AdipoGen新产品-多聚体蛋白和突变体

具有增强活性的蛋白质 
多聚体蛋白和突变体

●　AdipoGen生命科学为您提供超高效MultimericLigands™系列和高活性突变蛋白。

●　哺乳动物细胞源，具有高活性和内毒素低的优点。

●　有独立包装的大包装规格和现货库存，方便用于小鼠体内研究。

◆体内先天淋巴细胞2的激活　^新见解

适用于人和老鼠。
在细胞外环境中，当IL-33与其受体ST2结合，通过氧化作用（形成两个二硫桥）其生物活性迅速终止，导致广泛的构象变化，破坏ST2结合位点。通过在氨基酸C208s / C232s的突变来保护IL-33的被氧化来提高其活性。
LIT: E.S. Cohen, et al.; Nat. Commun. 6, ID8327 (2015)

通过IL-33 (oxidation resistant) (human) (rec.) (untagged)（AG-40B-0160）激活体内先天淋巴细胞2（ILC2）).

方法：每天使用PBS（图A）或IL-33 (oxidation resistant) (human) (rec.) (untagged)（ AG-40B-0160 ）（每只小鼠0.4μg）注射C57BL / 6小鼠3天（图B）。在第4天，来自骨髓的细胞被染色并通过流式细胞仪分析。显示了先天淋巴细胞（门控为阴性细胞，CD127阳性细胞）上ST2和KLRG1的水平。 
Picture courtesy of Dr G.Verdeil / Dr S. Trabanelli (Camilla Jandus Group, Department of Fundamental Oncology, University of Lausanne).

◆增强细胞毒性T细胞诱导的IL-2突变体*  ^独一无二   

与IL-2相比，IL-2 Superkine可诱导细胞毒性CD8 + T和NK细胞的显著扩增，使体内抗肿瘤效应得到改善。IL-2 Superkine只能激活很少的调节性T细胞（Tregs），表示在体内的毒性较小。 

*LIT: AM. Levin, et al.; Nature 484, 529 (2012)

与IL-2（人）：Fc（人）相比，IL-2 Superkine（Fc）（ AG-40B-0111 ）与IL-2Rβ（人）的结合增加> 10倍。

方法： IL-2Rβ（人）以1μg/ mL包被在ELISA板上。在封闭和洗涤步骤后，加入指定浓度的IL-2 Superkine（Fc）（ AG-40B-0111 ）或IL-2（人）：Fc（人）（ CHI-HF-21002 ）。在室温孵育1小时后，使用抗人Fc抗体（HRP）检测吸光度。

◆MultimericFasL™ [MegaFasL™] ^独一无二

Multimeric FasL™模拟体内天然的膜辅助聚集FasL[APO-1L; CD95L; CD95L;TNFSF6]  。它与人和小鼠Fas [CD95]结合，并在浓度<1ng / mL的条件下诱导的人Jurkat T细胞凋亡 。 
LIT: N. Holler, et al.; Mol. Cell. Biol. 23, 1428 (2003) | P. Greaney, et al.; Leuk. Res. 30, 415 (2006)

FasL（人）的寡聚化可以有效地触发Jurkat细胞死亡。

方法：将 Jurkat细胞用指定浓度的FasL (human) (multimeric) (rec.) (AG-40B-0130), Fc (human):FasL (human) (rec.) (AG-40B-0132), FasL (human) (rec.) (AG-40B-0001) 或 FasL (human) (rec.) + Enhancer (AG-44B-0001)（2倍稀释，第一浓度1000ng / mL）过夜处理 。使用PMS / MTS定量细胞死亡。低聚FasL重组蛋白（FasL（人）（多聚体），Fc（人）：FasL（人）和FasL（人）+ Enhancer）在IC50 <0.2ng / mL条件下使Jurkat细胞致死。

◆Multimeric CD40L™ ^标准的 

MultimericCD40L™非常有效地模拟天然膜辅助聚集CD40L[CD154; TNFSF5]。可以作为激活CD40的有效的途径。MultimericCD40L™是一种有效的B细胞激活剂 。 
LIT: C. Werner-Favre, et al.; Eur. J. Immunol. 31, 243 (2001) | C. Kaltenmeier, et al.; J. Immunol. 194, 3768 (2015)

人MultimericCD40L™（ AG-40B-0010 ）不需要增强剂来诱导B细胞活化。 

方法：将 PBL细胞接种在96孔板中（按照2×10 5细胞/孔，接种在100μL的含10％FCS的RPMI培养基中） ，其中含有指定浓度的CD40L (human) (multimeric) (rec.) (AG-40B-0010)或者含有1μg/mL增强子(AG-35B-0001)及不含增强子的CD40L (human)。使用PBS清洗细胞，并用含CD86-PE和CD19-FITC各2μL的FACS缓冲液（PBS，5％胎牛血清，0.02％叠氮化物）50μL染色20分钟，4℃避光。使用FACS缓冲液洗涤两次后，通过流式细胞仪分析样品。

◆强效促血管生成素-1结构物 ^独特的 

这是一种具有可溶性，稳定和更强效的血管生成素-1 [Ang-1; ANGPT1] variant. ANGPT1]变体。蛋白质形成五聚体结构。

LIT: CH. Cho, et al.; PNAS 101, 5547 (2004) | HY. Shin, et al.; J. Neurosci. Res. 88, 1052 (2010) | S. Kim, et al.; J. Cell. Biochem. 114, 2513 (2013)

COMP（大鼠）：血管生成素-1（人）（重组）（ AG-40B-0147 ）结合Tie2 （人）：Fc（人）。

方法： Tie-2（人）：Fc以1μg/ mL包被在ELISA板上。在封闭和洗涤后，加入指定浓度的COMP (rat):Angiopoietin-1 (human)（ AG-40B-0147 ）或对照。在室温孵育1小时后，使用抗FLAG抗体（HRP）检测吸光度。

◆BAFF，可溶性（人）（60-mer）（rec.）（高活性）^独一无二 

　　处理后的人BAFF [ BLyS；CD257；TNFSF13B ]可以继续作为一个三聚体，这通常是TNF家族的配体，或组装成由20个三聚体构成的60聚体。 BAFF（60-mer）的寡聚形式模拟膜结合的BAFF并激活所有BAFF受体（BAFF-R，TACI和BCMA），而BAFF（3-mer）仅触发BAFF-R信号传导。

　　LIT: C. Bossen, et al.; Blood 111, 1004 (2008) | C. Bossen, et al.; Eur. J. Immunol. 41, 787 (2011) | J. Nys, et al.; PLoS One 8, e61350 (2013)

BAFF, Soluble (human) (60-mer)（ AG-40B-0112 ）结合并活化BCMA受体。

方法：将表达BCMA：Fas嵌合受体（含有人BCMA的胞外结构域和人Fas的细胞内结构域）的Jurkat T细胞置于于不同浓度的BAFF, Soluble (human) (60-mer)（ AG -40B-0112 ）溶液中。用PMS / MTS法测定细胞活力。

◆高活性DLL4 Notch配体突变体 ^新产品

　　Notch配体δ样蛋白4（DLL4）充当Notch1和Notch4的配体。通过VEGF诱导可作为负反馈调节剂，可以防止过度的血管生成萌芽，促进形成高分化血管网的作用。该突变蛋白与人Notch1相互作用，相对于WT DLL4，其亲和力增强> 20倍。

DLL4（人）：Fc（人）（重组）（高活性突变体）（ AG-40B-0176 ）和mNotch1结合的亲和力比WT DLL4：Fc更高。

方法： Notch1（小鼠）：Fc以1μg/ mL包被在ELISA板上。在封闭和洗涤步骤后，加入指定浓度的DLL4 (human):Fc (human) (highly active mutant)（ AG-40B-0176 ）和DLL4 (human):Fc (human) WT（ AG-40A-0077Y ） 。在室温孵育1小时后，使用Hotch1（小鼠）一抗（ AG-20B-0051 ），随后使用IgG（大鼠）（HRP）二抗检测吸光度。

◆CD137L [4-1BBL]融合蛋白 ^有效的

　　CD137L [ 4-1BBL；CD137L ]是活化的巨噬细胞、树突状细胞和成熟B细胞上发现的II型跨膜蛋白。据报道，CD137L和CD137 [4-1BB]涉及肿瘤排斥，细胞凋亡，抗病毒免疫，糖尿病，T和B细胞共刺激以及免疫应答的调节。CD137L配体的Fc结构是多聚体形式，并且已经报道了CD137L寡聚化可增强其活性。

Review: B. Dharmadhikari, et al.; Oncoimmunology 5, e1113367 (2015)

Fc（人）：CD137L，可溶性（人）（重组）（ AG-40B-0173 ）结合人CD137。

方法：将 CD137（人）：Fc以1μg/ mL包被在ELISA板上。封闭和洗涤后，加入指定浓度的Fc (human):CD137L, Soluble (human)（ AG-40B-0173 ）。在室温孵育1小时后，使用抗人CD137L一抗（ AG-20A-0031 ），随后使用抗IgG（小鼠）（HRP）二抗来检测吸光度。

◆用于T细胞活化的强效OX40L构建蛋白

　　OX40L [ CD252；TNFSF4 ]是一种膜表达的细胞因子，属于TNF配体家族。作为共刺激因子，它通过与T细胞上的受体OX40相互作用，刺激T细胞的活化，增殖和细胞因子的产生。OX40L在包括B细胞，树突细胞，肥大细胞和内皮细胞等抗原呈递细胞上表达。Fc（人）：OX40L，可溶性（人）（重组）是一种高活性构建体，其中两个三聚体OX40L配体通过人免疫球蛋白的Fc结构域人工连接。据报道，其可用于激活T细胞增殖。 

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