药典收录的内毒素检测法–凝胶法・显色法・浊度法


药典收录的内毒素检测法–凝胶法・显色法・浊度法

药典收录的内毒素检测法--凝胶法・显色法・浊度法



  鲎试剂与内毒素反应产生凝胶,这种方法被称为凝胶法。

  另外,以光学变化为指标的光学检测法包括在凝胶化的过程中以浊度变化为指标的浊度法,以通过合成底物的水解作为指标的显色法。

 


凝胶法:以鲎试剂产生凝胶为指标的检测法

色法:以合成底物的水解引起显色变化为指标的光学检测法

浊度法:在凝胶的过程中以浊度变化为指标的光学检测法

◆凝胶法

药典收录的内毒素检测法--凝胶法・显色法・浊度法


  将鲎试剂和样品在试管中混合,并在37±1℃下加热60±2分钟,操作过程中避免摇晃。加热后立即将试管缓慢倒转180°,如果形成不变形不塌陷的凝胶,则结果为阳性,如果未形成凝胶则结果为阴性。等比稀释(通常为2倍)样品,判断在几倍稀释率内结果都为阳性。判定为阳性的最大稀释率(或最小浓度)被称为终点。

 


对应试剂

■  ES-Ⅱ系列

  本系列试剂符合日本药典验证试验的特异性内毒素(不与(1→3)-β-D-葡聚糖反应)检测鲎试剂。胶凝灵敏度为0.015 EU/mL。试剂分为单次型和多次型。


■  ES-F系列

  本系列试剂的成分和制法与ES-Ⅱ系列相同,并且已经获得FDA认证,可执行符合FDA的验证试验。是一种特异性内毒素检测鲎试剂。胶凝灵敏度为0.015 EU/mL。试剂分为单次型和多次型。


■  J、F系列

  J系列试剂是符合日本药典验证试验的鲎试剂,F系列试剂是符合FDA验证试验的鲎试剂。两种试剂都会与(1→3)-β-D-葡聚糖发生反应。可以根据内毒素浓度选择胶凝灵敏度分别为0.03 EU/mL或0.25 EU/mL的产品。试剂分为单次型和多次型。

 


◆显色法


  显色法通过显色合成底物的分解来检测由内毒素引起的鲎试剂的活化。由于P-硝基苯胺的黄色色度是通过405nm附近的吸光度变化来测量,因此,如果样品在405 nm附近有较大的吸收度,则本方法不适用。

 


对应试剂

■  Color KY系列

  本系列试剂是符合日本药典验证试验的特异性内毒素显色法试剂。

  本系列试剂包括能与Toxinometer®(BL2型)组合进行动态-显色法的单次型试剂,以及使用Toxinometer® 或酶标仪进行动态-显色法检测的多次型试剂。

  只需使用最低浓度的试剂即可进行高灵敏度检测,这是FUJIFILM Wako产品的一大特点。(单次型试剂的检测限度为0.0002 EU/mL,多次型试剂的检测限度为0.0005 EU/mL)

 


◆浊度法


  浊度法是利用凝胶产生的浊度变化来检测内毒素与鲎试剂反应的方法。本方法不适用于浊度较大的样品。

 


对应试剂

■  ES-Ⅱ系列

  本系列试剂是符合日本药典验证试验的特异性内毒素检测(不与(1→3)-β-D-葡聚糖反应)鲎试剂。试剂分为单次型和多次型。


■  ES-F系列

  本系列试剂的成分和制法与ES-Ⅱ系列相同,并且已经获得FDA认证,可执行符合FDA的验证试验。是一种内毒素特异性(不与(1→3)-β-D-葡聚糖反应)鲎试剂。试剂分为单次型和多次型。


■  ES-F/Plate

  本试剂符合FDA验证试验,是一种内毒素特异性(不与(1→3)-β-D-葡聚糖反应)浊度法用试剂。

  能配合酶标仪进行动态-显色法检测。


■  J、F系列

  J系列试剂是符合日本药典验证试验的鲎试剂,F系列试剂是符合FDA验证试验的鲎试剂。两种试剂都会与(1→3)-β-D-葡聚糖发生反应。可以根据内毒素浓度选择胶凝灵敏度分别为0.03 EU/mL或0.25 EU/mL的产品。试剂分为单一型和多类型。


■  HS-T SINGLE

  本系列试剂是符合日本药典验证试验的内毒素非特异性(能与(1→3)-β-D-葡聚糖反应)鲎试剂。只有单次型试剂。



欲了解更多相关产品,请点击:Wako的内毒素检测系统

鲎试剂 LAL ES-Ⅲ(适用于溶胶凝胶法和动态浊度法) Limulus Amebocyte Lysate ES-Ⅲ, Lyophilized

鲎试剂 LAL ES-Ⅲ(适用于溶胶凝胶法和动态浊度法)
Limulus Amebocyte Lysate ES-Ⅲ, Lyophilized

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

鲎试剂 LAL ES-Ⅲ(适用于溶胶凝胶法和动态浊度法)                              Limulus Amebocyte Lysate ES-Ⅲ, Lyophilized

鲎试剂 LAL ES-(适用于溶胶凝胶法和动态浊度法)

Limulus Amebocyte Lysate ES-, Lyophilized



◆优点・特色

 

● 该试剂适用于生物制剂,尤其适合白蛋白制剂和含有白蛋白的制剂。

● 可测定白蛋白含量6%以下的样品。

● 该试剂也适用生物制剂标准《内毒素检测法》中的“平行线定量法”。

● 该套装(试剂)符合日本药典中收录的《内毒素检测法》。

● 因不易受测量品的 pH 影响,可测出稳定的内毒素。

 


相关信息


产品名称 检测范围
Multi-Test  鲎变形细胞溶解物 ES-Ⅲ 冻结干燥品 0.0156-0.25

 


◆案例・应用

 

【实验例】

往白蛋白制剂(25%)加入内毒素后,用注射用水稀释,直至白蛋白浓度为 0.1~6.25% 即可用平行线定量法。
(平行线定量法专用软件
 LS-MAXMASTER BP1.0) ※现已售罄

 

鲎试剂 LAL ES-Ⅲ(适用于溶胶凝胶法和动态浊度法)                              Limulus Amebocyte Lysate ES-Ⅲ, Lyophilized

 

■专用软件的设置界面


      「Toximaster ® QC7」和「Toximaster ® QC7 ER/ES」,通过生物制剂标准《内毒素检测法》里记载的平行线定量法支持数据处理功能,除了人体血清蛋白和干扰素,是为能用于各式各样生物制剂的内毒素测试上设计制成的专门软件。方差分析的结果和制剂自身内毒素的固定数值,甚至包括原始数据、该软件均能显示到界面和打印出来。

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      检查实验体的浓度点数和重复次数等、实验体设置内容的操作框。用检查功能为遵照各种实验项目的的化验提供服务。

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      测定完成后,打印出需要的化验结果。

      可作成以平衡线定量法为基准的化验报告。

 

■测量报告


 

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什么是内毒素

● 内毒素检测——鲎试剂的选择方法

产品说明书


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鲎试剂LAL ES-3

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
295-51801  Limulus Amebocyte Lysate ES-3, Lyophilized
鲎试剂LAL ES-3(适用于溶胶凝胶法和动态浊度法) 
100 tests

鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法) Limulus PS Single tests Wako

鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)
Limulus PS Single tests Wako

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)                              Limulus PS Single tests Wako

Limulus PS Single tests Wako


鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)                              Limulus PS Single tests Wako


◆原理


       用 Pyrosep ™Pyrosep ™ 是在水不溶性载体中通过空间杆结合了组氨酸的亲和吸附剂,可特异性吸附内毒素)填充毛细管柱可吸附样品中的内毒素。
       洗掉样品后,吸附的内毒素与鲎试剂反应,进行定量。
       整个检测在 Toxinometer
® 中进行。

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【成分】

(1)LAL ES Single 试剂:鲎试剂 LAL 的冻结干燥品 20 瓶( 0.3 mL 用)
(2)Pyrosep ™ 悬浊液(悬浮于磷酸缓冲液)20 (0.77 mL)
(3)LAL 溶解液 2(7 mL)
(4)清洗液 4(11 mL)
(5)稀释缓冲液 4(10 mL)
(6)毛细管柱(附硅胶管) 20 支


※本产品不包含注射器、3向旋塞、专用接头。


◆优点特色


● Pyrosep™ 可吸附和浓缩样品中的内毒素,实验不受共存物的影响,可特异性测量出少量内毒素。

 内毒素在乙醇中也可被Pyrosep™ 吸附,一些无法用 Limulus tests检验出来的脂溶性样品,只要能溶于乙醇,即可测定内毒素。(例如:脂

      性维他命、油脂)

 鲎试剂只会消耗测量时需要的部分,不会造成浪费。

◆案例应用

鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)                              Limulus PS Single tests Wako

※测量方法详细请见这里。另,使用方法请查阅视频这里

■应用实例


A. 测定透析液中的内毒素

往市场上出售的腹膜透析液 Dianeal PD4(百特公司)、补肾液 Sublood A 及 B(扶桑制药)各 5.0 mL 中加入 USP 标准内毒素,再用 0.1 M 醋酸将 pH 值调到5左右作为样品。用 Pyrosep™ 法测量其内毒素浓度,求出添加内毒素的回收率。

通过 Pyrosep™ 法,透析液中的内毒素最低检测下限为 0.1 EU/L 。

标准曲线(样品量:5.0 mL)

鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)                              Limulus PS Single tests Wako



图1 通过 Pyrosep™ 法测定腹膜透析液·置换液中的内毒素回收率

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B. 测定脂溶性维他命的内毒素

用乙醇溶解脂溶性维他命D、E、K,再加入 USP 标准内毒素后,用 Pyrosep™ 法测定内毒素浓度,求出添加内毒素的回收率。

至今为止无法用鲎试剂测定的脂溶性维他命中的内毒素,如今可通过利用 Pyrosep™ 法测定出来。

图2 通过 Pyrosep™ 法用乙醇溶解脂溶性维他命的内毒素回收率

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*加入内毒素直至终浓度达到 0.05 EU/mL 为止。

■其他应用实例

       乙醇、硅油、大豆油、橄榄油、硬脂酸、蛋黄磷脂、油性佐剂的疫苗、白蛋白制剂、凝固因子制剂(第8因子)、干扰素制剂、抗凝血酶III制剂、免疫蛋白制剂、其他能溶于乙醇的材料均能测量。

 

什么是内毒素

● 内毒素检测——鲎试剂的选择方法

产品说明书


鲎试剂 LAL PS Single(适用于动态浊度法)                              Limulus PS Single tests Wako

鲎试剂PS Single

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
299-54501 Limulus PS Single tests Wako
鲎试剂PS Single(适用于动态浊度法)
20 次
294-33311 PS Accesory Kit 1 set