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品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.： 储存条件：2-10℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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137-18751 |
for Immunochemistry | 2mL | – | 8,020.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
磁珠型microRNA分离试剂盒
磁珠型microRNA分离试剂盒
FUJIFILM Wako提供能使从Ago 免疫沉淀到RNA 提取等一系列实验操作简化的“microRNA Isolation Kit”系列。使用本系列试剂盒能简便地从人和小鼠的细胞或组织中提取Ago蛋白结合的microRNA以及靶mRNA，还能从培养上清、血清、血浆中提取游离Ago蛋白结合的microRNA。所提取到的RNA可以应用于qPCR、微阵列检测、NGS等下游实验。本系列包括采用磁珠的MagCapture™ microRNA Isolation Kit，以及采用了硅胶珠法的microRNA Isolation Kit。
MagCapture™ microRNA Isolation Kit（磁珠法）系列产品包括含抗人Ago2抗体（4G8）、抗小鼠Ago2抗体（2D4）、抗Ago1-4抗体（1G3）固相化磁珠这三种试剂盒，以及第四种——能结合任意抗体的Protein G磁珠。上述试剂盒全部采用磁珠法，可进行简易的免疫沉淀操作并获得良好的重复性。免疫沉淀后提取的RNA可进一步使用离心柱纯化，获得高纯度的RNA；若使用含有抗Ago抗体固定化磁珠的3种试剂盒，也可使用一步法更加简便地提取RNA（备注：RNA与磁珠不分离）。
◆试剂盒组成（例：Human Ago2, 10次用）
1. Anti-Human Ago2 Magnetic Beads Solution：600 μL×1瓶
2. Cell Lysis Solution：20 mL×1瓶
3. Washing Solution for IP：40 mL×1瓶
4. Elution Solution I for IP：500 μL×1瓶
5. Elution Solution II for IP：500 μL×1瓶
6. Binding Solution for Spin Column：2 mL×1瓶
7. Binding Enhancer for Spin Column：100 μL×1瓶
8. Washing Solution I for Spin Column：3 mL×1瓶
9. Washing Solution II for Spin Column：4 mL×1瓶
10. Elution Solution for Spin Column：1 mL×1瓶
11. Spin Column/Collection Tube：10瓶
◆操作示意图
◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2 使用例子（人）
提取人细胞株中的microRNA
通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染），检测使用本品（MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2）从人K562细胞（1×107 cells）中提取的microRNA（图1）。结果显示，本系列试剂盒可提取得到高纯度的microRNA。通过qPCR对miR-92a进行定量，比较使用本品和硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit，Human Ago2）提取的microRNA量（图2）。本系列试剂盒的离心柱法具有几乎与硅胶珠法相同的microRNA提取能力，而且一步法的microRNA提取能力比硅胶珠法更好。
图1. 对从人K562细胞中提取的microRNA的进行银染检测
图2. 比较从人K562细胞中提取的microRNA量
提取人血浆中的游离Ago2蛋白结合microRNA
以qPCR对miR-92a进行定量，比较使用磁珠型MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2和硅胶珠型产品从200 μL健康人混合血浆中提取的microRNA量。结果发现，本试剂盒中的离心柱法具有几乎与硅胶珠型产品相同的microRNA提取能力，而且一步法的microRNA提取量比硅胶珠型高（图3）。
图3. 比较从人血浆中提取的microRNA量
提取microRNA的靶标mRNA
向miR-122低表达的肝癌细胞株HepG2细胞（5×105 cells）导入人工合成的miR-122或调控的荧光素酶siRNA（Luc siRNA），提取了分别用磁珠型MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Human Ago2和硅胶珠型产品制备的Ago2 IP RNA，以及用ISOGEN® 制备的total RNA。运用qPCR法比较各种RNA中含有的miR-122量（图4）与其靶标mRNA（Aldo A mRNA是miR-122靶标之一，以GAPDH内参作校正）量（图5）。与硅胶珠型产品一样，本品提取的RNA中富集了miR-122和Aldo A mRNA，因此，可以利用本品提取microRNA的靶标mRNA。另一方面，用ISOGEN® 制备的total RNA中的Aldo A mRNA会随着miR-122的增加而分解并减少。
图4. miR-122提取量的比较
图5. 靶标mRNA提取量的比较
◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 使用例子（小鼠）
从小鼠细胞株中提取microRNA
通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染），检测用本试剂盒（MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Mouse Ago2）从小鼠P388D1细胞（2×107 cells）中提取的microRNA（图1）。结果显示，本品能提取出高纯度的microRNA。另外，以qPCR法对miR-92a进行定量，比较使用硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit，Mouse Ago2）提取到的microRNA量（图2）。结果发现，本品的离心柱法具有与硅胶珠型产品几乎同样的microRNA提取能力，而一步法的microRNA提取能力比硅胶珠型产品更好。
图1. 对从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA的进行银染检测
图2. 比较从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量
从大鼠血浆中提取游离Ago2蛋白结合microRNA
通过qPCR对miR-92a进行定量，比较使用本品以及硅胶珠型产品从200μL大鼠血浆中提取到的microRNA量。本品的离心柱法具有与硅胶珠型产品几乎同样的microRNA提取能力，而一步法的microRNA提取能力比硅胶珠型产品更好（图3）。
图3. 比较从大鼠血浆中提取的microRNA量
◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago 1–4 使用例子（人）
提取Ago1–4结合microRNA
用各种Ago1、Ago2、Ago3、Ago4特异性抗体进行微阵列检测分析免疫沉淀后HeLa中的各个RNA组分，结果显示，Ago2中捕获了大量miR-22和miR-16，而Ago1、Ago3、Ago4中则捕获了大量的miR-1260b和miR-4286（表1）。
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信号强度 |
信号比 |
||||||
|
名称 |
Ago1 IP |
Ago2 IP |
Ago3 IP |
Ago4 IP |
Ago2/Ago1 |
Ago2/Ago3 |
Ago2/Ago4 |
|
hsa-miR-22 |
3521.4 |
21696.5 |
3771.2 |
292.4 |
6.16 |
5.75 |
74.2 |
|
hsa-miR-16 |
6886.3 |
28527.2 |
5013.4 |
582.5 |
4.14 |
5.69 |
48.97 |
|
hsa-miR-1260b |
2060.3 |
540.9 |
1270.6 |
1977.9 |
0.26 |
0.43 |
0.27 |
|
hsa-miR-4286 |
678.8 |
202.4 |
2019.2 |
471.2 |
0.3 |
0.1 |
0.43 |
表1. 微阵列检测分析结果
上述分析结果验证了我们可以利用MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Ago1-4，从Ago1、Ago3、Ago4中提取硅胶珠型产品难以提取的大量microRNA。
使用本品和硅胶珠型产品，提取HeLa细胞（1×107 cells）中的microRNA，以miR-92a作为内部标准，通过qPCR检测miR-22、miR-1、miR-1260b、miR-4286的提取量。结果发现，Ago1、Ago3、Ago4中miR-1260b、miR-4286的提取量比硅胶珠型产品更高（图1）。因此，本品不仅能提取Ago2中的microRNA，还能从Ago1、Ago3、Ago4中提取硅胶珠型产品难以提取的大量microRNA。
图1. 比较从HeLa细胞中提取的各种microRNA量
提取人和小鼠细胞株中的microRNA
以qPCR对miR-92a进行定量，比较用本品和硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit, Human Ago2或Mouse Ago2）从人K562细胞（1×107 cells）及小鼠P388D1细胞（2×107 cells）中提取的microRNA量。结果显示，本品可提取和硅胶珠型产品相同甚至更多的microRNA（图2，3）。
图2. 比较从人K562细胞中提取的microRNA量
图3. 比较从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量
提取人和大鼠血浆中的游离Ago结合microRNA
以qPCR对miR-92a进行定量，比较用本品和第一代产品（microRNA Isolation Kit, Human Ago2或Mouse Ago2）从200 μL人以及大鼠血浆中提取的microRNA量。结果显示，本品可提取和硅胶珠型产品相同甚至更多的microRNA（图4,5）。
图4. 比较从人血浆中提取的microRNA量
图5. 比较从大鼠血浆中提取的microRNA量
提取各种动物细胞株中的microRNA
以qPCR对miR-92a进行定量，检测用MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2、Mouse Ago2、Ago1-4从2×106 cells的K562细胞（人）、COS-7细胞（猴）、MDCK细胞（狗）、P388D1细胞（小鼠）、SCC-131细胞（大鼠）中提取的免疫沉淀组分中的microRNA量，和用ISOGEN® 从各种细胞中提取的total RNA组分中的microRNA量。通过比较各种免疫沉淀所得到的RNA组分中的miR-92a量和total RNA组分中的miR-92a量的相对值，表明本品适合提取上述全部细胞中的microRNA（图6）。
图6. 比较从各种动物细胞中提取的microRNA量
◆MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Protein G使用例子
提取人和小鼠细胞株中的microRNA（与硅胶珠型产品的比较）
以qPCR法对miR-92a进行定量，比较用本品（MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Protein G）和抗Ago1抗体（2A7）、抗人Ago2抗体（4G8）、抗人Ago3抗体（1C12）从人K562细胞（1×107 cells）提取的microRNA量，和用硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1、Human Ago2、Human Ago3）提取的micro RNA量（图1,2,3,）。另外，以qPCR对miR-92a进行定量，比较用本品和抗小鼠Ago2抗体（2D4）从小鼠P388D1细胞（2×107 cells）中提取的microRNA量，和用硅胶珠型产品（microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2）提取的microRNA量（图4）。结果发现，本品与任意抗Ago抗体结合使用，能比硅胶珠型产品提取到更多的microRNA。
图1. 比较结合了抗Ago1抗体时的microRNA提取量
图2. 比较固定抗人Ago2抗体时的microRNA提取量
图3. 比较固定抗人Ago3抗体时的microRNA提取量
图4. 比较固定抗小鼠Ago2抗体时microRNA的提取量
提取人与小鼠细胞株中各种Ago蛋白结合microRNA
通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和qPCR，对用本品和抗Ago1抗体（2A7）、抗人Ago2抗体（4G8）、抗人Ago3抗体（1C12）、抗Ago4抗体（2G7)从人K562细胞（1×107 cells）中提取的miR-92a表达量进行检测（图5）。另外，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和qPCR（miR-92a量），检测用本品和抗Ago1抗体（2A7）、抗小鼠Ago2抗体（2D4）、抗小鼠Ago3抗体（S09）、抗Ago4抗体（2G7)从小鼠P388D1细胞（2×107 cells）中提取的microRNA量（图6）。结果表明，本品与任意的抗Ago抗体组合使用，能提取与各种Ago结合的microRNA。
图5. 从人K562细胞中提取的microRNA量的比较与银染检测
图6. 从小鼠P388D1细胞中提取的microRNA量的比较与银染检测
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
使用 抗体 克隆号 |
对应 物种 |
对应样本 |
提取RNA |
IP B/F |
RNA |
|
295-74001 |
MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2 分离试剂盒，人Ago2 |
4G8 |
人、猴、狗 |
细胞/ 组织 血浆 |
microRNA |
磁力 分离 |
离心 柱法 一步法 |
|
297-74201 |
MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Mouse Ago2 分离试剂盒，小鼠Ago2 |
2D4 |
小鼠、大鼠、狗 |
||||
|
293-74801 |
MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Ago 1-4 分离试剂盒，Ago1-4 |
1G3 |
人、猴、狗、小鼠、大鼠 |
microRNA |
|||
|
299-74401 |
MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Protein G 分离试剂盒，蛋白G |
随意 选择 |
根据使用的抗体而定 |
细胞/ 组织 |
根据使用的抗体而定 |
一步法 |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 295-74001 | MagCapture™ microRNA Isolation Kit, Human Ago2 MagCapture™microRNA分离试剂盒，人Ago2 |
10 tests | for Genetic Research | |
| 297-74201 | MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Mouse Ago2 MagCapture™microRNA分离试剂盒，小鼠Ago2 |
10 tests | for Genetic Research | |
| 293-74801 | MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Ago 1-4 MagCapture™ microRNA分离试剂盒，Ago1-4 |
10 tests | for Genetic Research | |
| 299-74401 | MagCapture™ microRNA Isolation Kit，Protein G MagCapture™microRNA分离试剂盒，蛋白G |
20 tests | for Genetic Research |
亲和标签抗体结合磁珠
重组蛋白纯化用
重组蛋白纯化用
亲和标签抗体结合磁珠
◆抗DYKDDDDK tag抗体磁珠
已固定识别DYKDDDDK肽单抗的磁珠悬浮液。可用于检测大肠杆菌、酵母、哺乳动物表达的DYKDDDDK标签融合蛋白。
特点
● 非特异性结合少
● 可回收N端、C端、Internal全部蛋白
● 可用DYKDDDDK肽、SDS溶液洗脱
● 无需离心处理，可减少样品损耗，简单替换溶液
1. 抗DYKDDDDK标签抗体磁珠的性能
|
|
把各DYKDDDDK tag融合蛋白分别加入细胞溶解液中进行免疫沉淀后，通过Western blotting比较抗原回收量。 经4%SDS样品缓冲液洗脱和SDS-PAGE后，用Western blotting法，加过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。 |
2. 洗脱法比较抗原回收性能
|
|
将DYKDDDDK标签融合蛋白加入细胞溶解液中，分别加入磁珠吸附后，利用各种洗脱法回收抗原量并用Western Blotting法进行比较。 用过氧化酶标签抗体（产品编号：015-22391）进行发光检测。 |
3. 非特异性吸附蛋白的比较
|
|
在不含DYKDDDDK tag的细胞溶解液中分别添加磁珠并进行免疫沉淀后，比较非特异性吸附蛋白。 用4%SDS样品缓冲液洗脱、电泳后，用银染色、抗小鼠IgG、过氧化酶标签抗体进行Western Blotting比较。 无法检测出非特异性吸附质。 |
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产品名称 |
子类 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
|
DYK标签：DYKDDDK |
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抗DYKDDDDKtag抗体磁珠 Anti DYKDDDDK tag Magnetic Beads |
小鼠 IgG2b 1E6 |
免疫化学用 |
011-25154 |
200 μL |
|
017-25151 |
2.5 mL |
|||
|
013-25153 |
2.5 mL×5 |
|||
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溶液组成：10 mg/mL Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads, 1×TBS(pH 7.4), 50 w/v % glycerol, 0.05 w/v % sodium azide |
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◆相关产品
内参照
下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。
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产品名称 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
|
抗β肌动蛋白单抗 |
免疫化学用 |
013-24553 |
200 μg |
|
011-24554 |
1 mg |
||
|
017-24556 |
5 mg |
||
|
抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated |
免疫化学用 |
017-24573 |
200 μL |
|
抗α-微管蛋白, 单抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
011-25034 |
10 μg |
|
017-25031 |
200 μg |
||
|
013-25033 |
1 mg |
||
|
Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
018-25044 |
10 μg |
|
014-25041 |
200 μg |
||
|
010-25043 |
1 mg |
||
|
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
016-25523 |
200 μg |
|
014-25524 |
1 mg |
||
|
010-25526 |
5 mg |
||
|
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated |
免疫化学用 |
015-25473 |
200 μL |
蛋白酶抑制剂系列
|
产品名称 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
|
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized |
通用型 |
165-26021 |
1 mL用 |
|
161-26023 |
1 mL用×5 |
||
|
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） |
动物细胞 |
163-26061 |
1 mL |
|
169-26063 |
1 mL×5 |
||
|
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100） |
2D电泳 |
162-26031 |
1 mL |
|
168-26033 |
1 mL×5 |
||
|
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） |
植物细胞 |
164-26091 |
1 mL |
|
160-26093 |
1 mL×5 |
||
|
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100） |
His Tag 纯化※ |
167-26101 |
1 mL |
|
163-26103 |
1 mL×5 |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
亲和标签比较表
|
亲和标签 |
TARGET |
PA |
6xHis |
|
氨基酸序列 |
(YPGQ)5V |
GVAMPGAEDDVV |
HHHHHH |
|
残基数 |
21 |
12 |
6 |
|
分子量 (kDa) |
2.34 |
1.16 |
0.84 |
|
等电点（pI） |
5.52 |
3.49 |
7.21 |
|
配体 |
TARGET tag |
PA tag |
Ni, Co, Zn, Cu |
|
亲和珠回收 |
40% Propyleneglycol, |
3M MgCl2, MES(pH6.0) |
0.5M Imididazole(pH7.4) |
|
单抗边界强度 （KD（M）） |
1.0×10-8 |
4.9×10-10 |
Ni-NTA: |
|
单抗 Clone No. |
P20.1(Mouse) |
NZ-1(Rat) |
Merck:HIS. H8(Mouse) |
|
亲和力 |
++++ |
+++++ |
+++ |
|
提纯成本 |
+ |
+ |
+ |
|
多肽洗脱 |
+++ |
+++ |
Imidazole |
|
背景 （培养上清） |
+ |
+ |
+++++ |
|
背景 （细胞裂解物） |
+ |
+ |
++++ |
|
亲和标签 |
DYKDDDDK |
c-Myc |
HA |
GST |
|
氨基酸序列 |
DYKDDDDK |
EQKLISEEDL |
YPYDVPDYA |
– |
|
残基数 |
8 |
10 |
9 |
218 |
|
分子量 (kDa) |
1.01 |
1.20 |
1.10 |
26 |
|
等电点（pI） |
3.97 |
4.00 |
3.56 |
– |
|
配体 |
DYKDDDDK tag |
c-Myc tag |
HA tag |
GST |
|
亲和珠回收 |
Tris-HCl, |
Tris-HCl, |
Tris-HCl, |
Glutathione, |
|
单抗边界强度 （KD（M）） |
2.8×10-8 |
2.2×10-9 |
2.8×10-9 |
Glutathione: |
|
单抗 Clone No. |
M2(Mouse) |
9E10(Mouse) |
3F10(Mouse) |
Wako:5A7(Mouse) |
|
亲和力 |
++++ |
++++ |
++++ |
++++ |
|
提纯成本 |
++ |
++ |
++ |
+ |
|
多肽洗脱 |
+++ |
++ |
++ |
Glutathione |
|
背景 （培养上清） |
++++ |
+++ |
+++ |
++++ |
|
背景 （细胞裂解物） |
++++ |
++++ |
+++ |
++++ |
本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。
MagCapture™ HP抗PA tag抗体磁珠
追加PA tag系列磁珠
追加PA tag系列磁珠
MagCapture™ HP抗PA tag抗体磁珠
PA tag系统是在日本开发并使用的利用多肽标签（12个氨基酸残基）与大鼠单克隆抗体（NZ-1）结合的亲和纯化标签系统1）。NZ-1对PA tag具有高亲和性和特异性，通过免疫沉淀可一步纯化出高纯度的PA tag融合蛋白2）。它还可以应用于蛋白印迹，流式细胞术，免疫细胞染色，利用PA tag洗涤溶液，可以简单地回收使用过的磁珠1,3）。近年来，通过解析PA tag和NZ-1复合物的晶体结构，明确了PA tag标记β-转角的方法4）。利用该特点还发表了《将PA tag插入膜蛋白环区中的应用》的应用文章4）。
这一次，FUJIFILM Wako推出了抗PA tag抗体固相化的磁珠。可用于免疫沉淀法中PA tag融合蛋白的纯化和检测。
◆特点
● 非特异性结合少
● 可对PA tag进行竞争性洗脱、酸洗脱或2 mol/L MgCl2溶液洗脱
● 无需离心
● 可回收利用
◆数据
重组PA tag融合EGFP蛋白的回收实验
确认了对K562细胞裂解液中表达的PA tag融合EGFP蛋白的回收性能。结果表明，可在各种洗脱条件下纯化得到高纯度的重组PA tag融合EGFP蛋白。
抗PA tag抗体磁珠的回收实验
确认了抗PA tag抗体磁珠可再回收性能。结果表明，即使回收使用三次，也不会降低回收性能，可提取到重组PA tagg融合EGFP蛋白。另外，回收使用了PA tag Washing Solution［产品编号：169-27261］。
PA tag肽竞争性洗脱次数的研讨实验
研讨了是否能通过多次重复竞争性洗脱，提高回收量。结果表明，通过多次重复PA tag的竞争性洗脱，可以提高重组PA tag融合EGFP蛋白的回收量。
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
137-18751 |
MagCapture™ HP Anti PA tag Antibody Magnetic Beads |
免疫化学用 |
2 mL |
◆相关产品（载体列表）
| 产品名称（载体名称） | 抗性 | 规格 | 产品编号 | |
| 大肠杆菌抗性 | 真核细胞抗性 | |||
| pCAG-Ble PA tag-C | Bleomycin | 20 μg | 161-26861 | |
| pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus | 20 μg | 168-26871 | ||
| pCAG-Bsd PA tag-C | Blasticidin S | 20 μg | 165-26881 | |
| pCAG-Bsd PA tag-N Signal Plus | 20 μg | 162-26891 | ||
| pCAG-Hyg PA tag-C | Hygromycin B | 20 μg | 165-26901 | |
| pCAG-Hyg PA tag-N Signal Plus | 20 μg | 162-26911 | ||
| pCAG-Neo PA tag-C | Kanamycin | G418 | 20 μg | 169-26921 |
| pCAG-Neo PA tag-N Signal Plus | 20 μg | 166-26931 | ||
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
[1] Fujii, Y. et al. : Protein Expr. Purif., 95, 240（2014）.
[2] 藤井勇樹 他 : 蛋白質科学会アーカイブ, 7, e 075（2014）.
[3] Kaneko, M. K. et al. :Biochem. Biophys. Res. Commun., 432, 40（2013）.
[4] Fujii, Y. et al. : J. Cell Sci., 129, 1512（2016）.
Tamavidin® 2-REV Magnetic Beads
亲和蛋白磁珠
亲和蛋白磁珠
Tamavidin® 2-REV Magnetic Beads
<Tamavidin® 2-REV ~和生物素可逆性结合>
Tamavidin® 2-REV是新亲和蛋白[Tamavidin® 2]的变体。由于生物素的结合力降低，可形成可逆的生物素结合复合物。因此，通过添加过量生物素，可以竞争性洗脱生物素分子。
（之前的亲和蛋白/链亲和素与生物素的结合力非常牢固且不可逆。）
◆MagCapture™ Tamavidin® 2-REV 概要
MagCapture™ Tamavidin® 2-REV试剂组成：磁珠悬浮液，TBS缓冲液（pH7.4），0.05w/v%叠氮化钠，50w/v%甘油。
◆MagCapture™ Tamavidin® 2-REV使用案例
生物素化DYKDDDDK-BAP回收性能验证。
竞争洗脱的生物素溶液组成：2 mmol/L 生物素，PBS溶液。
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添加生物素化DYKDDDDK-BAP 10 ng至细胞裂解液（相当于1×106细胞数）与原产品Streptavidin磁珠比较添加回收性能。 MagCapture™ Tamavidin® 2-REV与原产品比较，低背景，能够回收到目生物素化DYKDDDDK-BAP。 |
生物素抗体免疫沉降
采用生物素化Anti-hAgo2 Mab，从K562细胞回收内源性人Ago2蛋白质。
与原产品Streptavidin磁珠相比，MagCapture™ Tamavidin® 2-REV是因其低背景，能够回收到内源性人Ago2蛋白质。
◆RNA Pull-down检测
应用（HOTAIR RNA）
通过RNA Pull-down检测比较原产品链霉亲和素磁珠和MagCapture™ Tamavidin® 2-REV的性能。
RNA Pull-dow检测后的生物素可竞争性洗脱。（数据未公布）。
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A |
用生物素标记HOTAIR RNA的有义链和反义链进行RNAPull-down检测，通过SDS样品缓冲液洗脱，纯化的蛋白质样本通过银染色可检测出来。各RNA探针的反应样本均采用的是K562（5×106细胞数）的总细胞裂解物。 |
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B |
利用RNAPull-down实验获得的样本进行免疫印迹实验。一抗是抗Ezh2抗体（D2C9）以及LSD1抗体（C69G12）。 MagCapture™ Tamavidin® 2-REV与原产品相比，可高效率且低背景回收RNA结合蛋白。 |
Tamavidin® 2 系列 产品概要
Magnetic Beads
本产品是将新规格抗生物素蛋白样蛋白的Tamavidin® 2-REV固相化在磁珠上。
Tamavidin® 2-REV是新规格的抗生物素蛋白样蛋白。因通过氨基酸修饰具有可逆的生物素结合性能，在结合生物素分子后，通过添加过量的生物素在温和洗脱条件下可回收靶分子。
Tamavidin® 2重组体
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产品名称 |
等电点（pl）※1 |
耐热性※2 |
有机溶剂耐性 |
生物素结合速度系数(ka(M-1S-1)) |
生物素解离速度系数(kd(S-1)) |
分子量（四聚物） |
|
Tamavidin® 2 |
7.4 |
Tm=85℃ |
+ |
(1.0±0.5)×106 |
检测极限值以下※4 |
约60kDa |
|
Tamavidin® 2-REV |
8 |
Tm=75℃ |
– |
(1.3±0.5)×106 |
(1.5±0.4)×10-5 |
约60kDa |
|
Tamavidin® 2-HOT |
7.23 |
高耐熱性 |
高耐性※3 |
(3.0±1.7)×105 |
检测极限值以下 |
约60kDa |
|
※1 |
等电点：产品均是通过氨基酸序列计算出来的数值。 |
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※2 |
耐热性（TM值）：生物素结合活性加热20分钟可达到加热前的50%。关于Tamavidin® 2-HOT，因为在99.9℃加热30分钟结合 活性保持在90%以上，所以算不出数值。 |
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※3 |
高耐性：40-50%DMSO中 |
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※4 |
检测极限值：5×10-6(kd(S-1)) |
欲了解相关资料请点击：Tamavidin® 2-REV Magnetic Beads技术研讨会
【参考文献】
＜Tamavidin® 2＞
|
[1] |
Takakura, Y. et al., "Tamavidins – novel avidin-like biotin-binding proteins from the Tamogitake mushroom.", FEBS Journal, 276, 1383(2009). |
|
[2] |
Takakura, Y. et al., "Tamavidin, a versatile affinity tag for protein purification and immobilization.",J. Biotechnol., 145, 317(2010). |
＜Tamavidin® 2-REV＞
|
[3] |
Takakura, Y. et al., "Tamavidin2-REV: An engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19(2013). |
＜Tamavidin® 2-LPI＞
|
[4] |
Takakura, Y.et al., "Engineering of novel tamavidin 2 muteins with lowered isoelectric points and lowered non-specific binding properties.", J. Biosci. Bioeng.,114(5), 485(2012). |
＜Tamavidin® 2-HOT＞
|
[5] |
Takakura, Y. et al., "Tamavidin-HOT, a highly thermostable biotin-binding protein.", J. Biotechnol., 169, 1(2014). |
|
[6] |
Ukekawa, R. et al., "A useful new tool for isolation of long non-coding RNA-binding proteins.",Medical Science Digest, 40(7), 355(2014). |
|
[7] |
Takakura, Y. et al.: "Tamavidin2-REV : an engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19-25(2013). |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 205-18263 | Tamavidin® 2, recombinant Tamavidin® 2, 重组型 |
5 mg | 免疫化学用 | |
| 203-19401 | Tamavidin® 2-REV, recombinant Tamavidin® 2-可逆性, 重组型 |
1 mg | 免疫化学用 | |
| 209-19403 | Tamavidin® 2-REV, recombinant Tamavidin® 2-可逆性, 重组型 |
5 mg | 免疫化学用 | |
| 205-19363 | Tamavidin® 2-HOT, recombinant Tamavidin® 2-耐热性, 重组型 |
5 mg | 免疫化学用 | |
| 136-18341 | MagCaptureTM Tamavidin® 2-REV MagCaptureTM Tamavidin® 2-REV RNA回收试剂 |
20 mL | 基因研究用 |
Phos-tag™ MG-Bead
利用磁珠富集磷酸化蛋白
利用磁珠富集磷酸化蛋白
Phos-tag™ MG-Bead
Phos-tag™ MG-Bead是 phos-tag与涂有琼脂糖的磁珠连接而成的产品。磁珠上的phos-tag与磷酸化蛋白结合后，通过使用磁力架吸附磁珠即可完成富集。除蛋白外，还可以富集其他带有磷酸基团的物质。
使用此产品的论文
用于磷酸化SARS-CoV-2 核衣壳蛋白的分离
Yoko, I. et al. : Journal of Proteomics., 255 104501 (2022)
◆使用方法
1. 将5 ~ 50 µL Phos-tagTM MG-Bead磁珠加入1.5 mL试管中。
2. 使用磁力架收集管内磁珠，并去除保存液。
3. 用0.1 M Bis-tris-AcOH缓冲液使磁珠重悬，并摇匀。重复此步骤两次。
4. 取50 ~ 200 µL溶解于0.1 M Bis-tris-AcOH缓冲液的样品于1.5 mL试管中，并在室温下摇匀孵育 3 分钟。
5. 用磁力架收集管内磁珠，并去除穿透液。
6. 使用0.1 M Bis-tris-AcOH缓冲液重悬磁珠，摇匀30秒，用磁力架收集管内磁珠，并去除洗涤液。重复此步骤三次。
7. 用蒸馏水使磁珠重悬，摇匀30秒。震荡后，用磁力架收集管内磁珠，去除洗涤液。
8. 为洗脱与磁珠结合的磷酸化化合物，加入pyrophoshate缓冲液，并摇匀30 秒。重复此步骤五次。
9. 分析洗脱的磷酸化化合物。
*关于操作所需的相关溶液成分，请点击参阅本产品的protocol。
◆应用实例
富集磷酸化肽段
磁珠量：50 µL
样品：胰蛋白酶消化的 β-酪蛋白溶液（包括具有 1 个磷酸化位点和 4 个磷酸化位点的肽）
洗涤缓冲液：0.1 M Bis-tris-AcOH （含0.1 M NaCl） pH6.8
洗脱缓冲液：0.1 M Na4P2O7 – 0.1M AcOH pH7.0
分别对样品溶液（sample）、穿透液（FT），洗脱液（E1）进行HPLC分析，结果如图所示，在洗脱液（E1）中成功检出两种磷酸化肽、。
FT：上述操作步骤5中的.穿透液。
E1：上述操作步骤8的洗脱液。
分离NAD和NADP
磁珠量：50 µL
样品：含有 NAD(100 nmol) 和 NADP(100 nmol) 的溶液
洗涤缓冲液：0.1 M Bis-tris-AcOH pH6.8
洗脱缓冲液：0.1 M Na4P2O7 – 0.1M AcOH pH7.0
分别对各步骤的溶液进行HPLC分析，并对其结果进行解析。如图，穿透液和洗涤液中检测出NAD，通过反复洗涤，可以分离出高纯度的NAD。并在洗脱液检测出NADP，通过重复洗脱步骤，可以分离出纯度超过 99% 的NADP。
FT：上述操作步骤5的穿透液。
W1~W3：上述操作步骤6.的洗涤液。数字为洗涤次数。
W4：上述操作步骤7.的洗涤液。
◆相关产品
磁珠捕获磁力架
Phos-tag™ 丙烯酰胺
SuperSep Phos-tag™ 预制胶
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※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
Phos-tag™ MG-Bead Protocol
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 385-20061 | Phos-tag™ MG-Bead Phos-tag™ MG-Bead磁珠 |
100 μL |
|
品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
|
011-25154 |
for Immunochemistry | 200uL | – | 1,070.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
|
品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
|
011-21874 |
for Immunochemistry | 1mg | – | 8,840.00 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
MagCapture™ 系列用磁珠捕获磁力架
Magnet Stand
MagCapture™ 系列用磁珠捕获磁力架
● 可移动型弹起式的微管架固定装置。
● 可同时进行16支微管的磁珠捕获操作，可移液。
● 采用钕制磁石，缩减捕获时间。
◆概述
本产品是用于捕获磁珠的磁性（力）支架。主要适用于MagCapture™ 系列对细胞培养上清、血清、尿液等样本含有的特定成分纯化而进行的磁珠法。
可同时进行16支1.5 mL（0.2 mL）微管的操作，因配置强力磁石，可短时间内捕获微小的磁珠。
◆特点
● 可移动的弹起式微管架固定部。
● 弹起式装置装卸试管，可同时对16支微管进行磁珠捕获。
● 通过变化微管固定装置的角度可进行高效搅拌和灵活捕获。
● 采用钕制磁石，直接接触微管的构造，缩减捕获时间。
● 采用树脂材质，样本的可见性良好，实现了小型轻量化。
◆使用磁性（力）支架的应用案例
本试剂盒通过亲和法简便地从细胞培养上清和血清等样本中获得高纯度外泌体。通过外泌体膜表面存在的磷脂酰丝氨酸（PS）在金属离子条件下与Tim4蛋白结合，再经螯合剂处理获得完整状态的外泌体。使用磁力架可纯化高纯度外泌体。
◆方法
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磁珠捕获时间 |
1.0 μm磁珠 1 mL：约25秒 |
|
2.7 μm磁珠 1 mL：约10秒 |
|
|
4.5 μm磁珠 1 mL：约2秒 |
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作业容量 |
20 μL~1,500 μL（2,000 μL） |
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产品尺寸 |
W198.8×D49×H49（mm） |
|
重量 |
235 g |
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 299-36421 | MAGNET STAND MagCapture系列磁珠捕获用磁力架 |
1个 | – | – |
|
品牌：FUJIFILM Wako
CAS No.： 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
|
013-25153 |
for Immunochemistry | 2.5mL×5 | – | 咨询 | – | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。
