用于质谱分析– SILAC氨基酸
用于质谱分析– SILAC氨基酸
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 010-24041 | L-精氨酸-13C6,15N4盐酸盐 | 50mg | 生物化学 | – |
| 017-24051 | L-精氨酸-13C6盐酸盐 | 50mg | 生物化学 | – |
| 123-06081 | L-赖氨酸-13C6,15N2一盐酸盐 | 50mg | 生物化学 | – |
| 120-06091 | L-赖氨酸-13C6一盐酸盐 | 50mg | 生物化学 | – |
| 047-31345 | D-MEM(高葡萄糖) (L-谷氨酰胺, 含酚红, 不含L-精氨酸, L-赖氨酸) |
500ml | 细胞培养 | – |
| RPMI-500 | RPMI1640 Media for SILAC (含酚红, 不含L-精氨酸, L-赖氨酸) |
500ml | CIL | – |
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株式会社日立テクサイエンス（日立高科技股份有限公司） 伊藤 正人
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"氨基酸分析〜新趋势〜"系列之一 （味の素株式会社）味之素股份有限公司 创新研究所 宫野 博
氨基酸是蛋白质的组成成分，也是重要的代谢物。氨基酸检测技术始于1941年的分配色谱，现在仍在持续发展——高灵敏度化、快速化、D-氨基酸检测方法的开发及准确定量分析需要的环境维护等。氨基酸分析技术的进步应用于生物化学和营养学等研究领域，对丰富人们的生活做出贡献。 本连载由实际开发各种技术的老师执笔，为读者们提供氨基酸分析的新信息。 |
◆前言
人们认为氨基酸是生命起源最初形成的复杂物质。不过神奇的是构成我们身体的蛋白质仅由L-氨基酸组成。L-氨基酸是光学异构体之一。L-氨基酸是一种光学异构体，在生命诞生的初期，地球内外每个角落的L-氨基酸比D-氨基酸自发地占据主导地位，由此可见，L-氨基酸的增殖是必然的。为了解开谜团，探索来自地球外的生命构成物质。虽然它是掌管生命的基本氨基酸，但蛋白质的组成氨基酸有20种，由于它们的分子结构相似，为了分析它们，首先必须分离每种成分。而且，由于大多数氨基酸分子对紫外线的吸收不具有特异性，因此通常使用的色谱检测法——紫外吸收光谱法并不能直接使用。实际上，在下文中设计了由几种分离方法和衍生化检测法组合而成的分析方法。
◆氨基酸分析法
在第17次修订的日本药典中收录了8种氨基酸分析方法作为参考1），但如上所述，无论哪一种方法都不是直接检测氨基酸分子，而是检测氨基酸衍生物（表 1）。氨基酸是具有氨基和羧基的两性离子（双性离子）物质，在水溶液中发生电离。由于在离子的状态下难以使用用于分离分析的反相色谱（反相HPLC）法，因此设计了一些在过柱前衍生化的柱前衍生法。利用离子交换色谱的话可以分离离子本身，但为了检测，有必要在分离后将其衍生化，这称为柱后衍生法。
由表1可见，衍生法有优点也有缺点。在柱后衍生法中，虽然氨基酸的各成分通过离子交换色谱分离后与反应试剂混合发生衍生化反应，产生稀释和峰值扩散，但无论是生成多种反应物，还是处于反应过程中，影响都不大。因此，它可以准确定量，重复性好。柱前衍生法具有一个特征，即如果产物稳定且只有一种，则可以使用反相HPLC简单地实现高速和高灵敏度2）。另外，虽然反应试剂的消耗量相对较小，但反应效率可能会受样本基质影响。空白试剂无法用预装柱法检测，需要对空白试剂进行分离。在柱后衍生法中，必须选择对检测结果影响很小的试剂。柱后衍生法包括茚三酮法和OPA法，前者稳定性高，后者灵敏度高。
据说反相色谱法比离子交换色谱法更高速更高效率，并且日本药典中还记载了应用此分离方法的六种预装柱法。每个方法都有其特点，首先PITC法是伴随Edman分解的衍生法，也被称为预柱法的起源。AQC法是通过荧光检测实现高灵敏度检测，但半胱氨酸（Cys）的检测限高于其他的成分。OPA柱前法是一种高灵敏度的荧光检测法，与方法7或8结合使用可以弥补不能检测到脯氨酸（Pro）等的仲胺的缺陷。DABS-Cl法应用了可见光分光光度法，比PITC法更具高选择性和高灵敏性。FMOC-Cl法能够对仲胺氨基酸进行高灵敏度分析，但组氨酸（His）的衍生物易分解，难以稳定检测，因此在某些情况下可与OPA预柱法结合使用。最后，NBD-F法能够分析包括仲胺等氨基酸，因此被称为实用的高灵敏度方法。
虽然都是氨基酸，但是对于Pro，Cys，His等分析法都有各自的适用性，需要根据用途来使用。在本文中，我们重点回顾氨基酸分析的历史，讨论长期以来作为标准方法的茚三酮柱后检测法。
表1. 日本药典中记载的氨基酸分析法
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方法 |
氨基酸分析法 |
分离方法 |
检出波长 |
检出限 |
直线性/范围 |
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方法1 |
茚三酮柱后检测法 |
离子交换色谱 |
吸光 1：570 nm |
约10 pmol |
20~500 pmol |
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方法2 |
OPA柱后荧光检测法 |
离子交换色谱 |
激发348 nm |
数十pmol |
数pmol ~ |
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方法3 |
PITC柱前衍生法 |
反相HPLC |
吸光 245 nm |
几乎1 pmol |
20~500 pmol |
|
方法4 |
AQC柱前衍生法 |
反相HPLC |
激发 250 nm |
根据成分约40~320 fmol |
2.5~200 μmol/L |
|
方法5 |
OPA柱前衍生法 |
反相HPLC |
激发 348 nm |
50 fmol、实际是1 pmol |
_ |
|
方法6 |
DABS-Cl柱前衍生法 |
反相HPLC |
吸光 436 nm |
约1 pmol |
2~5 pmol是定量范围 |
|
方法7 |
FMOC-Cl柱前衍生法 |
反相HPLC |
激发 260 nm |
数fmol |
0.1~50 μmol/L |
|
方法8 |
NBD-F柱前衍生法 |
反相HPLC |
激发 480 nm |
约10 fmol |
− |
◆茚三酮法的历史
历史追溯到3）1948年，Moore和Stein报道了用于氨基酸分析的茚三酮分光光度法。使用淀粉作为固定相的色谱法，探讨反应产物的吸收光谱与每种氨基酸成分的茚三酮反应特性的关系。1958年，Spackman与两位博士一同开发了一款应用氨基酸的色谱法自动记录色谱的装置4）。这正是表1中茚三酮柱后检测法的前身。1962年，日立研发了同类型的KLA-2型氨基酸分析仪5）（图1）。作为一款早期日本制造的KLA-2，分析仪搭载着两个内径9 mm，长度分别为50 cm和150 cm的玻璃柱。当时，填充离子交换树脂呈破碎状，粒径约为300~1,000 μm。用短柱分析赖氨酸（Lys）~精氨酸（Arg）等碱性氨基酸，需耗费4个小时，用长柱分析天冬氨酸（Asp）到苯丙氨酸（Phe）等酸性或中性氨基酸需耗费15个小时。如果算上样本添加等时间，这种分析方法大约是一天检测一个样本。
1977年4月，一则新闻报道称，有日本渔船在新西兰海岸附近捕获到了神秘动物，可能是发现了怪兽，像尼斯湖的尼斯湖水怪一样的蛇颈龙6）。随后将神秘动物黏着在甲板上的胡须状的前鰭带到日立制作所那珂工厂，并用当时先进的机器尝试对前鳍进行氨基酸成分分析。由于它检测出胶原蛋白特有的组成成分，查明它是鲨鱼的鳍棘，怪兽的梦在发现神秘动物的第三个月化成泡影。从使用835型起，便开始了在10 MPa以上的高压下进行分析的高效液相色谱（HPLC）氨基酸分析仪的时代（图2）。填充料采用粒径5 μm的球形树脂。使用内径为4 mm，长度为150 mm的不锈钢柱，使用同一根柱子检测酸性、中性和碱性的氨基酸。分析速度提升至约50分钟内分析18种蛋白质水解产物的氨基酸成分。
图1. KLA-2 型（1962） 图2. 835型（1977） 图3. LA8080 AminoSAAYA®（2017）
◆茚三酮法的现在
2017年，小巧简易型的台式高速氨基酸分析仪LA8080公之于众7）（图3）。茚三酮法的检测原理与Moore等人的报告4）相同，如最新的流程图（图4）所示。在约20种成分的蛋白质水解产物的氨基酸分析中使用柠檬酸钠缓冲液，在约40种成分的生物液体由来的氨基酸分析中使用柠檬酸锂型缓冲液。洗脱液由泵1送出，通过用于除去氨的过滤柱，到达自动取样器。天冬酰胺（AspNH2）和谷氨酰胺（GluNH2）易于氧化，冷藏保存可有效抑制氧化。柱子用导入了磺酸基的强酸性离子交换树脂（粒径3 μm）填充，并且通过珀耳帖效应的柱式恒温装置控制柱子温度。为了柱后衍生化，对于从分离柱洗脱的各个氨基酸与来自泵2的茚三酮溶液混合。反应装置在盒状的TDE 3（立方体）反应堆中恒温保持在135°C。检测器在570 nm3）下检测氨基酸的蓝紫色反应生成物的吸光度。另一方面，仲胺Pro和羟脯氨酸（Hypro）与茚三酮溶液反应不生成蓝紫色产物，检出波长是440 nm。该检测波长与Moore等人的装置4）完全相同。
图4. 茚三酮衍生法的流程图
通常使用6 mol / L盐酸在110℃ 24小时的条件下进行蛋白质水解。在定量分析Cys或甲硫氨酸（Met）时，使用甲酸氧化后再用盐酸水解。另外当检测色氨酸（Trp）时，也有用碱水解的方法。图5为茚三酮法的应用——蛋白质水解物的色谱图（注入2 nmol的各标准品成分，柱温恒定在57℃）。异亮氨酸（Ile）和亮氨酸（Leu）具有相似的分子结构，难以用色谱分离，获得的分离度在1.2以上。此外，SN比2的Asp的检出限为2.5pmol以下，甘氨酸（Gly）和组氨酸（His）的峰值面积再现性RSD在1.0％以下。然而Cys在标准品中是以二硫键结合胱氨酸的状态存在。
另一个应用是生物液体分析。顾名思义，就是分析动物的血清和尿液等样本，但在保健品、葡萄酒和酱油等食品中的牛磺酸（Tau），GABA (γ – ABA)，鸟氨酸（Orn）一类包含约40种氨基酸成分的样品也可以进行分析。使用程序降温的生物液体分析方法（注入2 nmol的各标准品成分）获得了良好的色谱图（图6）。除了分离AspNH2和GluNH2之外，也可检测如二肽鹅肌肽（Ans）和肌肽（Car）。羟基赖氨酸（Hylys）具有构象异构体，当色谱柱良好时，可明显看见双峰。瓜氨酸（Cit）和α-氨基丁酸（α-ABA）或1-甲基组氨酸（1-Mehis）和3-甲基组氨酸（3-Mehis）也难以分离。
最后，阐述一下Moore等人的茚三酮柱后衍生法被广泛使用的原因。原因之一在于分离方法。以氨基阳离子交换色谱为基础8），基本上，以每种氨基酸各成分的等电点顺序排列保留时间。这个方法存在一种仅依靠上述内容无法说明的分离机制。这种分离机制的模式是以苯乙烯为填充剂载体和二乙烯基的共聚物影响的疏水性相互作用模式。例如，它能有效分离苯丙氨酸和酪氨酸等芳香族氨基酸。开发人员可以通过调整洗脱液组成，逐步洗脱的切换时间和柱温等巧妙地操作离子交换和疏水性的相互作用来实现目标成分的分离。
使用茚三酮柱后衍生法的另一个原因，氨基是关键点并且生成鲁赫曼紫。由于柱后法可以分离样本中的杂质，不易受到杂质干扰。因此，即使是食品或生物体来源的样本，通过脱蛋白和过滤进行可靠的预处理，可使数据具有高可靠性。由于生成的蓝紫色产物特异性很高，且检测可见光区域的吸光度发现色谱图中几乎不会出现干扰峰。因此，定量分析的再现性良好，并且检测的动态范围宽，从而可以确保4位以上的线性。另外，只要将茚三酮溶液保存在阴暗处，就难以变质且稳定。
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◆结语
在许多氨基酸分析方法特别是茚三酮柱后衍生法中，探讨分离方法，虽然花费分析时间，但能确保一定的分离度，所以最终能获得高精度的定量分析，就是它的魅力所在。对于开头所提到的非对称性研究，期待在本连载中可以揭示从L-氨基酸中分离D-氨基酸的分析方法。
◆谢辞
衷心感谢味之素创新研究所基础技术学院的宫野博所长和小泽真一研究员以及出口喜三郎 元北海道大学特任教授的对本文的指导。
〔参考文献〕
[1] 一般財団法人 医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団編：「第十七改正日本薬局方」（じほう）（2016）.
[2] 中村 洋監修：「ちょっと詳しい液クロのコツ前処理編」（丸善）（2006）.
[3] 小澤真一、宮野博、伊藤正人：S. I. NEWS, 58, 4968（2015）.
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[6] 伊藤正人：ぶんせき，2010，145（2010）.
[7] 伊藤正人、成松郁子、裴敏怜、森崎敦己、鈴木裕志、福田真人、八木隆、大月繁夫、関一也、豊崎耕作：S. I. NEWS, 61, 5360（2018）.
[8] 伊藤正人、成松郁子、裴敏怜、森崎敦己、鈴木裕志、福田真人、八木隆、大月繁夫、関一也、豊崎耕作：S. I. NEWS, 61, 5360（2018）.
◆产品列表
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产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
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299-70501 |
Ninhydrin Coloring Solution Kit for HITACHI |
日立高速氨基酸分析仪用 |
2L用 |
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日本和光（Wako）用于氨基酸自动分析的试剂：
| 英文名称 | 中文名称 | 货号 | 包装 |
| Acetic Acid | 乙酸 | 018-09485 | 500mL |
| Hydrochloric Acid | 盐酸 | 086-03925 | 500mL |
| Boric Acid | 硼酸 | 020-07305 | 500g |
| Phenol | 苯酚 | 167-06625 | 500g |
| Octanoic Acid | 辛酸 | 034-06363 | 25mL |
| 038-06366 | 500mL | ||
| Ninhydrin | 茚三酮 | 209-02771 | 1g |
| 207-02772 | 25g | ||
| Lithium Chloride | 氯化锂 | 125-02445 | 500g |
| Hydrindantin | 还原茚三酮 | 088-03701 | 10g |
| AminoTag Wako | Wako氨基酸标签 | 293-70401 | 500回用 |
| OPA Reagent Set | OPA 试剂 | 153-01361 | 2L用 |
| Sodium Hydroxide | 氢氧化钠 | 192-07935 | 500g |
| Citric Acid Monohydrate | 单水柠檬酸 | 032-08385 | 500g |
| Ethylene Glycol | 乙二醇 | 058-03965 | 500mL |
| Dimethyl Sulfoxide | 二甲基亚砜 | 042-17095 | 500mL |
| Lithium Acetate Dihydrate | 醋酸锂二水 | 127-02525 | 500g |
| 2-Methoxyethano | l2-甲氧基乙醇 | 050-01085 | 500mL |
| Sodium Acetate Trihydrate | 醋酸钠,三水 | 195-05085 | 500g |
| Lithium Hydroxide Monohydrate | 氢氧化锂一水合物 | 121-02425 | 500g |
| L-Asparagine Standard Solution | L-(+)-天冬酰胺一水标准溶液 | 016-14131 | 1mL×5 |
| Tin(II) Chloride Dihydrate | 氯化亚锡二水合物 | 201-04811 | 2g×5 |
| Trilithium Citrate Tetrahydrate | 柠檬酸三锂四水合物 | 124-02275 | 500g |
| Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B | 氨基酸混标溶液 B型 | 016-08641 | 5mL |
| Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B | 氨基酸混标溶液 B型 | 012-08643 | 1mL×5A |
| Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H | 氨基酸混标溶液 H型 | 013-08391 | 5mL |
| Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H | 氨基酸混标溶液 H型 | 019-08393 | 1mL×5A |
| PDSTAG Wako EluentPDSTAG | Wako 洗提液 | 010-23061 | 1L |
| Sodium Tetrahydroborate | 硼氢化钠 | 199-07962 | 25g |
| Trisodium Citrate Dihydrate | 柠檬酸三钠,二水 | 196-05532 | 25g |
| 190-05535 | 500g | ||
| 4mol/l Lithium Hydroxide Solution | 4mol/l氢氧化锂溶液 | 125-02325 | 500mL |
| p-Toluenesulfonic Acid Monohydrate | 对甲苯磺酸单水合物 | 209-06872 | 25g |
| 4mol/l Methanesulfonic Acid Solution | 4mol/l甲磺酸溶液 | 132-08431 | 1mL×10A |
| Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 | 氨基酸混标溶液AN-2型 | 015-14461 | 5mL |
| APDSTAG Wako Borate BufferAPDSTAG | Wako 硼酸盐缓冲溶液 | 019-23151 | 1L |
| 2,2'-Thiodiethanol | 硫双乙醇 | 201-04193 | 25mL |
| 205-04196 | 500mL | ||
| APDSTAG Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution | APDSTAG Wako氨基酸内标混合溶液 | 293-73701 | 1set |
| Amino Acid Analysis Reagent (for LC/MS)(APDSTAG) | 氨基酸分析试剂（APDSTAG） | 014-23841 | 100mg |
| pH 2.2 Lithium Citrate Buffer Solution | pH 2.2柠檬酸锂缓冲溶液 | 123-02505 | 500mL |
| pH 2.2 Sodium Citrate Buffer Solution | pH 2.2柠檬酸钠缓冲溶液 | 195-07165 | 500mL |
| pH 3.25 Sodium Citrate Buffer Solution | pH 3.25柠檬酸钠缓冲溶液 | 192-07175 | 500mL |
| pH 4.25 Sodium Citrate Buffer Solution | pH 4.25柠檬酸钠缓冲溶液 | 199-07185 | 500mL |
| pH 5.28 Sodium Citrate Buffer Solution | pH 5.28柠檬酸钠缓冲溶液 | 196-07195 | 500mL |
| pH 4.30 Sodium Citrate Buffer Solution | pH 4.30柠檬酸钠缓冲溶液 | 198-07275 | 500mL |
| pH 5.10 Sodium Citrate Buffer Solution | pH 5.10柠檬酸钠缓冲溶液 | 195-07285 | 500mL |
产业技术综合研究所 计量标准综合中心 加藤爱、山崎太一、井原俊英
1. 前言
氨基酸虽然是我们生活中常见的化合物，但由于其结构具有多样性，在分析上具有一定难度。目前已开发了多种氨基酸的分析方法，其中以色谱法为主流分析方法。色谱法的发展对于氨基酸分析的普及起到了重要作用。
近年来，氨基酸分析法不仅在常规的生化领域和食品领域广泛应用，在临床化学领域和医学领域中也得到了广泛应用，其检测结果的可靠性也逐渐备受关注。对于氨基酸分析仪中校准的关键——氨基酸标准溶液，日本产业技术综合研究所·计量标准综合中心（AIST/NMIJ）近十年以来，一直致力于提供可溯源至国际单位制（SI）的氨基酸混合标准溶液。
在FUJIFILM Wako推出可溯源至SI的氨基酸混合标准溶液之际，本文将围绕这一主题展开对NMIJ中的基础研究、标准物质的开发、以及混合标准液的技术转让的相关内容进行介绍。
2. 氨基酸认证标准物质（CRM）的开发
为确保氨基酸检测的计量溯源性，我们就17种蛋白水解氨基酸开发了具有高计量品质的氨基酸认证标准物质（Certified Reference Material; CRM）。对于CRM的形式，考虑到固体粉末有着优异的稳定性，以及用户可制备任何类型、浓度的溶液，可选择不同溶剂的优点，最终选择以固体粉末的形式进行供应。
对于氨基酸CRM纯度的定量，符合基准测量方法（Primary method）的方法有两种，一种是利用氨基酸碱性的非水滴定法，一种是滴定氨基酸所含氮的氮分析法。上述两种方法，滴定用试剂的高氯酸/乙酸溶液和硫酸的当量，分别通过邻苯二甲酸氢钾标准物质（NMIJ CRM 3001-a）和碳酸钠标准物质（NMIJ CRM 3005- )进行标定，以确保计量结果可溯源至SI1） 。
使用非水滴定法和氮分析法定量氨基酸时，需知道盐以及氮的纯度，但这两种方法都存在同时检测到其他相关杂质（主成分以外的胺）的可能性。实际上，部分候选标准物质中都含有不可忽略的相关杂质。
因此，利用滴定法确定氨基酸的纯度时，需准确定量相关杂质。通过结合柱后衍生化检测法（OPA法等）、柱前衍生化检测法（AQC法）、LC/MS等多种分离分析方法，可以准确定量相关杂质并构建评估系统2)，并将这些定量结果结合到滴定值上，求出氨基酸纯度。
我们对非水滴定法和氮分析法所得出氨基酸的纯度进行加权平均后，对17种氨基酸的纯度进行定量，最终CRM的扩展不确定度小于0.3%，纯度大于99.7%。另外，为满足氨基酸的光学异构体分析需求，还评估了CRM中甘氨酸以外的氨基酸的D型，并以“L型氨基酸的纯度“和”不考虑光学异构体时的纯度“两个作为认证值。
以此方式进行纯度评估的17种氨基酸CRM可在NMIJ网站上查询，并通过“相关从业人员”获取。CRM 随附的证书记录了认证值、认证值的确定方法、计量溯源性以及认证时的氨基酸相关杂质含量和D型氨基酸含量作为参考信息。
3. 氨基酸可溯源标准物质（TRM）的开发
对于蛋白氨基酸等（包含尿素以及氯化铵），产业技术综合研究所也在不断地完善认证标准物质（NMIJ CRM）。但是关于非蛋白氨基酸，从资源的角度考虑，由于早期开发比较困难，一直都没有完善的NMIJ CRM。因为其主要以混合标准溶液的形式提供，因此试剂厂家并没有开发以最高计量品质为目标的NMIJ CRM，而是通过“委托测试”的方式进行，即委托第三方评估预先分装并装瓶的原材料的纯度，并发布校准证书。
此外，对于两年开发22种氨基酸标准品的申请，在保证计量溯源性的同时还要重视速度，所以我们选择了与蛋白氨基酸略有差异的定量方式。除选择需要时间优化检测条件的滴定法，还结合了定量核磁共振光谱（qNMR）的纯度评估，兼顾计量溯源性以及检测效率。使用qNMR 应用于22种非蛋白氨基酸时，纯度的不确定度为0.5~1.9%（置信水平95%）。虽然精确度不及滴定法，但与从滴定法中获得的纯度和不确定度的范围有着良好的一致性3）。
与蛋白氨基酸类似，非蛋白氨基酸中杂质的定量通过结合LC/MS和柱后衍生液相色谱和滴定法，先定性、定量出杂质含量为0.01%以上的氨基酸，并减去滴定法获得的检测值来得出纯度。
准确稳定称量原材料对于分装并装瓶原材料、评估纯度，以及正确制备混合标准溶液来说有着重要意义。然而，非蛋白氨基酸几乎没有关于湿度环境和吸湿率相关的定量数据。当我们使用温度与湿度可控的热式重量计量设备进行评估时，在7种非蛋白质氨基酸中观察到明显的吸湿性，因此规定了操作时的湿度上限4）。
以上述方式进行纯度评估的22种非蛋白质氨基酸，根据其均一性和稳定性的评估结果，FUJIFILM Wako将其作为有保证的计量可溯源标准物质TRM（Traceable Reference Material）进行供应。
4. 确保国际比对时的国际一致性
NMIJ与世界各地计量机构的检测能力的等效性，通过BIPM（国际计量局）的CCQM（物质量咨询委员会）进行评估，并与国际间的计量机构的检测能力进行国际比对，并被国际互认。CCQM对纯度检测、浓度检测、成分分析等多个项目进行国际比对，获得的比较测试结果录入BIPM数据库中，可供查看5）。
关于氨基酸相关的纯度检测以及混合标准溶液的制备和检测能力，还进行了L-缬氨酸的纯度检测（CCQM-K55.c）和氨基酸混合标准溶液的浓度检测（CCQM-K148.b）相关的比对测试。NMIJ也参加了这方面的国际比对，在各参加测试的机构中取得优异的结果。
5. 精确制备混合标准溶液的系统构建及稳定性相关的基础研究
为提供具有计量可溯源性的氨基酸混合标准溶液，并考虑到标准溶液的稳定性，我们决定从开发的41种高纯度标准物质NMIJ CRM （19种）和TRM（22种）中，以L-谷氨酰胺、L-天冬酰胺、L-色氨酸和2-氨基己二酸外的37种氨基酸为对象构建精确混合标准溶制备系统。
由于人体含有氨基酸，所以在实验操作过程中比较容易造成污染。此外，还要注意制备混合标准溶液时，同时处理多种氨基酸时引起的相互污染。从防止吸湿的角度考虑，还需规定天平称量时的湿度上限。为使以上操作可以快速且稳定地进行并且无需依赖于制备人员的熟练度，我们于恒温恒湿实验室安装了配备粉末自动分配装置的天平系统。
由于该系统可将氨基酸单独分装至分装筒内，可减少人为污染以及相互污染。另外，只需更换分装筒就可以自动连续称量任意量的氨基酸，操作十分简单。
即使是老手也要花费半天制备的氨基酸混合标准溶液，若使用该系统制备，则只需1~2个小时，且所有组分都在0.3%的相对标准偏差值以内。
作为氨基酸混合标准溶液认证标准物质开发的重点，我们还对混合标准溶液中各组分的稳定性进行了基础研究。在进行评估时，我们发现市售氨基酸混合标准溶液的热门产品中，均未充分显示氨基酸混合标准溶液中各个组分的稳定性。
因此，使用上述的制备系统，在与热门产品相同的制备条件下（使用0.1 N稀盐酸溶解各氨基酸浓度至2.5 mM）制备氨基酸（17种）混合标准溶液，进行加速测试。结果显示，随着存储温度升高，谷氨酸环化并转化为焦谷氨酸。基于加速测试的结果预测谷氨酸的分解速度，推测冷藏储存时，谷氨酸的浓度含量在1年内最多会下降2%。
而使用较稀的盐酸制备混合标准溶液时，谷氨酸的稳定性得到改善，并且不会影响谷氨酸以外的水解氨基酸的稳定性。因此，优化谷氨酸pKa附近的溶剂pH对于确保谷氨酸的稳定性非常重要。除谷氨酸以外，在侧链也有羧基的2-氨基己二酸也会发生环化反应，所以，优化溶剂的pH对稳定这类结构的氨基酸也很重要6）。
6. 混合标准溶液制备技术的转让
基于上述的研究结果，产业技术综合研究所按照FUJIFILM Wako的研究委托，优化了氨基酸混合标准溶液的氨基酸浓度和溶剂的pH后，评估了各组分的稳定性，最终优化了5个剂型的氨基酸混合标准溶液，并建立了混合标准溶液的制备方法以及氨基酸浓度的评估方法。
最终，产业技术综合研究所将确立的制备方法技术转让予FUJIFILM Wako，通过两方机构进行共同测试，确认了氨基酸混合标准溶液生产现场的制备能力。2019年10月，FUJIFILM Wako取得了氨基酸混合标准溶液生产能力相关的ISO 17304的第三方认证。
7. 结语
为满足确保计量可溯源氨基酸的供应需求，我们开发了共41种高纯度标准物质NMIJ CRM和TRM。对于其混合标准溶液，也确立了精准的混合标准溶液制备方法以及评估方法。并对标准溶液组分稳定性进行了相关的基础研究，改善存在稳定性问题的组分的长期稳定性。
以这种方式开发的氨基酸混合标准溶液，确保了计量溯源性，并由FUJIFILM Wako进行供应。通过开发新型的高计量学品质和多种类的氨基酸混合标准溶液，为可溯源至SI的氨基酸检测奠定了基础。
8. 致谢
本研究的一部分基于FUJIFILM Wako委托产业技术综合研究所的研究而得以进行。感谢味之素株式会社，FUJIFILM Wako和产业技术综合研究所的各位研究人员，以及共同参与本研究的各位研究人员，感谢各位你们对本研究的指导和协助。在此，献上我们衷心的感谢。
◆参考文献
1. Kato, M. et al. : Anal. Sci., 31, 805 (2015).
2. Kato, M. et al. : Accred. Qual. Assur., 18, 481 (2013).
3. Saito, N. et al. : Bunseki Kagaku, 63 (11), 909 (2014).
4. Kato, H. et al. : Bunseki Kagaku, 66 (5), 375 (2017).
5. https://kcdb.bipm.org/AppendixB/KCDB_ApB_search.asp
6. Kato, M. et al. : Anal. Sci., 33, 1241 (2017).
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新产品相关的通知
尊敬的各位客户：
您好！FUJIFILM Wako一直以来承蒙您的关照，为此我们向您表示衷心的感谢。
关于现有的氨基酸混合标准溶液（H型、AN-2型、B型），FUJIFILM Wako抱歉地通知您这一系列的产品已停止售卖。同时，我们将推出品质有所提升的新产品。
新产品使用了氨基酸杂质含量已得到确认的原料（FUJIFILM Wako保证品）或可溯源至国际标准制SI的标准物质TRM（Traceable Reference Material），并利用了在认证标准物质氨基酸混合标准溶液的开发中使用的高精度调液技术进行制备。因此，和旧产品相比，这是一款精确性更高且更可靠的标准溶液。
伴随产品的更新，产品的规格和价格也进行了相应的调整。若为您带来不便，我们深表歉意。为感谢您的谅解与支持，我们将继续为您提供更可靠的氨基酸混合标准溶液。
如您有任何疑问，请随时向FUJIFILM Wako进行咨询。感谢您一直以来的支持！
此致
敬礼！
◆产品列表
（现有产品）
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
|
011-14463 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 |
1 mL×5A |
|
015-14461 |
5 mL |
|
|
012-08643 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B |
1 mL×5A |
|
016-08641 |
5 mL |
|
|
019-08393 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H |
1 mL×5A |
|
013-08391 |
5 mL |
*以上产品库存清空即停止售卖
新产品
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
|
016-28161 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN (High Concentration) 氨基酸混合标准溶液, AN型（高浓度） |
1 mL×5A |
|
010-28164 |
5 mL |
|
|
012-28141 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B (High Concentration) 氨基酸混合标准溶液, B型（高浓度） |
1 mL×5A |
|
016-28144 |
5 mL |
|
|
019-28151 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H (High Concentration) 氨基酸混合标准溶液, H型（高浓度） |
1 mL×5A |
|
013-28154 |
5 mL |
*新产品（AN型）不含现有产品（AN-2型）中所含的L-2-氨基丁酸。
【新产品开售时间】2021年1月中旬（预计）
旧产品库存清空即停止售卖，若给您带来不便，我们深表歉意。
2020年12月吉日
FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation
2019年，FUJIFILM Wako获得基于产品评估技术基础设施组织（NITE）的ASNITE认证计划中的 “氨基酸混合标准物质生产商”资格，并开始生产氨基酸混合标准溶液作为认证标准物质（CRM）。
CRM级氨基酸混合标准溶液可溯源到国际标准制（SI），保证了测量的可靠性。
为让广大新老客户体验到认证标准物质的稳定品质，FUJIFILM Wako现提供CRM级氨基酸混合标准溶液的免费试用装，数量有限，派完即止。详情欢迎向当地代理商，或在线客服咨询并索取试用申请表。
◆产品信息
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
|
018-27881 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H[CRM] |
1 mL×5A |
|
011-27871 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B[CRM] |
1 mL×5A |
|
015-27891 |
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN[CRM] |
1 mL×5A |
◆特点
● 日本首个获得ISO 17034认证的氨基酸混合标准溶液（基于ASNITE的认证计划）；
● 使用NMIJ CRM或FUJIFILM Wako的可溯源至SI的标准物质TRM（Traceable Reference Materia作为
● 生产原料；
● 批次间的差异极小；
● 随附证书记载了所含杂质的信息；
● 随附证书记载不确定度，可反映产品稳定性，同质性
*随附证书上记载了检测值、不确定度、计量溯源性。证书上附有的ASNITE认证标志，在国际上被实验室认可相互承认协议(MRA)所认可。
点击此处，了解更多关于产品成分、浓度等信息。
非天然氨基酸
非天然氨基酸
Funakoshi可提供100种以上的非天然氨基酸。非天然氨基酸因有着提高生理活性、代谢、溶解性和稳定性等多种不同的作用，备受广大药物研究人员的关注。
◆可提供的非天然氨基酸种类
|
α-AlkynylAla |
α-AlkenylGly |
α-AlkynylGly |
α, α-DialkenylGly |
Alanine (Ala) derivative |
|
|
Aspartic acid (Asp) derivative 衍生物 |
Asparagine (Asn) derivative 衍生物 |
Cysteine (Cys) derivative 衍生物 |
Leucine (Leu) derivative 衍生物 |
Lysine (Lys) derivative 衍生物 |
Ornithine (Orn) derivative |
|
Phenylalanin (Phe) derivative 衍生物 |
Proline (Pro) derivative 衍生物 |
Serine (Ser) derivative 衍生物 |
Threonine(Thr) derivative 衍生物 |
Tryptophan (Trp) derivative 衍生物 |
Tyrosine (Tyr) derivative |
|
Valine (Val) derivative 衍生物 |
|||||
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJJA |
(S)-α-Allylalanine・H2O |
(S)-α-AllylAla・H2O |
|
≧98.0％ |
96886-55-4 |
C6H11NO2・H2O |
147.17 |
|
FN-JJJB |
(R)-α-Allylalanine・H2O |
(R)-α-AllylAla・H2O |
|
≧98.0％ |
96886-56-5 |
C6H11NO2・H2O |
147.17 |
|
FN-JJJE |
(R)-N-Boc-α-Allylalanine ethyl ester |
(R)-N-Boc-α-AllylAla-OEt |
|
≧98.0％ |
1263046-12-3 |
C13H23NO4 |
257.33 |
|
FN-JJJH |
(S)-α-(4-Pentenyl)alanine tert-butyl ester p-Nitrobenzoate |
(S)-α-(4-Pentenyl)Ala-OtBu p-Nitrobenzoate |
|
≧98.0％ |
1323987-70-7 |
C12H23NO2・C7H5NO4 |
380.44 |
|
FN-JJJI |
(R)-α-(4-Pentenyl)alanine tert-butyl ester p-Nitrobenzoate |
(R)-α-(4-Pentenyl)Ala-OtBu p-Nitrobenzoate |
|
≧98.0％ |
1323987-68-3 |
C12H23NO2・C7H5NO4 |
380.44 |
|
FN-JJAB |
(S)-α-(7-Octenyl)alanine tert-butyl ester p-Nitrobenzoate |
(S)-α-(7-Octenyl)Ala-OtBu p-Nitrobenzoate |
|
≧98.0％ |
1375908-92-1 |
C15H29NO2・C7H5NO4 |
422.52 |
|
FN-JJAC |
(R)-α-(7-Octenyl)alanine tert-butyl ester p-Nitrobenzoate |
(R)-α-(7-Octenyl)Ala-OtBu p-Nitrobenzoate |
|
≧98.0％ |
1375904-22-5 |
C15H29NO2・C7H5NO4 |
422.52 |
◆α-炔基丙氨酸（α-AlkynylAla）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJAD |
(S)-α-PropargylAla |
(S)-α-AllylAla・H2O |
|
≧98.0％ |
1231709-27-5 |
C6H9NO2 |
127.14 |
|
FN-JJAE |
(R)-α-PropargylAla |
(R)-α-AllylAla・H2O |
|
≧98.0％ |
403519-98-2 |
C6H9NO2 |
127.14 |
◆α-烯基甘氨酸（α-AlkenylGly）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJBA |
(S)-α-Allylglycine |
(S)-α-AllylGly |
|
≧98.0％ |
16338-48-0 |
C5H9NO2 |
115.13 |
|
FN-JJBB |
(R)-α-Allylglycine |
(R)-α-AllylGly |
|
≧98.0％ |
54594-06-8 |
C5H9NO2 |
115.13 |
|
FN-JJBC |
(R)-N-Acetyl-α-Allylglycine |
(R)-N-Acetyl-α-AllylGly |
|
≧98.0％ |
121786-40-1 |
C7H11NO3 |
157.17 |
|
FN-JJBD |
(S)-N-Boc-α-Allylglycine Dicyclohexylamine salt |
(S)-N-Boc-α-AllylGly Dicyclohexylamine salt |
|
≧98.0％ |
143979-15-1 |
C10H17NO4・C12H23N |
396.5 |
|
FN-JJBE |
(S)-α-Allylglycine ethyl ester p-Toluenesulfonate |
(S)-α-AllylGly-OEt p-Toluenesulfonate |
|
≧97.0％ |
1231709-21-9 |
C7H13NO2・C7H8O3S |
315.39 |
|
FN-JJBF |
(R)-α-Allylglycine ethyl ester p-Toluenesulfonate |
(R)-α-AllylGly-OEt p-Toluenesulfonate |
|
≧97.0％ |
1432914-51-6 |
C7H13NO2・C7H8O3S |
315.39 |
◆α-炔基甘氨酸（α-AlkynylGly）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJBG |
(S)-α-Propargylglycine |
(S)-α-PropargylGyl |
|
≧98.0％ |
23235-01-0 |
C5H7NO2 |
113.12 |
|
FN-JJBH |
(R)-α-Propargylglycine |
(R)-α-PropargylGly |
|
≧98.0％ |
23235-03-2 |
C5H7NO2 |
113.12 |
◆α，α-二烯基甘氨酸（α, α-DialkenylGly）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJBI |
N-Fmoc-α,α-Bis(4-pentenyl)glycine |
N-Fmoc-α,α-Bis(4-pentenyl)Gly |
|
≧98.0％ |
1068435-19-7 |
C27H31NO4 |
433.55 |
◆丙氨酸（Ala）衍生物 （Alanine (Ala) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJCJ |
(S)-α-Ethylalanine・H2O |
(S)-α-EtAla・H2O |
|
≧98.0％ |
595-40-4 |
C5H11NO2・H2O |
135.16 |
|
FN-JJCA |
(R)-α-Ethylalanine・H2O |
(R)-α-EtAla・H2O |
|
≧98.0％ |
3059-97-0 |
C5H11NO2・H2O |
135.16 |
|
FN-JJCB |
(S)-N-Boc-α-Ethylalanine |
(S)-N-Boc-α-EtAla |
|
≧98.0％ |
151171-11-8 |
C10H19NO4 |
217.27 |
|
FN-JJCC |
(R)-N-Boc-α-Ethylalanine |
(R)-N-Boc-α-EtlAla |
|
≧98.0％ |
123254-58-0 |
C10H19NO4 |
217.27 |
|
FN-JJCD |
(S)-N-Fmoc-α-Ethylalanine |
(S)-N-Fmoc-α-EtAla |
|
≧98.0％ |
857478-30-9 |
C20H21NO4 |
339.39 |
|
FN-JJCE |
(R)-N-Fmoc-α-Ethylalanine |
(R)-N-Fmoc-α-EtAla |
|
≧98.0％ |
1231709-22-0 |
C20H21NO4 |
339.39 |
◆天冬氨酸（Asp）衍生物 （Aspartic acid (Asp) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJDJ |
(S)-α-Methylaspartic acid |
(S)-α-MeAsp |
|
≧98.0％ |
3227-17-6 |
C5H9NO4 |
147.13 |
|
FN-JJDA |
(R)-α-Methylaspartic acid |
(R)-α-MeAsp |
|
≧98.0％ |
14603-76-0 |
C5H9NO4 |
147.13 |
|
FN-JJDB |
(S)-α-Methylaspartic acid-4-tert-butyl ester |
(S)-α-MeAsp-4-OtBu |
|
≧98.0％ |
1217977-71-3 |
C9H17NO4 |
203.24 |
|
FN-JJDC |
(R)-α-Methylaspartic acid-4-tert-butyl ester |
(R)-α-MeAsp -4-OtBu |
|
≧98.0％ |
1231709-25-3 |
C9H17NO4 |
203.24 |
|
FN-JJDD |
(S)-N-Fmoc-α-Methylaspartic acid-4-tert-butyl ester |
(S)-N-Fmoc-α-MeAsp-4-OtBu |
|
≧98.0％ |
1072845-47-6 |
C24H27NO6 |
425.48 |
|
FN-JJDE |
(R)-N-Fmoc-α-Methylaspartic acid-4-tert-butyl ester |
(R)-N-Fmoc-α-MeAsp-4-OtBu |
|
≧98.0％ |
1231709-26-4 |
C24H27NO6 |
425.48 |
◆天冬酰胺（Asn）衍生物 （Asparagine (Asn) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJDF |
(S)-N-Fmoc-α-Methylasparagine |
(S)-N-Fmoc-α-MeAsn |
|
≧98.0％ |
1403590-49-7 |
C20H20N2O5 |
368.39 |
|
FN-JJDG |
(R)-N-Fmoc-α-Methylasparagine |
(R)-N-Fmoc-α-MeAsn |
|
≧98.0％ |
1403590-50-0 |
C20H20N2O5 |
368.39 |
◆半胱氨酸（Cys）衍生物 （Cysteine (Cys) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJDH |
(R)-L-α-Methylcysteine・HCl |
(R)-L-α-MeCys・HCl |
|
≧98.0％ |
148766-37-4 |
C4H9NO2S・HCl |
171.65 |
|
FN-JJDI |
(S)-D-α-Methylcysteine・HCl |
(S)-D-α-MeCys・HCl |
|
≧98.0％ |
151062-55-4 |
C4H9NO2S・HCl |
171.65 |
|
FN-JACD |
(R)-L-N-Fmoc-S-Trt-α-Methylcysteine |
(R)-L-N-Fmoc-S-Trt-α-MeCys |
|
≧98.0％ |
725728-43-8 |
C38H33NO4S |
599.74 |
◆亮氨酸（Leu）衍生物 （Leucine (Leu) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJEE |
(S)-α-Methylleucine |
(S)-α-MeLeu |
|
≧98.0％ |
105743-53-1 |
C7H15NO2 |
145.2 |
|
FN-JJEF |
(R)-α-Methylleucine |
(R)-α-MeLeu |
|
≧98.0％ |
29589-03-5 |
C7H15NO2 |
145.2 |
◆赖氨酸（Lys）衍生物 （Lysine (Lys) derivative）
|
产品编号 |
描述 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJFA |
(S)-Nα-Fmoc-Nω-Boc-α-Methyllysine |
(S)-Nα-Fmoc-Nω-Boc-α-MeLys |
|
≧98.0％ |
1202003-49-3 |
C27H34N2O6 |
482.58 |
|
FN-JJFB |
(R)-Nα-Fmoc-Nω-Boc-α-Methyllysine |
(R)-Nα-Fmoc-Nω-Boc-α-MeLys |
|
≧98.0％ |
1315449-94-5 |
C27H34N2O6 |
482.58 |
|
FN-JJFC |
(S)-Nα-Fmoc-Nω-Alloc-α-Methyllysine |
(S)-Nα-Fmoc-Nω-Alloc-α-MeLys |
|
≧98.0％ |
1934266-47-3 |
C26H30N2O6 |
466.53 |
◆鸟氨酸（Orn）衍生物 （Ornithine (Orn) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJFE |
(S)-Nα-Fmoc-Nδ-Boc-α-Methylornithine |
– |
|
≧98.0％ |
1315449-95-6 |
C26H32N2O6 |
468.55 |
|
FN-JJFF |
(R)-Nα-Fmoc-Nδ-Boc-α-Methylornithine |
– |
|
≧98.0％ |
171860-40-5 |
C26H32N2O6 |
468.55 |
◆苯丙氨酸（Phe）衍生物 （Phenylalanin (Phe) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJFH |
(S)-α-Methylphenylalanine・H2O |
(S)-α-MePhe・H2O |
|
≧98.0％ |
23239-35-2 |
C10H13NO2・H2O |
197.23 |
|
FN-JJFI |
(R)-α-Methylphenylalanine・H2O |
(R)-α-MePhe・H2O |
|
≧98.0％ |
17350-84-4 |
C10H13NO2・H2O |
197.23 |
|
FN-JJGJ |
(S)-N-Fmoc-α-Methylphenylalanine・3/2H2O |
(S)-N-Fmoc-α-MePhe・3/2H2O |
|
≧98.0％ |
135944-05-7 |
C25H23NO4・3/2H2O |
428.48 |
|
FN-JJGA |
(R)-N-Fmoc-α-Methylphenylalanine・3/2H2O |
(R)-N-Fmoc-α-MePhe・3/2H2O |
|
≧98.0％ |
152436-04-9 |
C25H23NO4 ·3/2H2O |
428.48 |
|
FN-JJIB |
(S)-α-Methyl-3-fluorophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
130855-56-0 |
C10H12FNO2 |
197.21 |
|
FN-JJIC |
(R)-α-Methyl-3-fluorophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
1270184-80-9 |
C10H12FNO2 |
197.21 |
|
FN-JJID |
(S)-α-Methyl-4-fluorophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
130855-57-1 |
C10H12FNO2 |
197.21 |
|
FN-JJIE |
(R)-α-Methyl-4-fluorophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
422568-68-1 |
C10H12FNO2 |
197.21 |
|
FN-JJIF |
(S)-N-Fmoc-α-Methyl-2-fluorophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
1172127-44-4 |
C10H12FNO2 |
419.45 |
|
FN-JJIG |
(R)-N-Fmoc-α-Methyl-2-fluorophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
1315449-93-4 |
C25H22FNO4 |
419.45 |
|
FN-JJII |
(S)-N-Fmoc-α-Methyl-2,6-difluorophenylalanine （S）-N-Fmoc-α-甲基-2,6 -二氟苯基丙氨酸 |
– |
|
≧98.0％ |
1223105-51-8 |
C25H22FNO4 |
437.44 |
|
FN-JAJJ |
(R)-α-Methyl-4-trifluoromethylphenylalanine ethyl ester・HCl・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1315449-99-0 |
C13H16F3NO2·HCl・H2O |
329.75 |
|
FN-JAJA |
(S)-α-Methyl-4-trifluoromethoxyphenylalanine （S）-α-甲基-4-三氟甲氧基苯基丙氨酸 |
– |
|
≧98.0％ |
1269926-90-0 |
C11H12F3NO3 |
263.22 |
|
FN-JAJB |
(R)-α-Methyl-4-trifluoromethoxyphenylalanine （R）-α-甲基-4-三氟甲氧基苯基丙氨酸 |
– |
|
≧98.0％ |
1269835-58-6 |
C11H12F3NO3 |
263.22 |
|
FN-JAJC |
(S)-α-Methyl-2-bromophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1212180-27-2 |
C10H12BrNO2・H2O |
276.13 |
|
FN-JAJD |
(R)-α-Methyl-2-bromophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1212307-90-8 |
C10H12BrNO2・H2O |
276.13 |
|
FN-JAJE |
(S)-α-Methyl-3-bromophenylalanine・H2O- |
– |
|
≧98.0％ |
1212117-73-1 |
C10H12BrNO2・H2O |
276.13 |
|
FN-JAJF |
(R)-α-Methyl-3-bromophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1212321-90-8 |
C10H12BrNO2・H2O |
276.13 |
|
FN-JAJG |
(S)-α-Methyl-4-bromophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
747397-27-9 |
C10H12BrNO2・H2O |
276.13 |
|
FN-JAJH |
(R)-α-Methyl-4-bromophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
752971-41-8 |
C10H12BrNO2・H2O |
276.13 |
|
FN-JAJI |
(S)-α-Methyl-3-iodophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
457653-01-9 |
C10H12INO2・H2O |
323.13 |
|
FN-JAAJ |
(R)-α-Methyl-3-iodophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
457652-83-4 |
C10H12INO2・H2O |
323.13 |
|
FN-JAAA |
(S)-α-Methyl-4-iodophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
1215092-16-2 |
C10H12INO2・H2O |
323.13 |
|
FN-JAAB |
(R)-α-Methyl-4-iodophenylalanine |
– |
|
≧98.0％ |
1241679-14-0 |
C10H12INO2・H2O |
323.13 |
|
FN-JAAI |
(S)-α-Methyl-2-nitrophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1241680-71-6 |
C10H12N2O4・H2O |
242.23 |
|
FN-JABJ |
(R)-α-Methyl-2-nitrophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1241680-73-8 |
C10H12N2O4・H2O |
242.23 |
|
FN-JABA |
(S)-α-Methyl-3-nitrophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1215092-14-0 |
C10H12N2O4・H2O |
242.23 |
|
FN-JABB |
(R)-α-Methyl-3-nitrophenylalanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1215092-13-9 |
C10H12N2O4・H2O |
242.23 |
|
FN-JAAG |
(S)-α-Methyl-β-(4-biphenyl)alanine・H2O |
– |
|
≧98.0％ |
1231709-24-2 |
C16H17NO2・H2O |
273.33 |
◆脯氨酸（Pro）衍生物 （Proline (Pro) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJGB |
(S)-N-Boc-α-Methylproline |
(S)-N-Boc-α-MePro |
|
≧98.0％ |
103336-06-7 |
C11H19NO4 |
229.28 |
|
FN-JJGC |
(R)-N-Boc-α-Methylproline |
(R)-N-Boc-α-MePro |
|
≧98.0％ |
166170-15-6 |
C11H19NO4 |
229.28 |
|
FN-JJGD |
(S)-N-Fmoc-α-Methylproline |
(S)-N-Fmoc-α-MePro |
|
≧98.0％ |
167275-47-0 |
C21H21NO4 |
351.4 |
|
FN-JJGE |
(R)-N-Fmoc-α-Methylproline |
(R)-N-Fmoc-α-MePro |
|
≧98.0％ |
1286768-33-9 |
C21H21NO4 |
351.4 |
◆丝氨酸（Ser）衍生物（Serine (Ser) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJGF |
(S)-N-Fmoc-O-tert-Butyl-α-Methylserine |
(S)-N-Fmoc-O–t-Bu-α-MeSer |
|
≧98.0％ |
914399-98-7 |
C23H27NO5 |
397.47 |
◆苏氨酸（Thr）衍生物 （Threonine(Thr) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJGG |
(2S,3R)-α-Methylthreonine |
(2S,3R)-α-MeThr |
|
≧98.0％ |
127126-06-1 |
C5H11NO3 |
113.15 |
◆色氨酸（Trp）衍生物 （Tryptophan (Trp) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJGH |
(S)-α-Methyltryptophan・1/2H2O |
(S)-α-MeTrp・1/2H2O |
|
≧98.0％ |
16709-25-4 |
C12H14N2O2・1/2H2O |
227.26 |
|
FN-JJGI |
(R)-α-Methyltryptophan・1/2H2O |
(R)-α-MeTrp・1/2H2O |
|
≧98.0％ |
56452-52-9 |
C12H14N2O2・1/2H2O |
227.26 |
◆酪氨酸（Tyr）衍生物 （Tyrosine (Tyr) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJHB |
(R)-α-Methyl-4-hydroxyphenylalanine |
(R)-α-Methyltyrosine, |
|
≧98.0％ |
672-86-6 |
C10H13NO3 |
195.22 |
|
FN-JJHF |
(R)-3-Hydroxyphenylalanine |
(R)-m-Tyrosine, |
|
≧98.0％ |
32140-49-1 |
C9H11NO3 |
181.19 |
|
FN-JJHG |
(R)-3-Methoxyphenylalanine・H2O |
(R)-O-Methyl-m-tyrosine・H2O, (R)-OMe-m-Tyr・H2O （R）-甲氧基间酪氨酸一水合物 |
|
≧98.0％ |
145306-65-6 |
C10H13NO3・H2O |
213.23 |
◆缬氨酸（Val）衍生物 （Valine (Val) derivative）
|
产品编号 |
产品名称 |
简称/别称 |
结构式 |
纯度 |
CAS. No. |
分子式 |
分子量 |
|
FN-JJHH |
(S)-α-Methylvaline |
(S)-α-MeVal |
|
≧98.0％ |
53940-83-3 |
C6H13NO2 |
131.18 |
|
FN-JJHI |
(R)-α-Methylvaline |
(R)-α-MeVal |
|
≧98.0％ |
53940-82-2 |
C6H13NO2 |
131.18 |
|
FN-JJIJ |
(S)-N-Fmoc-α-Methylvaline |
(S)-N-Fmoc-α-MeVal |
|
≧98.0％ |
169566-81-8 |
C21H23NO4 |
353.42 |
|
FN-JJIA |
(R)-N-Fmoc-α-Methylvaline |
(R)-N-Fmoc-α-MeVal |
|
≧98.0％ |
616867-28-8 |
C21H23NO4 |
353.42 |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
重组双碱性氨基酸内肽酶（RKex2）
重组双碱性氨基酸内肽酶（RKex2）
◆概述
Kex-2（E.C.3.4.21.61）属于枯草杆菌蛋白酶家族，为酵母自身编码的一种前体加工酶，Ca2+ 依赖型丝氨酸蛋白酶，能够专一性地识别和切割Lys-Arg，Arg-Arg，Pro-Arg等双碱性氨基酸※ 的羧基端肽键。不同于Trypsin，该酶不能识别和切割单一碱性氨基酸（Arg或Lys）的羧基端肽键。常在酵母表达外源蛋白前体中加入Kex-2识别位点，便于外源蛋白前体加工。该酶最适pH为9.0，在偏酸性环境中稳定，稳定pH为5.0-6.0。最适温度为37 ℃，酶活性不受常规丝氨酸蛋白酶抑制剂（如PMSF、TPCK等）抑制。
※碱性氨基酸：水解生成的氢氧根负离子多于氢正离子的氨基酸，其特点是侧链常含有可质子化的碱性化学基团。包括以下三种：
|
中文名 |
英文名 |
缩写 |
符号 |
等电点 |
|
精氨酸 |
Arginine |
Arg |
R |
10.76 |
|
赖氨酸 |
Lysine |
Lys |
K |
9.74 |
|
组氨酸 |
Histidine |
His |
H |
7.59 |
◆优势
● 单批次产量大，批间差小
● 高纯度，高比活性
● 无外源性病毒污染，无动物源生产原料
◆纯度
SDS-PAGE显示纯度>90%。
◆使用方法
溶解缓冲：20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca2+，pH 5.0~5.5。
酶切体系：50~100 mmol/L Tris，2 mmol/L Ca2+，pH 7.0~9.0；或HEPES，5 mmol/L Ca2+，pH 7.0~9.0；
推荐使用量：蛋白酶：融合蛋白质量比1：20~1：1000
◆保存条件
储存稳定性：冻干粉存于-15 ℃以下，24个月稳定；20 mmol/L NaAc-HAc，2 mmol/L Ca2+，
储存稳定性：pH 5.0~5.5溶解后分装储存于-15 ℃以下，避免反复冻融；溶解后2~8 ℃保存建议不超过24 h。
运输稳定性：冰袋保温运输，活性稳定。
◆应用实例
RKex-2特异性酶切合成短肽
合成多肽序列YGKRLWK,理论酶切位点酶切产物YGKR及LWK，蛋白酶：合成多肽质量比1：1000，37 ℃酶切反应10 min，LC-MS验证酶切反应特异性。
|
Peak# |
R.T. |
M.W. |
Sequence |
|
Peak 1 |
2.79 min |
522.6 |
YGKR |
|
Peak 2 |
6.26 min |
445.56 |
LWK |
|
Peak 3 |
6.94 min |
950.15 |
YGKRLWK |
◆产品信息
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
比活 |
|
RKex20202 |
RKex2 |
10 mg |
10 U/mg |
|
RKex20204 |
RKex2 |
10 μg |
10 U/mg |
◆相关产品
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
储存温度 |
检测范围 |
|
MDRK0201 |
RKex2 ELISA Kit |
96 孔 |
2～8 ℃ |
1.0～4000 ng/mL |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
D-MEM（高葡萄糖）（含有丙酮酸钠，不含氨基酸）
D-MEM（高葡萄糖）（含有丙酮酸钠，不含氨基酸）
用于研究细胞自噬
细胞自噬主要由营养饥饿引起。本产品是不含氨基酸的低营养培养基。将培养基换成本产品，能够使细胞处于饥饿状态。除了氨基酸，其他成分与 D-MEM 相同，比使用 HBSS、EBSS、D-PBS 效果更好，能够促进细胞自噬作用。
● 无菌测试
● pH
● 渗透压
● 内毒素
● 支原体测试
培养生成 GFP-LC3 的小鼠成纤维细胞时，将培养基换成本产品，放置 1.5 小时后，可以通过 GFP-LC3 的标识看到大量的细胞发生了自噬。
（资料提供：东京大学医学系研究科分子生物学领域 本田 郁子 老师、水島 昇 老师）
★Anti Rat LC3, Rabbit（010-22841）★
LC3 由细胞质合成后，立即被切断Ｃ末端，转化成 LC3-Ⅰ。随后，依次在 E1 酶（Atg7）、E2 酶（Atg3）的作用下，与磷脂结合转化成 LC3-Ⅱ。LC3-Ⅱ 与自噬体膜结合。LC3 作为检测自噬的marker之一被广泛使用。
<链接>
★Anti Human Atg7, Rabbit（013-22831）★
此为细胞自噬过程中形成自噬体所必须的因子之一。<链接>
★Anti SQSTM1/A170/p62, Rabbit（018-22141）★
研究表明该物质与有关细胞自噬的因子结合，它是促进泛素/蛋白酶体分解成自噬蛋白质的蛋白质。<链接>
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 048-33575 | D-MEM（High Glucose）with Sodium Pyruvate, | 500ml | 用于培养细胞 | － |
用于质谱分析 – SILAC 氨基酸
用于质谱分析 – SILAC 氨基酸
生物化学用
SILAC（Stable Isotope Labeling using Amino Acids in Cell Culture）法能在复杂的蛋白质样品中进行鉴定蛋白质及定量比较其表达量。细胞培养时，标记有稳定同位素的氨基酸经代谢导入蛋白质中，制备带有标记的样品，通过质谱分析仪能鉴定蛋白质以及定量分析。
现推出四个带13C和15N的标记的碱性氨基酸。
◆规格例子
|
品目 |
氨基酸 |
L-精氨酸盐酸盐 |
L-赖氨酸盐酸盐 |
||
|
标记酸 |
13C6, 15N4 |
13C6 |
13C6, 15N2 |
13C6 |
|
|
测试项目 |
规格 |
||||
|
外观 |
白色-浅黄色、结晶性粉末-粉末 |
白色-浅黄色、结晶-粉末或块状 |
|||
|
13C率 |
99 atom%以上 |
98 atom%以上 |
|||
|
15N率 |
99 atom%以上 |
– |
99 atom%以上 |
– |
|
|
薄层色谱分析测试 |
测试符合（纯度相当于99%或更高） |
||||
◆液体培养基
采用 SILAC 法，不含 L-精氨酸、L-赖氨酸的液体培养基。
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
010-24041 |
L-Arginine-13C6,15N4 Hydrochloride L-精氨酸-13C6，15N4盐酸盐 |
生物化学 |
50 mg |
|
017-24051 |
L-Arginine-13C6 Hydrochloride L-精氨酸-13C6盐酸盐 |
生物化学 |
50 mg |
|
123-06081 |
L-Lysine-13C6,15N2 Monohydrochloride L-赖氨酸-13C6，15N2盐酸盐 |
生物化学 |
50 mg |
|
120-06091 |
L-Lysine-13C6 Monohydrochloride L-赖氨酸-13C6盐酸盐 |
生物化学 |
50 mg |
◆相关产品
MS 染色试剂盒
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
299-58901 |
Silver Stain MS Kit 银染质谱试剂盒 |
用于电泳 |
20次 |
|
293-57701 |
Negative Gel Stain MS Kit 负性胶染色质谱试剂盒 |
用于电泳 |
20次 |
凝胶内消化酶
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
125-05061 |
Lysyl Endopeptidase, MS Grade 赖氨酰肽链内切酶，MS级 |
蛋白质组研究 |
20 µg×5 |
|
202-15951 |
Trypsin, from Porcine Pancreas, MS Grade 猪胰腺胰蛋白酶质谱级别 |
蛋白质组研究 |
20 µg×5 |
高纯度基质
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
037-19261 |
α-Cyano-4-hydroxycinnamic Acid (CHCA) α-氰基-4-羟基肉桂酸 |
蛋白质组研究 |
50 mg×5 |
|
192-13361 |
Sinapic Acid（SA） 芥子酸 |
蛋白质组研究 |
50 mg×5 |
|
044-29101 |
2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB) |
蛋白质组研究 |
50 mg×5 |
MALDI-MS校准物
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
019-22931 |
AngiotensinⅡ (Human) MALDI-MS Calibrant 人血管紧张素II（人）电离质谱校准物 |
蛋白质组研究 |
2 nmol×1 |
|
015-22933 |
2 nmol×5 |
||
|
017-22971 |
[D-Arg1, D-Pro2, D-Trp7,9, Leu11]-Substance P |
2 nmol×1 |
|
|
013-22973 |
2 nmol×5 |
||
|
016-22941 |
Apamin 蜂毒明肽<电离质谱校准物> |
2 nmol×1 |
|
|
012-22943 |
2 nmol×5 |
||
|
160-24251 |
PAMP (Rat) PAMP（兔）电离质谱校准物 |
2 nmol×1 |
|
|
166-24253 |
2 nmol×5 |
||
|
014-22981 |
ACTH (Human, 1-24) 肾上腺皮质激素（人, 1-24）<电离质谱校准物> |
2 nmol×1 |
|
|
010-22983 |
2 nmol×5 |
||
|
013-22951 |
Adrenomedullin (Human, 22-52) 肾上腺髓质素（人,22-52）<电离质谱校准物> |
2 nmol×1 |
|
|
019-22953 |
2 nmol×5 |
||
|
090-05881 |
Insulin (Human) 人胰岛素（电离质谱校准物） |
2 nmol×1 |
|
|
096-05883 |
2 nmol×5 |
