聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)简称PCR,是一种选择性体外扩增核酸片段的方法,经过循环复制,扩增产量是指数上升,所以具有极高的灵敏度,被广泛应用于生物和医学的科研,临床各种研究中,是目前应用最为广泛的分子生物学方法之一。
但也正是由于PCR具有极高的灵敏度,微量的核酸污染便会导致假阳性扩增结果而导致实验结果不准确,这也是广大实验者最头痛的问题,如果形成气溶胶污染扩散,则可引起整个PCR实验室的污染,处理起来非常棘手,严重的甚至要关闭实验室。环境中的核酸是主要的污染源,常见的污染源有:
1. 模板提取时真空抽干装置;
2. 超净台;
3. 电泳装置;
4. 紫外分析仪;
5. 剪刀、镊子、刀片、移液器等器械;
6. 离心机;
7. 冰箱门把手,冷冻架,门把手或实验台面等;
8. 气溶胶;
9. 高压灭菌装置;
传统的PCR污染清除方法主要有:稀酸处理法、紫外照射法、尿嘧啶糖苷酶(UNG)法、酶解变性、酒精沉淀等几种方式,但仍然存在无法彻底破坏DNA分子、试剂具有腐蚀性或者毒性、小片段核酸无法清除等不足。
方式
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原理
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不足
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修饰
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标记遗传物质,阻止聚合酶与核酸的结合,从而抑制DNA扩增。
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这种标记均为可逆反应,一旦发生去修饰反应即可被聚合酶结合;试剂可能具有腐蚀性。
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酶解
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酶可将长链的核酸分子降解成小片段。
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降解的核酸中仍有大片段存在,具有完整的遗传信息,可通过PCR扩增出完整的片段。
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高压变性
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高压可将核酸降解成20~30bp的小片段。
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仅适用于耐高压材料,更无法应用实验操作台和大型的实验设备。
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紫外照射
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PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,延伸终止,
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仅对500bp以上长片段有效,对短片段效果不大,且并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体,且UV照射还可使二聚体断裂
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德国AppliChem独家研发的DNA-ExitusPlus是一种无腐蚀、无致癌性的核酸污染清除溶液,该产品可将裸露的核酸完全降解至无法作为扩增模板的小片段,无法被扩增,且无法恢复,从而彻底消除了PCR过程中由于环境污染而导致的假阳性扩增。
DNA-ExitusPlusTM特点:
1. 产品为非酶类试剂;
2. 产品中各组分协同作用,快速、非序列特异性的降解核酸污染;
3. 所有组分可生物降解、无毒无害;
4. 不含有机溶剂或者挥发性物质,不含无机酸或者碱性物质,不会对金属形成腐蚀;
5. 使用简单,喷洒或浸泡处理15分钟即可完成清除作用;
6. 升温至50度可提高反应速度。
产品参数:
性状:无色或者浅黄色液体
保存温度:常温
运输温度:常温
效期:12个月
产品信息
货号
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品名
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用途
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规格
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A7089
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DNA-ExitusPlusTM
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环境中核酸污染清除
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250ml/500ml/1L/2.5L
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A7409
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DNA-ExitusPlusTM IF (indicator free)
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250ml/500ml/1L/2.5L
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A8740
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Derma-ExitusPlusTM
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处理手,手臂,手套等
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250ml
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A7600
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Autoclave-ExitusPlus
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高压灭菌装置中核酸污染清除
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6x 1 L
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使用方法:
1. 实验操作台表面
直接将DNA-ExitusPlusTM喷到操作台表面作用10~15分钟,无菌湿布擦拭后即可,无需用水冲洗;
2. 仪器表面
用布或纸巾蘸取适量 DNAExitusPlusTM擦拭仪器表面,充分作用后再用干净湿布擦一遍即可。一些小的部件可在DNA-ExitusPlusTM中浸泡10min左右,然后用清水冲洗、晾干;
3. 塑料及玻璃器皿
向容器中加入足量的DNA-ExitusPlusTM,摇晃以确保器皿内壁全部接触到溶液,充分作用后弃去溶液晾干,用蒸馏水冲洗干净晾干即可;
4. 移液器
遵照移液器说明拆取移液器的管嘴连件,于DNA-ExitusPlusTM中浸泡1min,然后用清水冲洗干净晾干便可安装到移液器上;
5. 解剖刀、镊子等实验器材
先用蘸有DNA-ExitusPlusTM的布擦拭一遍,然后将镊子等器材于DNA-ExitusPlusTM中浸泡10min以上,也可通过加热到50~60℃缩短处理时间;
6. 手臂、手套等
直接将Derma-ExitusPlus(A8740对准手臂或手套进行喷雾至全部湿润,作用3~4min即可)。
此产品与方法已得到全球知名杂志与科研工作者的认可:
(1) Esser, K.-H. et al. (2006) DNA decontamination: DNA-ExitusPlus in comparison with conventional reagents. Nature Methods 3, 151
(2) Arena, A. (2010) DNA exitus plus™ versus standard bleach solution for the removal of dna contaminants on work surfaces and tools. Investigative sciences journal 2, 20-29
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