腺相关病毒(Adeno-Associated Virus, AAV)作为基因治疗的载体存在一些非常突出的优点,比如能感染分裂和非分裂细胞、不具有明显的致病性、整合至宿主特定染色体长期表达目的蛋白等,已成为基因治疗被广泛应用的安全、有效的载体。
在腺相关病毒的应用过程中,我们经常需要获得病毒液的病毒含量或者腺相关病毒的滴度数据。传统的方案是使用DNA点杂交或其他类似方法来测量腺相关病毒感染滴度,但是这种传统的方法实验周期较长,操作繁琐。对于已获得了高纯度AAV颗粒的检测,使用OD260nm处光吸收度数值来衡量AAV的病毒颗粒含量不失为一种更便捷的方案,遗憾的是,这种方法不适用于未纯化的病毒颗粒,因为其它的杂质会干扰260nm处的吸收度。另外,采用免疫学的办法,使用与AAV病毒颗粒结合的抗体来检测腺相关病毒含量也有被使用,但是很显然,这种方法将会检测所有AAV病毒,包括不含有基因组DNA的包装颗粒。
Cell Biolabs的QuickTiter™ AAV Quantitation Kit试剂盒(目录号:VPK-145)很好的解决了上述问题,该试剂盒包括试剂A、试剂B、捕获Matrix、洗脱液、溶液C、Dye染料以及AAV DNA标准物。本腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺病毒DNA含量来测定其病毒含量。
该腺相关病毒定量试剂盒的工作步骤是首先降解悬液里的核酸成分,然后使用Matrix胶有效结合腺相关病毒颗粒,从而分离出杂质蛋白及蛋白复合物,洗脱下AAV颗粒后进行变性,随后用染料对核酸进行染色。
由于采用了专利技术的捕获Matrix胶,不但能专一性的结合腺相关病毒颗粒,因此能有效的提高检测效度;而且可以用于未纯化的AAV病毒液,因此可定量已经纯化的AAV病毒以及未纯化的AAV病毒。经过相关步骤后,通过480/520 nm滤镜荧光仪下读取数据,对照AAV DNA标准曲线得出AAV滴度。该试剂盒检测灵敏,对于已经纯化的AAV DNA,可以在2小时内获得数据,可检测1×109GC/ml的AAV;对于未纯化的DNA,需要使用Kit提供的提纯试剂纯化再测量,大概在3-4小时左右完成,可检出5×1010GC/ml腺相关病毒。该试剂盒能从无辅助病毒的AAV病毒液内完成20次检测。
产品名称 | 货号 | 产品说明(点击查看说明书) |
QuickTiter™ AAV Quantitaiton Kit | VPK-145 | 荧光检测,20次分析 |
美国著名细胞学试剂专家Cell BioLabs为您提供高效简便的重组腺相关病毒相关产品和服务,产品包括腺相关病毒的纯化、定量和高效转染试剂。ViraBind™腺相关病毒纯化试剂盒采用特殊的纯化Matrix技术,无需超速离心,在大大减少试验时间的同时还保证了AAV的纯度。QuickTiter™腺相关病毒定量试剂盒通过检测腺相关病毒DNA含量来测定其病毒含量,只需2小时。ViraDuction™腺相关病毒转导试剂能极大的增加腺相关病毒在多种细胞内的转导效率,包括传统转染方法转导效率低的非分裂细胞,如原代培养细胞和干细胞。如果您对腺相关病毒产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询腺相关病毒相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。