么是细胞重编程


细胞重编程——1. 什么是细胞重编程

 细胞重编程是将特定类型细胞转化成其他细胞类型。尤其是直接重编程体细胞,比如成纤维细胞转化成多能细胞,比如诱导性多能干细胞,或者iPS细胞。2006年,干细胞研究领域出现了革命性的发现。逆转录病毒载体过表达小鼠4种转录因子Oct4, Sox2, Klf4, 和 c-Myc (mOSKM),将小鼠胚胎成纤维部分重编程成为诱导性多能干细胞(iPS)(Takahashi 和 Yamanaka 2006). 接下来其他实验室制备了完全重编程的小鼠iPS细胞系,这些细胞实验证实具有小鼠胚胎干细胞(ES 细胞)相当功能,能够形成嵌合小鼠(Wernig et al 2007)。相应的,重编程也可以在人细胞上操作。使用hOSKM转录因子 (Yamanaka 2007) 或者使用一套因子组合(用Nanog和Lin28代替Klf4 和 c-Myc )(Thomson 2007)可以制备iPS。



◆重编程的发展历程

重编程技术和递送技术近年来迅速发展,现在已经可以采用多种方法递送和表达必要的重编程因子进行直接重编程。这些方法包括整合逆转录和慢病毒载体,dox诱导表达系统和减少或者去除插入到宿主细胞基因组的瞬时或者可割取的方法。最近突破性的技术是在2010年9月干细胞会议上发布的修饰合成mRNAs,可以高效的进行人成纤维细胞的重编程,基因组不会发生改变。该项学术研究加速了其他策略的发展,会有更多的研究成果。



细胞重编程——1. 什么是细胞重编程

细胞重编程——指南目录

 

1.    什么是细胞重编程

2.   细胞重编程概述    

3.   mRNA重编程

4.    病毒重编程

5.    产品列表 



参考文献

  [1]    Takahashi, K., Yamanaka, S. (2006) Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell, 126(4):663-76.

  [2]     Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B.E., Jaenisch, R. (2007) In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature, 448(7151):318-24.

  [3]     Boland, M.J., Hazen, J.L., Nazor, K.L., Rodriguez, A.R., Gifford, W., Martin, G., Kupriyanov, S., Balwin, K.K. (2009) Adult mice generated from induced pluripotent stem cells. Nature, 461(7260): 91-4.

  [4]    Kang, L., Wang, J., Zhang, Y., Kou, Z., Gao, S. (2009) iPS cells can support full-term development of tetraploid blastocyst-complemented embryos. Cell Stem Cell 5; 135-138.

  [5]     Zhao, X.Y., Li, W., Lu, Z., Liu, L., Tong, M., Hai, T., Hao, J., Guo, C.L., Ma, Q.W., Wang, L., Zeng, F., Zhou, Q. (2009) iPS cells produce viable mice through tetraploid complementation. Nature 461; 86-90

  [6]    Takhashi, K., Tanabe, K., Ohnuki, M., Narita, M., Ichisaka, T., Tomoda, K., Yamanaka S. (2007) Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell, 131(5):861-72.

  [7]    Yu, J., Vodyanik, M.A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J.L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G.A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I.I., Thomson, J.A. (2007) Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science,  318(5858):1917-20.

  [8]     Shi, Y., Desponts, C., Do, J.T., Hahm, H.S., Schöler, H.R., Ding, S. (2008) Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic fibroblasts by Oct4 and Klf4 with small-molecule compounds. Cell Stem Cells, 3(5), 568-574.

  [9]    Huangfu, D., Osafune, K., Maehr, R., Guo, W., Eijkelenboom, A., Chen, S., Muhlestein, W., Melton, D.A. (2008) Induction of pluripotent stem cells from primary human fibroblasts with only Oct4 and Sox2. Nature Biotechnology, 26(11):1269-75.

  [10]   Li, W., Ding, S. (2010) Small molecules that modulate embryonic stem cell fate and somatic cell reprogramming. Trends Pharmacological Science, 31(1):36-45.

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  [13]    Niwa, H., Miyazaki, J.I., Smith, A.G. (2000) Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells. Nature Genetics, 24:372-376.

  [14]    Jia, F., Wilson, K.D., Sun, N., Gupta, D.M., Huang, M., Li, Z., Panetta, N.J., Chen, Z.Y., Robbins, R.C., Kay, M.A., Longaker, M.T., Wu, J.C. (2010) A nonviral minicircle vector for deriving human iPS cells. Nature Methods, 7(3):197-9.

  [15]    Okita, K., Nakagawa, M., Hyenjong, H., Ichisaka, T., Yamanaka, S. (2008) Generation of mouse induced pluripotent stem cells without viral vectors. Science, 322(5903):949–953.

  [16]    Carey, B.W., Markoulaki, S., Hanna, J., Saha, K., Gao, Q., Mitalipova, M., Jaenisch, R. (2009) Reprogramming of murine and human somatic cells using a single polycistronic vector. PNAS, 106(1):157-62.

  [17]    Wernig, M., Lengner, C.J., Hanna, J., Lodato, M.A., Steine, E., Foreman, R., Staerk, J., Markoulaki, S., Jaenisch, R. (2008) drug-inducible transgenic system for direct reprogramming of multiple somatic cell types. Nature Biotechnology, 26(8):916-24.

  [18]    Hockemeyer, D., Soldner, F., Cook, E.G., Gao, Q., Mitalipova, M., Jaenisch, R. (2008) A drug-inducible system for direct reprogramming of human somatic cells to pluripotency. Cell Stem Cell, 3(3):346-53.

  [19]   Stadtfeld, M., Nagaya, M., Utikal, J., Weir, G., Hochedlinger, K. (2008) Induced pluripotent stem cells generated without viral integration. Science, 322(5903):945-9.

  [20]   Soldner, F., Hockemeyer, D., Beard, C., Gao, Q., Bell, G.W., Cook, E.G., Hargus, G., Blak, A., Cooper, O., Mitalipova, M., Isacson,O., Jaenisch, R. (2009) Parkinson’s disease patient-derived induced pluripotent stem cells free of viral reprogramming factors.  Cell, 136(5):964-77.

  [21]    Zhou, W., Freed., C. (2009) Adenoviral Gene Delivery Can Reprogram Human Fibroblasts to Induced Pluripotent Stem Cells. Stem Cells 27(11):2667 – 2674.

  [22]    Woltjen, K., Michael, I.P., Mohseni, P., Desai, R., Mileikovsky, M., Hämäläinen, R., Cowling, R., Wang, W., Liu, P., Gertsenstein,M., Kaji, K., Sung, H.K., Nagy, A. (2009) PiggyBac transposition reprograms fibroblasts to induced pluripotent stem cells. Nature, 458(7239):766-70.

  [23]    Yu, J., Hu, K., Smuga-Otto, K., Tian, S., Stewart, R., Slukvin, I.I., Thomson, J.A. (2009) Human induced pluripotent stem cells free of vector and transgene sequences. Science, 324(5928):797-801.

  [24]    Nakagawa M., Koyanagi M., Tanabe K., Takahashi K., Ichisaka T., Aoi T., Okita K., Mochiduki Y., Takizawa N.,Yamanaka S. (2008) Generation of induced pluripotent stem cells without Myc from mouse and human fibroblasts. Nature Biotechnology, 26(1):101-6.

  [25]    Warren, L., Manos, P.D., Ahfeldt, T., Loh, Y.H., Li, H., Lau, F., Ebina, W., Mandal, P.K., Smith, Z.D., Meissner, A., Daley, D.Q., Brack, A.S., Collins, J.J., Cowan, C., Schlaeger, T.M., Rossi, D.J. (2010) Highly Efficient Reprogramming to Pluripotency andDirected Differentiation of Human Cells with Synthetic Modified mRNA. Cell Stem Cell. 7:618.

  [26]    Yakubov, E., Rechavi, G., Rozenblatt, S., Givol, D. (2010) Reprogramming of Human Fibroblasts to Pluripotent Stem Cells using mRNA of Four Transcription Factors. Biochem Biophys Res Commun. 394:189.

 


细胞重编程——4 .病毒重编程


细胞重编程——4 .病毒重编程


制备iPS细胞的重编程套装

Stemgent 提供各种批次的重编程因子确保从成纤维细胞制备iPS细胞。以及用于优化其他类型细胞重编程效率和研发其他重编程系统的各种重编程因子。 



 

◆制备iPS细胞的前沿技术


● 预包装的病毒,节省时间   

    提供各种人的小鼠重编程因子


人重编程因子套装和其他重编程因子

递送方法,重编程因子

 

稳定表达

 

Dox诱导性表达

 

重编程因子套装

慢病毒, OKSM

ST000044-1套装

ST000036-1套装
  ST000037-1套装

慢病毒, OSLN

ST000005-1套装

重编程因子

慢病毒, Oct4

ST070013-1ml

ST070031-1ml
  ST070035-100ul

慢病毒, Klf4

ST070015-1ml

ST070033-1ml
  ST070037-100ul

慢病毒, Sox2

ST070012-1ml

ST070032-1ml
  ST070036-100ul

慢病毒, c-Myc

ST070014-1ml

ST070034-1套装
  ST070038-100ul

慢病毒, Nanog

ST070017-1ml

慢病毒, Lin28

ST070016-1ml

 小鼠重编程因子套装和重编程因子


递送方法,重编程因子

稳定表达

Dox诱导表达

重编程因子套装

逆转录病毒, OKSM

00-0042

慢病毒, OKSM

ST000021-套装
  ST000014-1套装

重编程顺反子

逆转录病毒, OKSM

ST000043-1套装

重编程因子

逆转录病毒, Oct-4

07-0042

逆转录病毒, Klf4

07-0043

逆转录病毒, Sox2

07-0044

逆转录病毒, c-Myc

07-0045

慢病毒, Oct4

ST070008
  ST070003-100ul

慢病毒, Klf4

ST070010
  ST070005-100ul

慢病毒, Sox2

ST070007
  ST070002-100ul

慢病毒, c-Myc

ST070009
  ST070004-100ul

细胞重编程——指南目录

 

1.    什么是细胞重编程

2.    细胞重编程概述

3.    mRNA重编程

4.    病毒重编程

5.    产品列表 

细胞重编程——5. 产品列表


细胞重编程——5. 产品列表

产品列表


品牌

产品名称

产品编号

产品规格

Stemgent®

Alkaline,Phosphatase Staining Kit II

00-0055

50 assays

Stemfactor™

B18R Recombinant Protein, Carrier-free

03-0017

Stemgent®

c-Myc mRNA, Human

05-0018

20 μg

Stemolecule™

Doxycycline hyclate

04-0016

10 mg

Stemfactor™

FGF-basic,Human Recombinant

03-0002

50 μg

Stemgent®

hESCellCloning  & Recovery Supplement

01-0014-500

5 x 100 μL

Stemolecule™

IM-12

04-0081

Stemgent®

Klf4 mRNA, Human

05-0015

20 μg

Stemgent®

Lin28 mRNA, Human

05-0017

20 μg

Stemgent®

nGFP mRNA

05-0019

20 μg

Stemgent®

Oct4   Antibody (Affinity Purified), Rabbit anti-Mouse/Human

09-0023

100 μL

Stemgent®

Oct4 mRNA, Human

05-0014

20 μg

Stemfect™

RNA Transfection Kit

00-0069

1 Kit

Stemolecule™

SB590885

04-0080

Stemgent®

Sox2 mRNA, Human

05-0016

20 μg

Stemgent®

SSEA-1 Antibody   (Purified), Mouse anti-Mouse/Human

09-0005

100 μL

Stemgent®

StemRNA™-SR   Reprogramming Kit

00-0075

1 Kit

Stemolecule™

Thiazovivin

04-0017

1 mg

Stemgent®

TRA-1-60 Antibody (PE),   Mouse anti-Human

09-0009

1 mL

Stemolecule™

Valproic Acid

04-0007

5 g

Stemolecule™

WH-4-023

04-0079

NutriStem™

XF/FF Culture Medium

01-0005

500 mL

01-0005-100

100 mL

Stemolecule™

Y27632

04-0012

2 mg

04-0012-10

10 mg

Stemolecule™

Y27632 in Solution

04-0012-02

2 mg(10 mM)

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1.    什么是细胞重编程

2.    细胞重编程概述

3.    mRNA重编程

4.    病毒重编程

5.    产品列表 

POLYSCIENCE加热循环器

POLYSCIENCE加热循环器

POLYSCIENCE加热循环器

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市场价:¥0.00
会员价:¥0.00
品牌:Polyscience
生产厂家:POLYSCIENCE
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高于环境温度控制
6L、1 3L、28L三种容积的储罐
选择微处理器
或模拟控制器
可编程型
提供从高于环境温度5℃至200℃精确的温度控制.并具有时间/温度编程、远程探测能力和~台5速压力/吸入(双缸)泵。RS232接口和PC编程软件是标准配置.同时LabView驱动程序和Excel宏命令提供更大的编程和和数据记录便利性。全图形液晶显示器和多语言帮助菜单简化了操作和设置。

数字式型
是更普通应用和预算的好选择. 配有大功率5速压力/吸入(双缸)泵.可用于开环或闭环应用,以及集成RS232接口。

标准型
该系列中最经济的微处理控制型号,有一个温度上限150℃,及明亮的LED显示,用于设置并读取。 三个自定义温度按钮使设定值修改快速简单。双速压力(单缸)泵适合于闭环应用。

模拟型
系列中定价最低的加热循环器,对于设定值不常变化的应用而言是理想的选择。 通过旋转式拨号盘设置温度,并在所提供的酒精温度计上读取。 双速压力(单缸)泵适合于闭环应用