皮肤致敏试验ADRA法：适用于混合物检测 ——已收录于OECD测试准则

　　皮肤致敏试验替代法ADRA，无需使用实验动物，即可检测化学物质对皮肤是否会造成过敏反应。

　　现其适用范围得到扩大，其检测混合物的方法已收录于OECD测试准则，可用于评估化妆品、洗涤剂或消毒剂等各领域产品中使用的天然提取物等的安全性。

富士胶片株式会社（总部：东京都港区，总裁兼董事・CEO：后藤祯一）非常高兴地通知广大客户，无需使用实验动物，即可检测化学物质对皮肤有无过敏反应的皮肤致敏试验ADRA（Amino acid Derivative Reactivity Assay）已作为混合物^※1的皮肤致敏试验方法收录于OECD（经济合作与发展组织）测试准则^※2。此次收录,“ADRA“可评测物质（被测物质）不再是单一物质，还能检测混合物，并且有效性验证测试中也确认了100%的再现性。作为国际上可靠的检测方法被OECD认可，对普及"ADRA "法产生了重要推动力。

皮肤致敏测试是为了调查皮肤与化学物质接触时，引发的过敏反应诱导的炎症（皮疹）发生的皮肤致敏性。该测试用于产品规划和生产前，评估新开发的化学物质和使用化合物的安全性。近年来，因人们健康意识的提高，开始广泛运用天然提取物开发化妆品和洗涤剂等产品，所以需要可评估混合物皮肤致敏性的测试方法。“ADRA”在皮肤致敏性发生过程^※3之一的“化学物质和蛋白的结合”，作为混合物测试方法首次收录于OECD测试准则，可满足上述需求。

FUJIFILM运用化学合成和分子设计的经验生产的高灵敏度反应试剂，于2017年开发了高精度的可评估化学物质皮肤致敏性的皮肤致敏试验“ADRA”。2019年，“ADRA”作为检测单一物质的皮肤致敏性测试法收录于OECD测试准则。之后，FUJIFILM在不断改良“ADRA”测试法的同时，还致力于开发针对混合物的皮肤致敏试验。

FUJIFILM通过更改常规“ADRA”的检测方法实现了混合物的皮肤致敏性评估。具体变更有以下两项，①反应试剂与被测样品混合时，被测样品制备的方法从以往的摩尔浓度^※4变更为质量浓度^※5，②除了吸光检测仪^※6以外，还使用荧光检测仪^※7作为检测反应进行的分析仪器，根据不同的样品使用不同的检测仪器可高精度检测多种混合物的皮肤致敏性。

此外，在同一实验室和不同实验室间进行的再现性测试^※8结果显示，实现了100%再现性。以此作为有效性验证测试,收录于OECD。

现在，FUJIFILM为普及开发的”ADRA”法，由富士胶片和光纯药公司推出了能简单操作的“ADRA试剂盒”（2018年9月发售），以及使用相同试剂盒评估皮肤致敏性的委托服务（2022年4月开始）。未来，针对天然提取物的皮肤致敏试验，如化妆品、洗涤剂和消毒剂中使用的植物提取物等混合物，FUJIFILM将积极向化妆品公司、化工产品厂家和检验委托机构推广“ADRA”，以进一步普及该测试法。

“确保产品和化学物质的安全”是FUJIFILM 2030年度目标CSR计划“可持续发展的价值计划 2030”的一项重要课题。今后，我们将继续通过开发化学物质安的全性评估技术，为降低化学物质对环境和健康的危害作出贡献。

　　※1　由多种成分组成的化学物质。

　　※2　OECD是以国际标准化评估化学物质特性和安全性的测试方法为目的的准则。

　　※3　引起皮肤致敏的过程有三种，分别为“化学物质与蛋白的结合”，“皮肤细胞响应”，“树状细胞响应”。

　　※4　溶液浓度的表示方法之一。目标物质溶解在1 L溶液中的物质的量。

　　※5　溶液浓度的表示方法之一。目标物质溶解在1 L溶液中的重量。

　　※6　通过紫外线的照射，检测吸收190 nm~900 nm波长的光的物质以及该物质吸光度的仪器。

　　※7　通过照射特定波长的光，检测发出220nm~900nm波长的光的物质以及该物质荧光强度的仪器。

　　※8　实验室内再现性测试是验证在同一实验室中更改测试条件（测试时间，测试人员等）进行相同的测试，验证能否获得相同测试结果的测试。实验室间再现性测试是指在

　　　　 多个不同的实验室使用相同的测试条件，验证能否获得相同测试结果的测试。

◆皮肤致敏试验替代法ADRA

以往的ADRA使用方法

●　使用FUJIFILM开发的高灵敏度检测反应试剂（以下，ADRA试剂）进行的代替性皮肤致敏试验。无需使用实验动物，即可评估化学物质对皮肤有无过

　  敏反应。ADRA试剂含有萘环的氨基酸衍生物的分子结构，因此可通过紫外光高灵敏度检测。

●　评估单一物质的皮肤致敏性时，制备ADRA试剂和被测样品摩尔浓度比恒定的反应溶液，使用高效液相色谱仪（HPLC）的吸收检测器检测未与被测样

　  品结合的ADRA试剂的量。由于可高灵敏度检测，与传统方法“直接多肽反应试验（DPRA）”^※9相比，可检测约1/100量的被测样品。

为使用ADRA法评估混合物的皮肤致敏性而对常规检测方法作出的改变

①　变更为质量浓度

　　由于天然提取物的成分往往不明，无法计算被测物质的摩尔浓度，所以FUJIFILM寻找合适的质量浓度（0.5mg/mL），变更被测样品的制备方法为

　　质量浓度。

②　有效运用荧光检测仪

　　以往使用的吸收检测仪，可能会无法正确检测和定量没有与样品结合的ADRA试剂的量，因此在使用ADRA试剂时，可有效运用HPLC的荧光检测仪

　　检测会发出荧光的萘环。若使用光度检测仪无法正确检测和定量的被测物质，可在使用吸收检测仪的基础上使用荧光检测仪。 

　　上述两点的变更，可检测混合物以及无法与被测样品结合的ADRA试剂量。

　　为验证检测方法变更所获得的测试结果的有效性，于2019年10月~2020年12月进行了再现性测试。在五个实验室中对10种化合物各进行了三次评估，调查在同一实验室和不同实验室之间是否可以获得相同的测试结果，结果证明为100%的再现性。

　　※9　肽与化学物质反应后，通过HPLC检测结合的残留肽来评估皮肤致敏性的方法。

◆相关产品

　　ADRA试剂盒