试剂怎么用——组织化透明试剂

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆组织透明化试剂

FUJIFILM Wako能够提供Scale法、CUBIC法、SeeDB2法、CLARITY法等各种用于透明化的试剂，客户可根据实验目的来选择合适的组织透明化方法。

CUBIC法简便且重现性高，适合全脑成像。CLARITY法可有效应对样本脆弱性和透明度不足的问题。这两种方法因其样品会发生膨润且微结构并不一定能够保持，所以相比微结构更适合细胞水平和轴突束水平的成像。

SeeDB2法不会引起样本膨胀或收缩，因此适用于定量分析各轴突或树突（0.5-数μm），或观察树突棘以及更精细的结构（0.2-1 μm）。然而，若深度超过3-4 mm，则难以观察到单一的轴突。

Scale法在透明度和组织结构保持能力方面居于CUBIC法和SeeDB2法之间。因此，适用于无需使用SeeDB2法进行微结构观察时或进行透明化测试时等情况。此外，使用Scale法也可轻松实现类器官和球状体透明化。

试剂怎么用——蛋白定量

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆蛋白定量试剂

在Western blotting或ELISA中，比较样品之间的蛋白表达水平时，需要评估总蛋白量。蛋白的定量方法有许多种，但需要从检测灵敏度、检测时间以及在表面活性剂和还原剂等条件下是否可检测等角度来选择合适的定量试剂和方法。

● Bradford法（Bradford assay）

CBB G-250能与蛋白质的碱性氨基酸残基、N末端氨基酸以及芳香族氨基酸形成非共价键，最大吸收波长由465 nm变为595 nm。可通过测定595 nm处的吸光度变化来定量蛋白。

● Lowry法（Lowry protein assay）

在碱性条件下，向蛋白溶液中加入双缩脲（Biuret ）试剂后，双缩脲试剂中存在的Cu（II）与蛋白形成络合物。随后添加Folin-Ciocalteu试剂，通过色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸，使磷钨酸和磷钼酸被还原，蛋白溶液呈现蓝色。可通过测定750 nm处的吸光度来定量蛋白。

● BCA法（Bicinchoninic acid assay）

Lowry法的改良方法。在碱性条件下，Cu（II）与蛋白形成络合物，色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸将Cu（II）还原为Cu（I）。向Cu（I）中添加二辛可宁酸（Bicinchoninic Acid），形成在562 nm处呈现出强波长吸收性的深紫色络合物。通过测定此时的吸光度来定量蛋白。

● 邻苯三酚红·钼络合物法（Pyrogallol red-molybdenum assay）

邻苯三酚红和钼（VI）结合，形成最大吸收波长为470 nm的络合物。在酸性条件下，络合物与蛋白的结合使其最大吸收波长变成约600 nm¹⁾。可通过测定600 nm处的吸光度来定量蛋白。

【参考文献】

1）渡辺信⼦，⻲井幸⼦，⼤久保昭⾏，⼭中學: 臨床検査， 30（7）, 778（1986）．

2）鈴⽊祥夫: ぶんせき，1，1（2018）.

◆产品列表

试剂怎么用——琼脂糖

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆琼脂糖

应用于核酸电泳的琼脂糖是从石花菜、江蓠等红藻中所提取的高纯度琼脂。

琼脂糖虽在分子生物学实验中较为常见，但其实种类繁多。为选择适合实验目的的琼脂糖，需检查以下项目。

● 凝胶强度

琼脂糖凝胶破裂所需的载荷用（g/cm²）来表示。标准琼脂糖约为≧1,200 g/cm²（浓度1.5%，Nippon Gene Agarose S）。分离高分子核酸时，需要使用低浓度琼脂糖，因此使用高凝胶强度的琼脂糖可更有效地制备凝胶。反之，在分离低分子核酸时，则使用凝胶强度低的琼脂糖。

● 熔点

琼脂糖凝胶融化的温度。标准琼脂糖的熔点在90°C左右，可通过引入羟乙基来降低熔点。这种低熔点型琼脂糖比双链DNA的变性温度要低，加热至65°C左右即会熔化，因此应用于DNA回收等。低熔点琼脂糖的胶凝化温度也比其他琼脂糖低。

● 硫酸含量

应用于电泳的琼脂糖由琼脂糖和琼脂胶组成，杂质琼脂胶中含有硫酸基团。因此，琼脂糖标准品中的硫酸含量表示琼脂糖的纯化程度，高纯度琼脂糖的硫酸含量表示为≤0.1-0.2%。

● 电渗度

琼脂糖因带有硫酸基等而带负电，接触的缓冲液带正电，两者极性相反。在这种状态下进行电泳时，带正电的缓冲溶液向阴极移动。这种现象称为电渗，也是琼脂糖凝胶电泳中迁移缓慢的原因。因此，一般使用电渗度低的琼脂糖进行电泳。

Nippon Gene Agarose 产品系列及正确使用方法

【参考文献】

1）電気泳動学会 編：「新版 電気泳動実験法」（文光堂）（1989）．

2）大藤道衛 編：「電気泳動なるほどQ&A」（羊土社）（2007）．

3）Green, R. M. and Sambrook, J.： ”Molecular Cloning A Laboratory Manual, 4th ed.”, Cold Spring Harbor Laboratory Press（2012）．

试剂怎么用——核酸染色试剂

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆核酸染色试剂

核酸染色试剂是用于可视化凝胶中的核酸、分析电泳分离后核酸的试剂。溴化乙锭是一种广泛用于核酸染色的染色试剂。但是，溴化乙锭被指出具有致突变性，应谨慎使用。最近，研究人员也开发了安全性高的新型核酸染色试剂。FUJIFILM Wako可提供溴化乙锭，以及及安全性高的SAFELOOK™系列等核酸染色类产品。

◆核酸染色试剂原理

用作核酸染色试剂的化合物，具有通过与核酸结合增强荧光强度的特性。常用的溴化乙锭 (Ethidium Bromide/EtBr) 通过插入DNA双链（也可与单链核酸结合），可将荧光强度提高约20倍。因此能够特异性检测核酸。

图1. EtBr结构图

核酸染色试剂常用的化合物除溴化乙锭之外、还有4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole/DAPI）、碘化丙啶（Propidium Iodide/PI）和吖啶橙（Acridine Orange/AO）等。

◆致突变性

由于核酸染色试剂具有与核酸结合的特性，因此可能会诱导突变。实际上，在进行Ames测试时就发现了溴化乙锭具有致突变性¹⁾，处理时需谨慎小心。

FUJIFILM Wako提供的SAFELOOK™系列产品，已在Ames测试中确认致突变性低，可放心使用。

1) Huang, Qing, and Wei-Ling Fu. "Comparative analysis of the DNA staining efficiencies of different fluorescent dyes in preparative agarose 

1) gel electrophoresis." Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM) 43.8 (2005): 841-842.

◆选择染色方法

琼脂糖电泳中的核酸染色有预染色、后染色和上样添加染色三种方法。每种方法的优缺点总结如下。

■ 核酸染色试剂的特点

◆产品列表

低致突变性核酸染料SAFELOOK™

溴化乙锭

◆参考文献

大藤道衛 編, 電気泳動なるほどQ&A, 羊土社, 2007

田村隆明 編, ライフサイエンス 試薬活用ハンドブック, 羊土社, 2009

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

试剂怎么用——蛋白酶抑制剂

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆蛋白酶抑制剂

在蛋白质实验中，蛋白质的分解是不可忽视的一点。蛋白质分解的主要原因是蛋白酶，特别需要注意的是组织和细胞来源的蛋白酶。为了阻止蛋白质被分解，可向提取缓冲液等中添加蛋白酶抑制剂。由于蛋白酶的种类不同，其抑制活性也有所差异，因此通常会将多种蛋白酶混合进行使用。

◆相关产品

蛋白酶抑制剂混合物系列