不同特性ODS填充剂的有效使用方法


不同特性ODS填充剂的有效使用方法

不同特性ODS填充剂的有效使用方法


 和光纯药工业 大阪研究所 上森仁志


概要

       在日本市场里,以使用实绩来推断的话,二氧化硅ODS填充剂处于支配地位。但即使都是ODS填充剂,按照硅胶材料的特性(比表面积、细孔径、细孔分布、金属杂质含量等)、表面修饰方法(ODS基导入方法、ODS基导入量、封端方法)的不同,分离特性也有很大的差异。探讨最佳分析条件,选中一种ODS填充剂后对移动相组成(有机溶剂的种类、量、盐浓度、pH值等)、分析温度等条件进行反复尝试,才能成为最后日常通用的方法。但是这种方法并非最好,反而利用不同特性的ODS填充更有可能选出高效率的条件。这次,我们使用同一硅胶材料中的3种不同ODS填充剂(wakosil II 5C18 HG, II 5C18 AR, II 5C18 RS),用同一分析条件对中药有效成分进行分析作为例子,说明其实用性。

应用

       如图1所示,在分离模式不变的情况下,无论使用哪种型号的填充剂,都有保留特性的差异。但是,如图2~4所示,分离模式有变化,使用某种填充剂时有最佳分离效果。以图4为例,HG型有2、3个分离不完全。为改善这个分离考虑“调低移动相的乙腈浓度”“变动pH值”,而最简单的方法是更换填充剂。没有洗脱顺序限制的话AR型是十分合适的,如果有限制则用RS型已经可以得到很好的分离效果。探讨最佳的分析条件,是分析领域从业员的乐趣之一,但需要花费大量的精力和时间。这里介绍的方法应该可以节省不少精力和时间。

不同特性ODS填充剂的有效使用方法

Wakopak Navi 系列 反相 HPLC 用填充柱

Wakopak Navi 系列 反相 HPLC 用填充柱

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Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱 Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱


  Wakopak Navi 系列是由三种带有不同烷基链产品组成的反相 HPLC 用填充柱。分别以 C18、C22 和 C30 基修饰粒径5um 的高纯球形硅胶并在实施封端处理后将其制成填充剂填充成高效柱。以 C22 和 C30 基修饰的填充剂能分析 ODS(C18 基)无法分离的样品,扩展了分析范围。



功能基团

填充材料名称

平均粒径(μm)

硅胶形状

平均孔径 (nm)

比表面积(m2/g)

孔体积(mL/g)

C%

ODS(C18)

NaviC18-5

5

全多孔球形

12

300

1.0

19

C22

NaviC22-5

5

全多孔球形

12

400

1.2

20

C30

NaviC30-5

5

全多孔球形

12

300

1.0

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每种柱子的选择指南 


● Wakopak Navi C18-5
 常规分析用,改良修饰法和封端处理后制得的 ODS 柱升级产品 ;
● Wakopak Navi C22-5
 能在高含水流动相实现高分离、强保留;
● Wakopak Navi C30-5
 聚合型,用于相似结构化合物的分离,同分异构体的分离。



保留能力


 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱:4.6 mm×250 mm

洗脱剂:CH3CN/H2O=60/40(v/v)

流   速:1.0 mL/min. at 35℃

检测器:UV 254 mm 0.16 AUFS

样品:1)尿嘧啶(7.75 μg/mL)
        2)苯(1.45 μL/mL)
        3)萘(0.2 mg/mL)
进样量:6 μL



◆Wakopak  Navi C18-5


  经 C18 精细化处理,填料完全封尾。该填料可广泛用于碱性、酸性和配位化合物。

 

分析碱性化合物

分析 8- 羟基喹啉酮

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱:Wakopak® Navi C18-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈/10 mM 磷酸二氢钾(pH 7.0)

    =30/7(0 v/v)

流速:35℃,1.0 mL/min 

检测器:UV 254 nm   0.16 AUFS

进样量:10 μL

 

色谱柱:Wakopak® Navi C18-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈/50 mM磷酸二氢钾(pH3.5),
    0.1% EDTA・2Na=60/40(v/v)

流速:1.0 mL/min,35℃

检测器:UV 240 nm 0.64  AUFS

进样量:5 μL

 


Wakopak  Navi C22-5

  用 C22 修饰后封尾制成的色谱柱,能在高水分含量的流动相下使用,产物的纯度和保留特性均高于 C18。


分离儿茶酚胺

分离线性羧酸类物质

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱: Wakopak® Navi C22-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相: 50 mM NaH2PO4(pH 2.4)

流速: 40℃,1.0 mL/min

检测器: UV 235 nm 0.04 AUFS

进样量:5 μL

 

色谱柱: Wakopak® Navi C22-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相: 20 mM NaH2PO4 (pH 2.5)

流速: 35℃,1.0 mL/min 

检测器: UV 210 nm 0.04 AUFS

进样量:10 μL

 


Wakopak  Navi C30-5

  填料经三十烷基(C30)聚合物修饰后再进行封尾。C30 表现出很好的结构识别能力。

  

分析类胡萝卜素       

分析维生素E

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

 

Wakopak Navi 系列  反相 HPLC 用填充柱

色谱柱:Wakopak® Navi C30-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈/甲醇/三氯甲烷=75/10/15(v/v/v)

流速:35℃,2.0 mL/min 

检测器: UV 470 nm  0.16 AUFS

进样量:5 μL

 

 色谱柱:Wakopak® Navi  C30-5

    (4.6 mm×250 mm)

流动相:乙腈(100%)

流速:1.0 mL/min,35℃

检测器:UV 295 nm  0.064 AUFS

进样量:10 μL

 

产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
233-60353 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
234-60361 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
230-60363 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
231-60393 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
234-60403 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
231-60511 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
237-60513 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
235-60531 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
231-60533 Wakopak® Navi C18-5 1 Column(W)
232-60703 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
230-60743 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
237-60851 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
233-60853 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
231-60871 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
237-60873 Wakopak® Navi C22-5 1 Column(W)
232-61043 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
233-61073 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
234-61081 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
230-61083 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
237-61191 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
233-61193 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
237-61211 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)
233-61213 Wakopak® Navi C30-5 1 Column(W)