未分化人ES/iPS细胞检测试剂
仅需添加培养液便可检出人ES/iPS细胞！
荧光标记 rBC2LCN（AiLecS1）
◆rBC2LCN（AiLecS1）
rBC2LCN（AiLecS1）是在伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cenocepacia）来源凝集素 BC2L-C 的 N末端域表达的重组凝集素。
由于 rBC2LCN 对存在于人ES/iPS细胞表面的足糖萼蛋白（Podocalyxin）上的粘蛋白样O-型糖链的H型3（Fucα1-2Galβ1-3GalNAc）具有高亲和力，因此可用作人 ES/iPS 细胞的未分化标志物。
本产品是荧光染色标记，能直接添加到人 ES/iPS 细胞的培养液中，实现未分化活细胞分析。 适用于未分化细胞检测用标记。可用于细胞染色，流式细胞仪。另外，使用本品持续培养数日已确认细胞无毒性。
我们供应绿色荧光标记（FITC），黄色荧光标记（Cy3），红色荧光标记（Cy5）的三种类型的系列商品。
◆特点
● 添加到培养基即可进行染色
● 无需固定细胞，活细胞也可直接进行明显染色
● 细胞毒性低，染色后也可培养
● 识别 Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-3, SSEA-4 细胞表面存在的糖链
● 可用于细胞染色和流式细胞仪
◆产品概述
● 已进行无菌试验（0.1 μm 过滤器进行灭菌）
● PBS(-) 溶液
● 使用时稀释比
Live Cell Imaging 1：100～1,000
Flow Cytometry 1：100～1,000
● 激发波长/发射波长
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Excitation
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Emission
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rBC2LCN-FITC
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495 nm
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520 nm
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rBC2LCN-547
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551 nm
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565 nm
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rBC2LCN-635
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634 nm
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654 nm
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◆使用方法
细胞染色
活细胞染色（Live Cell Imaging）
1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞
2. 每 1 mL 的培养基添加 1~10 μL 的荧光标记 rBC2LCN
3. 37℃，5％CO2 孵育 30 分钟。
4. 更换新的培养基或者 HBSS(+)。
5. 利用荧光显微镜观察
固定细胞染色
1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞
2. 除去培养基，用 HBSS(+) 洗净。
3. 添加 4%多聚甲醛（PFA）溶液，室温静置 10～20 分钟。
4. 除去 PFA 后，用 D-PBS(-) 洗净三次。
5. 添加 D-PBS(-)。
6. 每 1 mL 的 D-PBS(-) 添加 1～10 μL 荧光标记 rBC2LCN。
7. 37℃，5% CO2 孵育 30 分钟。
8. 更换 D-PBS(-)。
9. 利用荧光显微镜观察。
流式细胞仪
1. 准备培养中的人 ES/iPS 细胞。
2. 使用细胞分散液，分散成单细胞。
3. 将细胞分散液移至管内，1,000 rpm 离心 3 分钟。
4. 除去上清液，用 FCM Buffer* 重悬细胞，离心后，舍弃上清液。
* FCM Buffer： D-PBS(-)和HBSS(-)含有 10 mmol/L EDTA，1% BSA
5. 用 FCM Buffer 重悬出 5×106 cells/mL 的细胞悬浮液
6. 每 1 mL 细胞悬浮液，添加 1～10 μL 的荧光标记 rBC2LCN。
7. 室温，避光静置30分钟。
8. 1,000 rpm 离心三分钟，除去上清液。
9. 用 FCM Buffer 重悬细胞，离心后，除去上清液。
10. 适量的 FCM Buffer 再悬浮细胞。
11. 进行流式细胞术。
使用注意
1. rBC2LCN 染色可以维持 2~3天。
2. 使用含有血清的培养基可能使信号背景变高
3. 根据流式细胞仪进行细胞分选时，当细胞分散或 FCM 缓冲液的终浓度到达 10 μmol/L 时，请添加 Y-27632。
◆人iPS细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）
● 用 rBC2LCN-FITC， rBC2LCN-635 以及 Hoechst33342 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。（无细胞固定）
（稀释倍数 1：1,000）
● 用 rBC2LCN-FITC、Tra-1-60、Tra-1-81、SSEA-4 对人 iPS 细胞 201B7 株进行染色处理。
2小时后确认染色图像。（未固定细胞）
（稀释倍数 1：100）
★ 与 Tra-1-60、Tra-1-81 相比较，rBC2LCN 的活细胞染色度更强。
★ 即使交换培养基，rBC2LCN 染色第二天后染色效果依然明显。
◆人ES细胞的活细胞染色（Live Cell Imaging）
使用 rBC2LCN-FITC 对人 ES 细胞 WA01 株进行染色（未细胞固定）。细胞的一部分无法维持未分化状态而进行分化。如果使用 rBC2LCN-FITC 对活细胞进行染色，以维持未分化状态部分已染色，而已分化部分未染色来进行区分。
＜数据提供 国家研究与发展公司先进工业科学和技术研究院 新药开发的基础研究部门恭子小沼老师，伊藤弦老师＞
◆人 iPS 细胞固定后染色
将人 iPS 细胞 201B7 株用多聚甲醛固定后，使用 rBC2LCN 和 DAPI 进行细胞染色。
对于人 iPS 细胞毒性评估
向人 iPS 细胞 201B7 株的培养液中分别添加其 1/1,000、1/100、1/50 量的 rBC2LCN-FITC，持续培养。其结果是，不存在 rBC2LCN-FITC 浓度对毒性影响，不同浓度的细胞增殖程度相同程度。
〔细胞株〕
人iPS细胞 201B7株
〔培养基组成〕
StemSure® hPSC培养基Δ+35 ng/mL bFGF
〔涂层〕
Matrigel® hESC-Qualified Matrix
〔细胞接种数目〕
4×104 cells/well（12孔板）
使用Flow Cytometry进行人iPS细胞分离
使用rBC2LCN-FITC及rBC2LCN-6547、rBC2LCN-635对人iPS细胞201B7细胞株和人正常二倍体成纤维细胞染色，进行流式细胞术。
实验结果：未分化的人iPS细胞与分化的人二倍体成纤维细胞成功分离。
◆产品列表
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产品编号
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产品名称
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等级
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容 量
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180-02991
186-02993
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人iPS未分化标记染料rBC2LCN-FITC (AiLecS1-FITC)
rBC2LCN-FITC 【AiLecS1-FITC】
Ex. 495nm, Em. 520nm
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用于细胞染色
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100 μL
100 μL×5
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186-03211
182-03213
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人iPS未分化标记染料rBC2LCN-547 (AiLecS1-547)
rBC2LCN-547 【AiLecS1-547】
Ex. 551nm, Em. 565nm
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用于细胞染色
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100 μL
100 μL×5
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185-03161
181-03163
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人iPS未分化标记染料rBC2LCN-635 (AiLecS1-635)
rBC2LCN-635 【AiLecS1-635】
Ex. 634nm, Em. 654nm
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用于细胞染色
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100 μL
100 μL×5
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