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关联产品
实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器
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特点:
● 染料不会从死细胞中泄漏
● 储备溶液可以冷冻保存6个月
● 有两种不同的颜色可供选择
产品概述
该试剂可与细胞表面和细胞内的蛋白质共价结合,对膜受损的死亡细胞进行强染色。此外,染色剂在固定和渗透细胞后不会渗漏。染色后,活细胞和死细胞的荧光强度差异显著,通过流式细胞仪分析,死细胞很容易区分和排除。
技术信息
区分和排除死细胞对使用流式细胞仪 (FCM) 获得准确数据至关重要,近年来,这一过程已成为发表论文时越来越常见的要求。碘化丙啶(PI)可用于区分死细胞,但细胞膜的固定或渗透会导致 PI 从细胞中渗出,从而难以获得准确的数据。这种试剂具有与细胞表面和细胞内部蛋白质共价结合的特性,因此即使细胞被固定或渗透后,染料也不会渗出。此外,染色后活细胞和死细胞的荧光强度差异很大,因此 FCM 可以轻松区分死细胞并将其排除在分析之外。
DMSO 储存溶液的保质期
本产品的 DMSO 储备溶液可冷冻保存六个月。
与现有 PI 方法的比较
实验案例: 诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测
MOLT-4 细胞在含有 Ionomycin(500 ng/ml)和 PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate,50 ng/ml)的 RPMI 培养基中刺激 48 小时。死细胞用本品染色,PD-1 表达用免疫染色法检测(一抗:抗 PD-1 小鼠抗体,二抗:抗小鼠抗体-Alexa488)。结果表明,死细胞和活细胞可以清楚地区分开来,而且在只选取活细胞的情况下,受刺激细胞组的 PD-1 表达升高。
实验步骤
试验结果
常见问题Q&A
Q1:能否测量贴壁细胞? |
A1:可对贴壁细胞进行检测。用胰蛋白酶消化细胞或用刮板收集细胞,以制备细胞悬液。 |
Q2:胰蛋白酶会干扰测量吗? |
A2:通过以下实验证实胰蛋白酶对 HeLa 细胞的影响。我们将胰蛋白酶处理与使用刮板进行了比较,确认两种情况下的分析结果没有区别。 |
Q3:是否可以用显微镜进行观察? |
A3:我们已经证实,可以对染色后的 HeLa 细胞进行成像。用这种染料染色的 HeLa 细胞在固定和膜渗透后的成像结果如下。 |
Q4:染色是否会产生细胞毒性? |
A4:使用CCK-8 来评估染色对 HeLa 细胞的细胞毒性,结果显示几乎没有细胞毒性。 |
Q5:染色后能否保存固定的细胞? |
A5:不建议保存。由于荧光强度在固定后会随着时间的推移而降低,因此染色后的样本应在当天进行检测。 |
Q6:DMSO stock solution的稳定性如何? |
A6:该产品在 -20°C 下冷冻保存 6 个月是稳定的。本品受潮后会降解;如果考虑长期储存超过 6 个月,请使用未开封且含水量低的DMSO。
此外,如有必要,可将产品分成小份储存 |
Q7:如何对细胞进行栅极化? |
A7:以下是使用 Becton Dickinson (BD) 流式细胞仪的方法。
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蛋白抗体标记
品名货号用途
Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK03 | 生物素标记-氨基(50-200ug/sample) |
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒 | LK55 | 生物素标记-氨基(1 mg/sample) |
Biotin Labeling Kit – SH试剂盒 | LK10 | 生物素标记-巯基(50-200ug/sample) |
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒 | LK37 | 生物素标记-氨基(10 ug/sample) |
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂 | BK01 | 生物素标记-氨基(1-5 mg/sample) |
Biotin-PE-maleimide试剂 | B592 | 生物素 |
Biotin-SS-Sulfo-Osu试剂 | B572 | 生物素 |
Biotin-AC5-Osu试剂 | B305 | 生物素 |
Biotin-(AC5)2-Osu试剂 | B306 | 生物素 |
Biotin-Osu试剂 | B304 | 生物素 |
Biotin-PEAC5-maleimide试剂 | B299 | 生物素 |
ARP(Aldehyde Reactive Probe)试剂 | A305 | 生物素 |
CLAMP F405-Signal Boosting | C554 | 检测细胞表面抗原(免疫荧光法) |
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK01 | FITC(488激发)标记-氨基(50-200ug/sample) |
HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK14 | 荧光素(555激发)标记-氨基(50-200ug/sample) |
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK15 | 荧光素(647激发)标记-氨基(50-200ug/sample) |
Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit试剂盒 | LK32 | FITC(488激发)标记-氨基(10 ug/sample) |
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒 | LK35 | 荧光素(555激发)标记-氨基(10 ug/sample) |
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit试剂盒 | LK36 | 荧光素(647激发)标记-氨基(10 ug/sample) |
FITC-I试剂 | F007 | 荧光素FITC |
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK11 | 辣根过氧化物酶(HRP)标记-氨基(50-200ug/sample) |
Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒 | LK09 | 辣根过氧化物酶(HRP)标记-巯基(50-200ug/sample) |
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒 | LK51 | 辣根过氧化物酶(HRP)标记-氨基(1 mg/sample) |
Ab-10 Rapid Peroxidase Labeling Kit试剂盒 | LK33 | 辣根过氧化物酶(HRP)标记-氨基(10 ug/sample) |
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK12 | 碱性磷酸酶标记(ALP)-氨基(50-200ug/sample) |
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒 | LK13 | 碱性磷酸酶标记(ALP)-巯基(50-200ug/sample) |
Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂 | M030 | 螯合标记 |
Isothiocyanobenzyl-NTA试剂 | I279 | 蛋白抗体标记 |
FeBABE试剂 | F279 | 蛋白抗体标记 |
AB-NTA free acid试剂 | A459 | 螯合标记 |
Maleimido-C3-NTA试剂 | M035 | N-[5-(3′-马来酰亚胺丙烷基氨基)-1-戊基羧基]亚氨基二乙酸, 二钠盐, 一水合物 |
DTPA anhydride试剂 | D033 | 螯合标记 |
Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK21 | 藻蓝蛋白(APC)标记-氨基(50-200ug/sample) |
Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒 | LK24 | 藻蓝蛋白(APC)标记-巯基(50-200ug/sample) |
R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK23 | 藻红蛋白(PE)标记-氨基(50-200ug/sample) |
R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒 | LK26 | 藻红蛋白(PE)标记-巯基(50-200ug/sample) |
Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit试剂盒 | LK34 | R-藻红蛋白(PE)抗体标记-氨基(10 ug/sample) |
ICG Labeling Kit – NH2试剂盒 | LK31 | ICG 标记氨基(50-200ug/sample) |
Sulfo-AC5-SPDP试剂 | S359 | IgG纯化分离 |
DTSSP试剂 | D630 | 交联剂 |
BS3试剂 | B574 | 交联剂 |
DSP试剂 | D629 | 交联剂 |
EMCS试剂 | E018 | 交联剂 |
GMBS试剂 | G005 | 交联剂 |
SPDP试剂 | S291 | 交联剂 |
Sulfo-SMCC试剂 | S330 | 交联剂 |
抗体标记试剂盒可满足各种实验需求
1、我想对蛋白质进行定量
ELISA法 | FCM | 蛋白质印迹 |
2、我想看看蛋白质在哪里表达
影像学观察
3、该试剂盒可以很容易地进行蛋白质标记
4、客户对抗体标记试剂盒的反馈
5、操作方法非常简单
6、可与-NH2和-SH标记方法兼容
生物素标记试剂盒
生物素标记试剂盒原理
适用人群
影像实验例
使用的试剂盒:Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒
FCM实验示例
使用的试剂盒:Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒
竞争抑制
用生物素标记试剂盒-NH2对抗X抗体进行生物素标记,然后使用链霉亲和素-APC通过流式细胞术进行分析。
抗原未标记的抗×抗体被抗体(A)封闭时,未观察到由于抗体的竞争性抑制而引起的生物素化抗x抗体的反应,仅反应了生物素化抗x抗体(B)的阳性部分。即使使用自制的标记抗体,也可以以很少的非特异性反应进行充分的检测反应。
(数据由北海道大学遗传医学研究所大仓黑木章博士,今茂茂重博士提供)
ELISA实验实例
使用的试剂盒:Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒 | 使用的试剂盒:Biotin Labeling Kit – SH试剂盒 |
产品列表
生物素 | 样品数量/类型 | 标记对象 | 产品名称 | 分析方法 |
生物素 | 10μg抗体 | -NH2 | Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit | |
50-200μg抗体/蛋白质 | -NH2 | Biotin Labeling Kit -NH2 | ||
-SH | Biotin Labeling Kit -SH | |||
1mg抗体 | -NH2 | Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg) | ||
1-5 mg抗体/蛋白质 | -NH2 | Biotinylation Kit (Sulfo-OSu) |
荧光染料/荧光蛋白标记试剂盒
生物素标记试剂盒原理
适用人群
使用的试剂盒:Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit, Ab-10 Rapid HiLyte Fluor™ 555 Labeling Kit
使用的试剂盒:ICG Labeling Kit – NH2试剂盒
竞争抑制
用生物素标记试剂盒-NH2对抗X抗体进行生物素标记,然后使用链霉亲和素-APC通过流式细胞仪进行分析。
FCM实验示例
使用的试剂盒:Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit
使用Ab-10快速荧光素标记试剂盒用抗CD44抗体(10μg)标记后,对HL60细胞进行免疫染色。
产品列表
荧光染料 | 样品数量/类型 | 标记对象 | 产品名称 | 分析方法 |
荧光素 | 10μg抗体 | -NH2 | Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit | |
50-200μg抗体/蛋白质 | -NH2 | Fluorescein Labeling Kit -NH2 | ||
HiLyte Fluor™ | 10μg抗体 | -NH2 | Ab-10 Rapid HiLyte Fluor™ 555 / 647 Labeling Kit -NH2 | |
50-200μg抗体/蛋白质 | -NH2 | HiLyte Fluor™ 555 / 647 Labeling Kit -NH2 |
||
ICG | 50-200μg抗体/蛋白质 | -NH2 | ICG Labeling Kit-NH2 |
荧光蛋白 | 样品数量/类型 | 标记对象 | 产品名称 | 分析方法 |
R-藻红蛋白 | 10μg抗体 | -NH2 | Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit | |
50-200μg抗体/蛋白质 | -NH2 | R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH2 | ||
-SH | R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH | |||
异花青素 | 50-200μg抗体/蛋白质 | -NH2 | Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 | |
-SH | Allophycocyanin Labeling Kit-SH |
酶标试剂盒
适用人群
ELISA实验实例
蛋白质印迹实验例
产品列表
rBC2LCN 人ES/iPS细胞 未分化标记
rBC2LCN 人ES/iPS细胞 未分化标记
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AcroleinRED
细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂
细胞水平氧化应激标记物丙烯醛的检测试剂
AcroleinRED
本试剂能与剧毒的不饱和醛——丙烯醛进行特异性反应,并通过红色荧光使其可视化。它不和其他不饱和醛或脂质代谢物等进行反应,因此可以从活细胞中检测出内源性丙烯醛或由外部刺激而过量产生的丙烯醛,并且可进行相对定量。
※本产品基于理化学研究所开拓研究本部田中生体机能合成化学实验室的研究成果商品化而成。
※ 本产品仅供研究用。请勿用于研究以外的其他用途。
◆丙烯醛是什么?
丙烯醛(Acrolein;2-propenal)是具有最简单结构的α,β不饱和醛。因其化学活性高,近年来作为氧化应激标记备受瞩目。丙烯醛的产生源十分广泛,具体可分为环境因素和生理因素。已知的环境因素有:烹饪食品时可能产生丙烯醛(特别是油炸肉或鱼,烘烤或烧焦时等等),以及饮酒、香烟中的烟雾、排气导致丙烯醛的生成(燃烧有机物)等。另外,在生理因素方面,有报道称丙烯醛在生物体内经常作为代谢副产物被合成,如在脂质过氧化反应,苏氨酸和蛋氨酸的酶依赖性代谢反应,多胺氧化反应以及由于细胞暴露而产生的氧化应激反应。
由于丙烯醛的化学反应活性非常高,它能与生物体内各种亲核基团结合(蛋白质、核酸和脂质等),从而破坏其功能,因此它作为一种具有强毒性的氧化应激标记物开始为人们认知。近年研究表明,丙烯醛的毒性高于最有名的氧化应激标记物,活性氧(Reactive Oxidative species;ROS)。它不仅在基础生物学,在制药、环境科学、食品产业、健康产业等广泛地生命科学领域中也备受瞩目。然而,由于丙烯醛结构简单且反应活性高,导致其检测困难且难以对它进行详细分析。
丙烯醛的结构式
■ 传统的丙烯醛检测方式
在传统法中,想要检测丙烯醛十分困难,通常会利用丙烯醛的α,β-不饱和醛结构的化学反应进行检测。以下列举两种具有代表性的方法。
1)检测FDP
丙烯醛能与生物体内蛋白的胺缓慢反应,生成3-甲酰基-3,4-脱氢哌啶(FDP)。通过使用能识别FDP的抗体,间接检测并定量丙烯醛的方法得到广泛应用。然而,有研究人员提出了该方法的缺点:①毕竟FDP只是众多丙烯醛反应物中的一种,凭借抗FDP抗体对丙烯醛的评价并不充分;②由于 FDP的生成十分缓慢,无法在高灵敏度下观察丙烯醛的生成。另外,由于使用抗体,因此不适用于活细胞实验(见上图方法一)。
2)利用HPLC检测
通过使用3-氨基丙醇与丙烯醛发生选择性的荧光反应,然后使用HPLC荧光分析对具有荧光性的生成物7-羟基喹啉进行定量。但是由于丙烯醛的高活性和挥发性,无法轻易将其分离,生成物的荧光灵敏度低、通量低,且无法避免细胞破裂,无法检测活细胞的丙烯醛含量(见上图方法二)。
◆AcroleinRED的原理
AcroleinRED是利用了理化学研究所田中克典主任研究员等人所发现的苯基叠氮化合物与丙烯醛发生特异性环化反应时所用到的试剂。
■ 苯基叠氮化合物丙烯醛的特异性反应
苯基叠氮化合物与丙烯醛特异性地且迅速地发生反应,生成环状产物4-甲酰基1,2,3-三唑啉。4-甲酰基1,2,3-三唑啉能与附近的生物分子非特异性结合并形成共价键。
■ 利用AcroleinRED检测丙烯醛的原理
利用AcroleinRED检测丙烯醛的原理可以分为细胞内外两条途径。
①检测细胞内丙烯醛
AcroleinRED拥有膜通透性,能够穿透细胞膜,在细胞内与丙烯醛反应并形成4-甲酰基1,2,3-三唑啉。
②检测释放到细胞外的丙烯醛
细胞膜脂质过氧化反应所产生的丙烯醛被释放到细胞外。丙烯醛与细胞外的AcroleinRED迅速反应,反应生成物4-甲酰基1,2,3-三唑啉通过胞吞进入到细胞中。
无论是①,②哪条途径的反应生成物4-甲酰基1,2,3-三唑啉,都会随机地与生物分子(蛋白等)反应,最后在细胞内将细胞染色。
※ 请注意,本试剂不能用于局部观察。由于丙烯醛与试剂的反应生成物以及附加在生物分子的状态都会通过荧光信号被检测出,因此并不能使丙烯醛局部可视化。
◆特点
● AcroleinRED是利用了苯基叠氮化合物与丙烯醛特异性且迅速发生反应这一原理的试剂。通过使用TAMRA染料标记从细胞中产生的丙烯醛,使
● 丙烯醛可视化。
● 可使用罗丹明滤光片组件观察(激发/荧光波长:560 nm/585 nm)。
● 不与其他不饱和醛(巴豆醛,反式2-辛烯醛,异丁烯醛)、苯乙烯反应。
● 无需前处理,简单地操作即可检测。
● 与现有丙烯醛定量法相比,灵敏度高。(丙烯醛浓度的检测上限:100 nM)
● 可根据荧光强度相对定量丙烯醛。
◆原著论文
● A. R. Pradipta, M. Taichi, I. Nakase, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, ACS Sens., 1, 623~632 (2016).
● Uncatalyzed Click Reaction between Phenyl Azides and Acrolein: 4-Formyl-1,2,3-Triazolines as“Clicked” Markers for Visualizations of Extracellular Acrolein Released from Oxidatively Stressed Cells.
● T. Tanei, A. R. Pradipta, K. Morimoto, M. Fujii, M. Arata, A. Ito, M. Yoshida, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, J. Ikeda, E. Morii, S. Noguchi, and K. Tanaka, Adv. Sci., 1801479 (2018)
● Cascade reaction in human live tissue allows clinically applicable diagnosis of breast cancer morphology.
◆应用
● 稳态下对丙烯醛产生量进行相对定量
● 对因外部刺激(药剂处理等)导致丙烯醛产生量变动进行相对定量
※ 不可用于丙烯醛的局部观察。详情请浏览本文“原理”部分。
◆操作方法概要
1. 使用新鲜的培养基制备AcroleinRED溶液(终浓度10~30 μM)。
1. ※ 终浓度可能会因为细胞种类不同而有所差别,建议根据实验进行优化。
2. 去除培养细胞的培养基,用PBS清洗2次。
3. 添加含有AcroleinRED的培养基。
4. 培养30分钟~1小时。
1. ※ 注意:荧光信号会随处理时间的增加而积累。请根据实验选择理想的处理时长。
5. 用PBS清洗细胞3次,更换新的培养基。
6. 可以观察非固定细胞(活细胞)及固定细胞。
◆应用实例
■ 验证苯基叠氮化合物的丙烯醛特异性
■ 依赖于氧化应激的丙烯醛的产生量增加
在氧化应激模型中,将0~1,000 μM的各浓度的过氧化氢H2O2添加至HUVEC细胞中预孵育2小时后,添加AcroleinRED并在30分钟后进行非固定观察。在未添加H2O2时可观察到稳态下丙烯醛的产生量。另外,可以发现随着H2O2浓度的增加,丙烯醛的生成量也不断增加。
■ ROS产生促进剂使丙烯醛产生量增加
使用能促进细胞内活性氧(ROS)产生的物质甲萘醌对细胞处理0、10、30、60分钟后,分别使用ROS检测试剂以及AcroleinRED进行共染色。可观察到经甲萘醌处理后,细胞的ROS迅速增加,而丙烯醛则是缓慢增加。
■ 不同细胞种类所产生的丙烯醛产生量比较
使用AcroleinRED对3种正常细胞以及8种人癌细胞株进行丙烯醛产生量的相对比较。结果表明,与正常细胞相比,癌细胞中丙烯醛的产生量明显增加。并且发现每种癌细胞的丙烯醛的产生量之间也有差别。
■ 组织中丙烯醛的可视化
将乳腺癌患者来源乳腺组织(IDC,浸润性导管癌, DCIS,原位导管癌)以及正常乳腺组织(NBG)提取后立刻以非固定状态浸于AcroleinRED(20 μM)/Hochest混合溶液中,静置5分钟后染色丙烯醛和细胞核,清洗组织后使用荧光显微镜观察。
结果表明,AcroleinRED处理过的乳腺癌组织(IDC,DCIS)中可以观察到红色荧光,但正常乳腺癌组织(NBG)却基本无法观察到经过AcroleinRED处理的染色。通过这种方法,可以对非固定状态下的提取组织进行染色。
※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。
参考文献
1. |
A. R. Pradipta, M. Taichi, I. Nakase, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, ACS Sens., 1, 623~632 (2016). Uncatalyzed Click Reaction between Phenyl Azides and Acrolein: 4-Formyl-1,2,3-Triazolines as “Clicked” Markers for Visualizations of Extracellular Acrolein Released from Oxidatively Stressed Cells.
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2. |
T. Tanei, A. R. Pradipta, K. Morimoto, M. Fujii, M. Arata, A. Ito, M. Yoshida, E. Saigitbatalova, A. Kurbangalieva, J. Ikeda, E. Morii, S. Noguchi, and K. Tanaka, Adv. Sci., 1801479 (2018) Cascade reaction in human live tissue allows clinically applicable diagnosis of breast cancer morphology.
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产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
FDV-0022 | AcroleinRED |
0.5 mg | – | – |
Chemodex是一家瑞士公司,主要生产性价比高的产品。产品包括:
● 常规和新型荧光探针
● 染料/标记/着色剂
● 标记物&探针
● 代谢产物
● Building Blocks &小分子
Chemodex擅长合成来自荧光素的荧光物质,比如香豆素,荧光黄,罗丹明和芘。这些试剂用于探针,染料,标记物,NIR标记,pH-传感器,离子检测剂,螯合剂和其他运用(比如:分析生物化学,免疫检测和荧光显微镜)。涉及生命科学理论研究,生物技术,诊断和制药企业等方面研究。
富士胶片和光(广州)贸易有限公司提供所有Chemodex试剂,产品咨询请联系我们。
◆精选标签、染料和着色剂
产品名称 |
货号 |
产品描述 |
Alcian Blue 8GX |
CDX-A0001 |
普遍使用的光学显微镜和电镜的阳离子蓝绿染料,用于染酸性多糖,比如软骨和其他体结构的粘多糖、一些粘多糖体,一些细胞唾液酸化的糖蛋白等。可以显微分光光度法定量液体中酸性多糖或者在聚丙烯酰胺胶或者免疫印迹实验中染色糖蛋白。 |
Hoechst 33258 |
CDX-B0029 |
可用于DNA,染色体,细胞核和线粒体染色的DNA荧光染料。与DNA中AT丰富序列小沟结合。该染料经常用于定量活细胞的双链DNA,细胞不需要用表面活性剂处理或者固定,可用流式或者荧光显微镜官场。该染料也可用于绘制标准曲线(根据发射光的荧光值和含量的关系),定量检测。 |
NBD-Cl |
CDX-C0010 |
非荧光。与脂肪胺、氨基酸、多肽和蛋白或者硫醇化合物反应时产生高荧光产物。普遍用于标记多肽、蛋白、药物和其他生物分子。是氨基酸和小分子胺类HPLC分析时普遍用到的衍生化试剂。 |
5-FAM |
CDX-C0014 |
单一同分异构体,通过羧酸的碳化二亚胺激活与一级结构的胺类反应。在标记多肽,蛋白,核苷酸甚至更小分子的点击化学中经常用作绿色荧光试剂。具有相对高的吸收率,良好的荧光量子产率,良好的水溶性。经常作为极性示踪剂。 |
5-CFDA |
CDX-C0039 |
检测活细胞酯酶活性的荧光底物。该试剂具有细胞渗透性,高灵敏度。可用于细胞活性检测和"活-死"检测系统,特别是自动化细胞活力检测。乙酸盐基团的酶反应或者化学水解后清除的产物是羧基荧光素,可很好的保留在活细胞内。可用流式或者荧光显微镜监测细胞。 |
7-Diethylaminocoumarin-3-carboxylic acid |
CDX-D0036 |
氨基修饰和蛋白偶联物的荧光标记。具有强烈的蓝色荧光,可制备高通量检测中蓝色荧光生物偶联物或者标记合成多肽。 |
Laurdan |
CDX-D0098 |
用于监测细胞膜磷脂双层质量的荧光探针。对膜的反转,和其他膜的流动性,比如水的渗透都敏感。膜水含量的变化会引起laudan发射光谱蓝色漂移,可计算广义的偏振(GP)定量。可用于活细胞。 |
Dil Stain |
CDX-D0230 |
亲脂类的橙-红荧光膜染料,随后会弥散整个细胞。环境敏感的荧光当整合或者与亲脂类生物分子比如蛋白结合时荧光会变强。具有高消光系数,依赖于极性的荧光和短暂激发状态。经常用于单个分子的影响,原基分布图,,神经元和其他细胞的长期示踪剂。 |
Fluorescein-5-thiosemicarbazide |
CDX-F0005 |
用于标记细胞表面功能性基团(血型糖蛋白)。是一种细胞可渗透荧光探针,确认蛋白和多肽在细胞表面的拓扑结构,检测衰老组织蛋白的羰基。 |
GSH-Oet |
CDX-G0006 |
可渗透膜/脂类的GSH衍生物。保护细胞防止辐射损伤,氧化和毒素包括重金属损伤。保护细胞遭受损伤。胞内酯酶经历水解,增加细胞内GSH含量。 |
5-Maleimido-eosin |
CDX-M0013 |
检测溶液和膜上蛋白旋转扩散的三组一个探针,包括肌球蛋白和丙酮酸脱氢酶。硫醇反应的曙红-5-马来酰亚胺的生物偶联物可用作发出磷光的探针或者 光敏剂。 |
Propidium iodide |
CDX-P0023 |
插入试剂,经常用作红色荧光细胞核和染色体的复染。不能渗透活细胞,可用于流式实验,染色DNA,评估细胞活力或者细胞周期分析DNA含量。荧光显微镜观察细胞核和其他含有DNA的细胞器可区分坏死,凋亡和正常细胞。 |
Pyridoxal hydrochloride |
CDX-P0118 |
标记氨基酸,可检测p摩尔含量。可用于大量研究,包括培养基添加。吡哆醛是3种天然形式的维生素B6之一。在体内都可以转变成单一生物活性,吡哆醛 5-磷酸。 |
◆精选生物活性化合物
产品名称 |
货号 |
产品描述 |
AVG-Cl |
CDX-A0185 |
植物乙烯合成的抑制剂,作用于1-aminocyclopropanecarboxylic 酸合成酶。 |
Dimidium bromide |
CDX-D0065 |
核酸相互作用的探针。其他运用包括测量阳离子表面活性剂。 |
2-Heptyl-3-hydroxyl-4-quinolone |
CDX-H0077 |
群体感应-调节的毒力因子,包括诱导和研究毒力基因,比如铁清除的基因。群体感应是基于细菌种群密度的信号系统,该系统包括细菌和细胞受体的信号分子交换。 |
◆DAF化合物 – 检测一氧化氮的检测探针
一氧化氮在细胞的生理和病理过程中都有涉及。现在表明在血管舒张、神经传递,细胞毒理,免疫应答和炎症都有作用。在细胞内,存在分子氧,四氢生物蝶呤,NADPH和黄素辅助因子时一氧化氮合成酶(NOS)催化精氨酸变成瓜氨酸和NO。由于NO很重要,NO的实时检测和定量非常受关注。然而,由于NO的半衰期很短,限制了其体外研究。因此,NO敏感的荧光探针,比如DAF-2 用于设计实验,实时观察NO。
产品名称 |
货号 |
产品描述 |
DAF-2 |
CDX-D0084 |
检测NO的荧光探针 |
DAF-2 DA |
CDX-D0085 |
检测NO的荧光探针,可渗透细胞。 |
CDX-A0023 |
定量检测溶液中低浓度NO的探针。直到与NO反应时才发荧光。 |
|
DAF-FM DA |
CDX-A0024 |
定量检测溶液中低浓度NO的探针。直到与NO反应时才发荧光。可渗透细胞。 |
DAF-2T |
CDX-D0044 |
DAF-2的阳性对照。 |
DAR-1 |
CDX-D0101 |
与经典的DAF衍生物相比,该NO探针具有更高的高稳定性。 |
CDX-D0102 |
与经典的DAF衍生物相比,该NO探针具有更高的高稳定性。 |
◆检测Zn2+ 锌探针
锌 (Zn) 是体内第二大过渡金属。是催化,结构和调控的重要离子。锌离子在内稳态,免疫应答,氧化应激,细胞凋亡和衰老方面有重要作用。在突触前神经元中作为常规神经递质,作为转膜信号穿过突触后神经元。异常的锌代谢产物与很多神经系统疾病有关,包括老年痴呆症、帕金森病和癫痫。体内监测锌的理想技术应该是用荧光的锌探针。
产品名称 |
货号 |
产品描述 |
ZnAF-2 DA |
CDX-Z0008 |
ZnAF-2的衍生物,可渗透细胞。可用于荧光法检测Zn2+(酯酶水解后)的荧光试剂。 |
ZnAF-2 6-Iso |
CDX-Z0006 |
可渗透膜的化合物,可高特异性与Zn2+-荧光探针结合。显示低背景荧光,荧光密度增加约51倍(化学计量(1:1)结合Zn2+)。跟Ca2+, Mg2+, Na+, 或者 K+的亲合力很小。 |
Zinquin free acid |
CDX-Z0014 |
Zn2+ 特异性荧光团,可形成zinquin-Zn2+ 复合物。用UV检测细胞内的锌。细胞间的锌动员可作为细胞凋亡的早期指示剂。在光谱的蓝光区域发射。 |
Zinquin ethyl ester |
CDX-Z0013 |
亲脂的,灵敏的Zinquin衍生物。可渗透细胞膜。在活细胞内,通过细胞质酯酶清除乙酯基团,防止跨膜流出。结合Zn2+ 后荧光增强,但是探针在发射波长处不显示变化。该探针受UV光激发,在光谱的蓝光部分发射。Zinquin乙酯可用于监测细胞凋亡相关的细胞内锌流动。 |
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富士フイルム和光純薬株式会社 生命科学研究所 請川亮
◆前言
以外泌体为代表的细胞外囊泡是各个细胞释放出的膜囊泡,它作为细胞间信息传递的使者和疾病生物标志物,近年来受到了极高的关注1)。虽然近几年有关外泌体的研究在各领域中不断增长,但实验技术尚在发展阶段,还存在很多需要改善的问题。FUJIFILM Wako开发了一种新的亲和分离法——"PS亲和法",与传统方法相比,能从各种样品中提取出完整且高纯度的外泌体,而且,该技术还成功开发出用于外泌体检测的PS亲和ELISA 法2,3)。
在研究外泌体时,为了评价分离和提取出的外泌体的生物活性,通常会对细胞或动物进行投喂实验。利用荧光素标记进行可视化来确认对象中含有外泌体并进行追踪,是一种常见的技术。但是,如上述所说,外泌体的实验技术仍在发展,荧光素标记还存在需要注意的问题。本文讲述的是使用了不同品牌的荧光标记色素进行外泌体标记的研究,以及需要注意的问题。
◆在外泌体荧光标记实验中,去除未标记色素时的吸附损失
各品牌都将脂质、核酸或细胞膜的荧光标记试剂加以改造,使之成为包括外泌体在内的细胞外囊泡的特异荧光标记试剂。该标记方法是让从各个样品中分离、提取出来的外泌体样品与荧光色素进行反应,通过凝胶过滤或超滤装置去除未反应的荧光色素。在该荧光标记的过程中,特别是去除未反应的荧光标记时,会因吸附而损失大量的外泌体样品,同时,通过向外泌体样品添加FUJIFILM Wako开发的EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent(下面简称EV-Save),能强烈抑制吸附损失(图1)。用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS从COLO201细胞培养上清中分离、提取外泌体样品,先用A公司的荧光标记试剂进行标记,然后用B公司的凝胶过滤柱去除未反应色素。将获得的荧光标记外泌体样品加入HeLa细胞培养上清中,经过24小时的细胞吸收后,用荧光显微镜及流式细胞仪检测。在荧光色素标记时预先向样品中加入EV-Save,结果显示,细胞内的荧光信号比未添加EV-Save时大幅增强(图1、A, B)。用PS Capture™ Exosome ELISA Kit后再比较凝胶过滤前后外泌体样品的吸附损失, 未添加EV-Save的样品在凝胶过滤后没被检测到外泌体表面标记物CD63的信号,而添加了EV-Save的样品则检测到了CD63的信号,所以,EV-Save能有效抑制凝胶过滤引起的吸附损失(图1、C)。
图1.荧光标记外泌体样品的吸收确认与EV-Save抑制吸附损失的效果
用A公司的荧光标记试剂对MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS分离的COLO201来源外泌体样品(1 ×1010 particles)进行标记后,再用荧光显微镜(A)和流式细胞仪(B)确认HeLa细胞吸收外泌体样品的情况。
准备同上的外泌体样品(5 × 109 particles),可以用PS Capture™ Exosome ELISA Kit比较CD63信号来检测凝胶过滤前后的损失(C)。
◆使用了各种荧光标记试剂的外泌体染色方法及其特异性的问题
下面将对使用不同荧光标记试剂的外泌体荧光标记以及细胞的吸收能力进行比较。这次使用的是A、B、C公司的荧光标记试剂。用各种荧光标记试剂荧光标记以MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS从COLO201细胞培养上清中提取的外泌体样品,再确认HeLa细胞对外泌体样品的吸收情况(图2、A, B)。荧光显微镜观察发现,细胞内吸收了用不同荧光标记的外泌体(图2、A),且根据流式细胞分析,比较无添加对照以及标记Elution buffer的阴性对照,峰值位移大幅改变,所以能确定受体细胞吸收了荧光标记的外泌体(图2、B)。但是,用荧光标记试剂来标记1% BSA 溶液作为阴性对照,与其他样品一样加入细胞后,和荧光标记的外泌体样品进行同样的处理,在流式细胞分析中也观察到了峰值的变化(图2、B)。对此,各种荧光色素标记试剂不仅对外泌体,同样的原理它对蛋白也能进行标记,故在用作外泌体标记试剂时,特异性是一个较严重的问题。从上述结果可见,用市面上销售的荧光标记试剂进行标记,或进行细胞吸收外泌体的确认实验时,受体细胞中的荧光信号是外泌体本身的信号,还是外泌体分离时受污染的蛋白等杂质来源的信号,解释结果时需要特别注意,故在进行细胞吸收外泌体的确认验证时,外泌体样品纯度非常重要。
图2.使用了各种荧光标记试剂的外泌体标记与外泌体被HeLa细胞吸收的确认
用各种荧光标记试剂对MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS分离的COLO201 来源外泌体样品(1× 1010 particles)进行标记,再用荧光显微镜(A)和流式细胞仪(B)确认HeLa细胞对外泌体样品的吸收情况。另外,作为对照,还准备了同样进行过荧光标记处理的试剂盒附带的Elution buffer和1%BSA 溶液,然后添加到细胞中(B)。
因此,通过FUJIFILM Wako PS亲和法和超离法从相同量的培养上清样品中分离、提取出外泌体样品,再用A公司的荧光标记试剂标记外泌体样品,进行细胞吸收外泌体的确认实验(图3)。荧光显微镜的分析结果表明,受体细胞吸收的由超离法分离、提取出的外泌体样品比PS亲和提取的外泌体样品更多(图3、A)。但是,详细分析提取外泌体样品时,尽管蛋白浓度和粒子数分析显示出超离样品含有更多的外泌体量,但是如果用PS Capture™ Exosome ELISA Kit检测外泌体标记物CD63信号,PS亲和法分离、提取的样品比用超离法分离、提取的外泌体样品的一个粒子的CD63信号和纯度更高(图3、B)。使用杂质多、污染严重的超离法制备外泌体样品时,受体细胞吸收的信号实体不仅来源于外泌体,也可能来源于杂质蛋白。
图3.比较PS亲和提取与超离提取外泌体的吸收的效率
用A公司的荧光标记试剂对用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS和超离法分离的COLO201 来源的外泌体样品(8 × 109 particles)进行标记,然后在荧光显微镜下比较HeLa细胞吸收外泌体的效率(A)。各提取法配制的外泌体样品,以BCA assay 检测蛋白浓度,使用NanoSight的NTA检测粒子数,同时,通过PS亲和ELISA法检测CD63的信号(B)。
◆结语
在进行外泌体的荧光标记法和细胞吸收外泌体的确认时应该注意的两点是,外泌体具有的吸附特性与收量低下密切相关,现在市面上销售的荧光标记试剂不是以外泌体染色为目的而开发的,对外泌体的特异性较低。对于如何配制高纯度的外泌体样品,本文提出了分离、提取方法的重要性。但是至今为止,如多数论文报告主要采用的那样,分离、提取含有外泌体的细胞外囊泡的方法的黄金标准仍然是超离法,但实际上,超离法配制出的外泌体样品会混入很多非细胞外囊泡来源的杂质蛋白,我们仍在继续彻底评估污染物对下游实验结果的影响。International Society for Extracellular Vesicles的杂志《Journalof Extracellular Vesicles》也提到过这个问题4)。以FUJIFILM Wako开发的"PS亲和法"为基础的MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS还有待改善,但它比超离法和各种分离、提取试剂盒能相比,能更简便地提取高浓度的外泌体。衷心希望在未来FUJIFILM Wako的产品能有助于以外泌体为代表的细胞外囊泡研究的进一步发展。
◆参考文献
1) Tkach, M. et al . : Cell , 164, 1226(2016).
2) Nakai, W. et al . : Sci. Rep ., 6, 33935(2016).
3) Saito, S. et al . : Sci. Rep ., 8, 3997(2018).
4) Gardiner C. et al . : J. Extracell. Vesicles , 5, 32945(2016)
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 细胞外囊泡吸附抑制剂 |
基因研究用 | 1mL |
简要描述:● 使用Nunc冻存管颜色标记作为通用和完整的归档贮存系统的部件● 除 375299 和 340711 外,冷冻颜色标记适合所有冻存管
产品型号: 354968
所属分类:NUNC
详情介绍
Thermo Scientific Nunc CryoTubes 冻存管颜色标记器
产品特色
● 使用Nunc冻存管颜色标记作为通用和完整的归档贮存系统的部件
● 除 375299 和 340711 外,冷冻颜色标记适合所有冻存管
备货品牌:
Thermo fisher (试剂耗材)、NUNC、Nalgene、QSP、Orion(奥立龙)、优特、Epredia(原Thermo 病理)、Labserv、Corning、Medicom麦迪康、 Xybio试剂、MKbio
优势产品:
Fisherbrand:载玻片 盖玻片 生物危害垃圾袋 肝素化非肝素化毛细管 塑料比色皿 细胞筛网等
原Thermo病理产品Epredia:4951Pluse p4981 超优 优加刀片3053835 3052835 包埋剂 包埋盒
Labserv耗材:细胞培养皿 血清移液管 细胞培养瓶 离心管 8联管 EP微量离心管 细胞培养板
Thermo Orion水质分析产品:pH缓冲液 电导标准液 水质分析仪 pH测量仪、电极
使用M65 EpiDeath® ELISA检测和定量肝损伤
肝毒性和药物性肝损伤
检测潜在的肝毒性是药物开发和药物安全性测试期间的关键,以减少后期候选药物阶段的风险,并且药品在进入临床实践时需证明其对肝脏无副作用。
如今,药物性肝损伤(DILI)是病人死亡率和发病率的首要原因,临床上急性肝衰竭病有超过50%的失败案例。标准肝损伤生物标志物在有限的预测值中没有足够的敏感性和特异性。在安全性研究中,大约有40%带有药物性肝损伤的患者未被发现,因此新的生物标志物是非常需要的。
NEWS!!!
2016-07-25
FDA向SAFE-T联盟发布药物性肝损伤(DILI)生物标志物的佐证信
K18 角蛋白18(也为CK-18),能通过M65 EpiDeath® ELISA测量,是发布的评估性能的4个生物标志物之一,并且被FDA认为是十分有前途的生物标志物之一。在检测和预测DILI的结果时需要敏感性和特异性更好的生物标记物,而K18可满足其需要。
“我们发布这封信给SAFE-T联盟,以鼓励进一步发展和探索利用角蛋白18(CK-18)…单独或结合为可溶性检测生物标志物,以评估药物性肝损伤进展的风险。” “…根据现今方法一旦诊断为DILI,则新生物标志物存在明确的需要,特别是以监测为目的。” “这些生物标记物在检测DILI和预测急性DILI的成果中被评估出其功能。” |
◆相关产品
M65 EpiDeath® ELISA (产品编号:10040) M65® ELISA在欧洲按照CE-IVD指示作为一种体外诊断的医疗器械注册。所有试剂即开即用,更加方便。 |
更多试剂盒的相关内容请点击:http://www.peviva.com.cn/pro2.php?id=4
FDA报告请联系我们索取。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
10040 | M65 EpiDeath® ELISA 细胞死亡M65 EpiDeath ELISA试剂盒 |
96 wells |
10020 | M65® ELISA 细胞死亡M65 ELISA试剂盒 |
96 wells |
10011 | M30 Apoptosense® ELISA 细胞凋亡M30 ApoptosenseELISA试剂盒 |
96 wells |
10900 | M30 CytoDEATH™ ELISA M30 CytoDEATH 上皮细胞凋亡ELISA试剂盒 |
96 wells |
Enzo已经在神经科学研究市场中研发先进的标签技术和检测溶液超过40年。 上海金畔生物科技有限公司中国作为Enzo Life Sciences的中国代理,为您提供多种神经科学新型溶液。 |
蛋白聚集体,自噬与细胞毒性 ENZ-51035-K100 PROTEOSTAT® Aggresome Detection Kit
通过显微镜和流式细胞仪可视化和量化聚集体和包涵体。 |
细胞分析 ENZ-51010 ROS-ID® Total ROS/Superoxide Detection Kit 双读数法准确地测定总活性氧和超氧化物歧化酶。
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神经活性肽与第二信使检测
ADI-900-175 Serotonin ELISA kit 血清素ELISA试剂盒试剂盒 使用简便,已经过验证,用于激素研究的血清素ELISA试剂盒。
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