- 型号 126279
- 品牌 葛莱娜 greiner
- 【简单介绍】
品牌 其他品牌 蓝色外旋冻存管 规格2ml Greiner葛莱娜外旋蓝色盖冻存管质量会影响细胞的活力以及冻存的效果。Greiner以优质的材料，的处理方法，为您提供可靠的细胞冻存系列实验用品。
德国greiner冻存管2ml
内旋、外旋冻存管（德国Greiner）细胞株的冻存是细胞培养过程中非常重要的步骤，冻存管的质量会影响细胞的活力以及冻存的效果。Greiner以优质的材料，的处理方法，为您提供可靠的细胞冻存系列实验用品。Greiner细胞冻存管的质量在上属于产品，更加实惠的更为您节约了开支。方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。 所有的冻存管均采用PP材料，-196~+121℃稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。 Greiner在每一箱细胞冻存管内为您配备了500个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
Greiner葛莱娜外旋蓝色盖冻存管 126279
产品详情：
Greiner Bio-One是来自德国的一家生命科学耗材及高科技产品生产企业。公司始建于1868年，1963年开始为生命科学领域服务，至今Greiner Bio-One的品牌已经成为世界上实验室耗材领域的领xian者。葛莱娜第yi生化有限公司在拥有超过1000的员工，业务涉及100多个国家。在2004年底在中国的上海设立代表处，全面代表德国总部，负责中国市场客户的联络和服务工作。代表处将为德国生产厂与中国分销商以及我们的zui终用户架起一座沟通的桥梁，及时互享产品信息，更好的为生命科学工作者服务。
标签归档：冻存
122279-Greiner内旋冻存管2ml
- 型号 122279
- 品牌 葛莱娜 greiner
- 【简单介绍】
品牌 其他品牌 Greiner内旋冻存管2ml， Greiner在每一箱细胞冻存管内为您免费配备了500 个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
细胞株的冻存是细胞培养过程中非常重要的步骤，冻存管的质量会影响细胞的活力以及冻存的效果。Greiner以**质的材料，***的处理方法，为您提供可靠的细胞冻存系列实验用品。Greiner细胞冻存管的质量在世界上属于**产品，更加实惠的性价比更为您节约了开支。方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。 所有的冻存管均采用 PP 材料， -196~+121 ℃ 稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。 Greiner在每一箱细胞冻存管内为您免费配备了500 个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
Greiner内旋冻存管2ml 122279
订货信息：
122263-葛莱娜2ml自然色盖冻存管
- 型号 122263
- 品牌 葛莱娜 greiner
- 【简单介绍】
品牌 其他品牌 葛莱娜2ml自然色盖冻存管，所有的冻存管均采用 PP 料， -196~+121 ℃ 稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。
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葛莱娜2ml自然色盖冻存管 122263
订货信息：
126277-德国Greiner圆形外旋细胞冻存管
- 型号 126277
- 品牌 葛莱娜 greiner
- 【简单介绍】
品牌 其他品牌 德国Greiner圆形外旋细胞冻存管，方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。Greiner细胞冻存管的质量在上属于产品，更加实惠的更为您节约了开支。
德国greiner冻存管2ml
内旋、外旋冻存管（德国Greiner）细胞株的冻存是细胞培养过程中非常重要的步骤，冻存管的质量会影响细胞的活力以及冻存的效果。Greiner以优质的材料，的处理方法，为您提供可靠的细胞冻存系列实验用品。Greiner细胞冻存管的质量在上属于产品，更加实惠的更为您节约了开支。方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。 所有的冻存管均采用PP材料，-196~+121℃稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。 Greiner在每一箱细胞冻存管内为您配备了500个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
德国Greiner圆形外旋细胞冻存管 126277
产品详情：
Greiner Bio-One是来自德国的一家生命科学耗材及高科技产品生产企业。公司始建于1868年，1963年开始为生命科学领域服务，至今Greiner Bio-One的品牌已经成为世界上实验室耗材领域的领xian者。葛莱娜第yi生化有限公司在拥有超过1000的员工，业务涉及100多个国家。在2004年底在中国的上海设立代表处，全面代表德国总部，负责中国市场客户的联络和服务工作。代表处将为德国生产厂与中国分销商以及我们的zui终用户架起一座沟通的桥梁，及时互享产品信息，更好的为生命科学工作者服务。
126280-德国Greiner葛莱娜2ml冻存管（红色）
- 型号 126280
- 品牌
- 【简单介绍】
品牌 其他品牌 德国Greiner葛莱娜2ml冻存管（红色），所有的冻存管均采用PP材料，-196~+121℃稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。 Greiner在每一箱细胞冻存管内为您配备了500个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
德国greiner冻存管2ml
内旋、外旋冻存管（德国Greiner）细胞株的冻存是细胞培养过程中非常重要的步骤，冻存管的质量会影响细胞的活力以及冻存的效果。Greiner以优质的材料，的处理方法，为您提供可靠的细胞冻存系列实验用品。Greiner细胞冻存管的质量在上属于产品，更加实惠的更为您节约了开支。方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。 所有的冻存管均采用PP材料，-196~+121℃稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。 Greiner在每一箱细胞冻存管内为您配备了500个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
德国Greiner葛莱娜2ml冻存管（红色） 126280 产品详情：
Greiner Bio-One是来自德国的一家生命科学耗材及高科技产品生产企业。公司始建于1868年，1963年开始为生命科学领域服务，至今Greiner Bio-One的品牌已经成为世界上实验室耗材领域的领xian者。葛莱娜第yi生化有限公司在拥有超过1000的员工，业务涉及100多个国家。在2004年底在中国的上海设立代表处，全面代表德国总部，负责中国市场客户的联络和服务工作。代表处将为德国生产厂与中国分销商以及我们的zui终用户架起一座沟通的桥梁，及时互享产品信息，更好的为生命科学工作者服务。
126278-葛莱娜2ml细胞圆形外旋冻存管
- 型号 126278
- 品牌
- 【简单介绍】
品牌 其他品牌 葛莱娜2ml细胞圆形外旋冻存管，Greiner细胞冻存管的质量在上属于产品，更加实惠的更为您节约了开支。方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。
德国greiner冻存管2ml
内旋、外旋冻存管（德国Greiner）细胞株的冻存是细胞培养过程中非常重要的步骤，冻存管的质量会影响细胞的活力以及冻存的效果。Greiner以优质的材料，的处理方法，为您提供可靠的细胞冻存系列实验用品。Greiner细胞冻存管的质量在上属于产品，更加实惠的更为您节约了开支。方便的条形码管理方案，可以让您的实验室更加井井有条。 所有的冻存管均采用PP材料，-196~+121℃稳定，无DNA酶，无RNA酶，已灭菌，无病原，无内毒素。 Greiner在每一箱细胞冻存管内为您配备了500个冻存管内塞，方便您的书写和标记。
葛莱娜2ml细胞圆形外旋冻存管 126278 产品详情：
Greiner Bio-One是来自德国的一家生命科学耗材及高科技产品生产企业。公司始建于1868年，1963年开始为生命科学领域服务，至今Greiner Bio-One的品牌已经成为世界上实验室耗材领域的领xian者。葛莱娜第yi生化有限公司在拥有超过1000的员工，业务涉及100多个国家。在2004年底在中国的上海设立代表处，全面代表德国总部，负责中国市场客户的联络和服务工作。代表处将为德国生产厂与中国分销商以及我们的zui终用户架起一座沟通的桥梁，及时互享产品信息，更好的为生命科学工作者服务。
小鼠生殖工程学技术——1精子的冻存
小鼠生殖工程学技术——1精子的冻存
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◆材料
1、12周以上的雄性小鼠
2、noesu剪刀（森田制造所 电话03-3811-9730 特别订制品）
3、FERTIUP® 精子冻存液（Cosmo Bio Co., Ltd）
4、mHTF
5、培养皿（Corning 35mm X 10mm Cat.No.430588）
6、黄色枪头（BM医疗器 Cat.No.110-96R）
7、填充精子用的吸管(My Science Cryo Bio System 0.25mL cotton-plugged Sperm StrawsReferences.010261 or My ScienceFrance Cassou type Straws (AAA201) 0.25mL Cat.No.005565）
8、配套吸管用的注射器
9、自动移液器（GILSON PIPETMAN P-10 P-100）
10、加热板（37℃）
11、封口包装机（富士MPULSE 专业包装机器Cat.No.P-200）
12、冻结精子用的吸管
13、Triangle Cassette
14、液氮储存器和干式液态氮筒
15、剪刀
◆步骤
制作冻存精子悬浮装置
1、3厘米厚的泡沫切成圆柱状，塞进50mL的注射器外筒内（泰尔茂Cat. No.SS-50ESz）。
2、用火加热50mL注射器前端，来封堵前端口。
3、用铁丝把注射器固定在50cm的玻璃棒上。
※该装置也可从Cosmo Bio直接购买
准备吸管及制作配套吸管的注射器
1、 在填充精子用的吸管中部贴上标签，剪下棉塞处。
2、 把1mL注射器（泰尔茂Cat. No.SS-01T）、三方活塞（泰尔茂 Cat.No.TS-TR1K）、橡胶管・塑料管（DRUMMOND Cat.No.2-040-000）以及硅帽组装成如下图
3、 精子填充用的吸管的棉塞一侧插进注射器的硅帽里使用。
制作精子悬浊液
1、在培养皿上制作冻存滴液（FERTIUP®精子冻液：60μL），用流动石蜡覆盖滴液；
2、往被覆盖的滴液里再注射进冻存液（FERTIUP®精子冻液：60μL）,得到一个更大的滴液。
※制作后的培养放置在37℃的加热板上至使用时才拿出。
3、让成年雄性小鼠安乐死，把收集的左右附睾尾放置过滤纸上，在实体显微镜下小心地取出血液和脂肪。
4、在培养皿上少量的FERTIUP®精子冻存液的滴液里小心地清洗附睾尾。
5、FERTIUP®精子冻存液的滴液里放进2个附睾尾，用noesu剪刀在附睾尾处剪开5~6切痕。
※只有一个附睾尾时，只需60μL FERTIUP® 精子冻存液的滴液。
6、培养皿在37℃加热板上静置3分钟，为了得到均匀的精子悬浊液，需每分钟搅拌一次。
精子悬浊液填充吸管
1、 把填充精子悬浊液的吸管插进吸管配套用的注射器内，往吸管注入约100μL的mHTF。
※一根吸管只能注入10μL的精子悬浊液，如果把吸管就这样浸泡在液氮中，吸管就会浮起来，所以mHTF充当砝码，让吸管沉浸在液氮底部。
2、注入mTHF后，吸管前端需留有15mm的空隙。
3、用黄色枪头吸取培养皿上10μL的精子悬浊液，然后注射进吸管里。
4、 接着再留15mm空隙，用封口机封住吸管端口。
※拉开注射器内筒，观察精子悬浊液和mHTF的状态来确认是否已完全密封。如果精子悬浊液和mHTF移动了，就需再次封口。
5、 从注射器内，移走吸管，用封口机把吸管的另一侧封住。
6、 重复1~5个步骤，制作10~11根填充了精子悬浊液的吸管。
冻存（使用液氮储存）
1、 吸管内精子悬浊液一侧朝下放进浮物里。
2、 浮物浮在液氮面上，大概静置10分钟后，让浮物浸泡在液氮里。
3、 捞起装满了液氮的浮物，把吸管移至预先在液氮内冷却的Triangle cassette，存放在液氮里
冻存（使用干式液态氮筒）
1、 吸管内精子悬浊液一侧朝下，放进Triangle cassette内。
2、 从干式液态氮筒里取出一个容器（金属制造的筒），然后把Triangle cassette翻入容器里，盖上干式液态氮筒的盖子。
※在使用干式液态氮筒的前一天，筒内装满液氮，让筒内的吸附剂充分吸收液氮，吸收不了的多余的液氮，使用前之前倒掉。
3、静置10分钟
※用干式液态氮筒冻存精子时，可以直接运输放进干式液态氮筒里的精子。
小鼠生殖工程学技术——9CARD以外的方法冻存的精子进行体外受精
小鼠生殖工程学技术——9CARD以外的方法冻存的精子进行体外受精
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◆材料
1、 用CARD以外的方法来冻存精子（冻存管或者吸管）
2、 过量排卵处理后的雌性小鼠
3、FERTIUP®精子孵育培养基（Cosmo Bio Co., Ltd）
4、CARD MEDIUM®（Cosmo Bio Co., Ltd）
5、mHTF
6、 恒温水箱（37°C）
7、 复苏精子用的漂浮装置
8、 剪刀
9、 吸水纸
10、1.5 mL EP管（微型离心管）（Quality Scientific Plastics 1.5ml Graduated Microcentrifuge Tube with Flat Top Cap, Natural Cat.No. 509-GRD-Q）
11、离心分离机
12、电动移液器（GILSON PIPETMAN P-200 P-1000）
13、培养皿（Corning 35mm X 10mm Cat.No.430588）
14、流动石蜡（nacalai Cat.No.26137-85）
15、CO2培养箱
◆方法
制作复苏精子的漂浮装置
1、50ml的离心管与泡沫组合成漂浮装置如下图，用于精子复苏。
复苏精子前的准备
1、准备恒温水箱（37°C）
2、用37°C的温水装满漂浮装置的离心管后，放进水箱里，装置就会上浮，如下图
3、在复苏精子前30分钟，制作精子预孵培养皿（100μl FERTIUP® 精子预孵培养基滴液），静置在培养箱里。
4、采集卵子前10分钟，制作一个采集卵子用的培养皿（200μL的CARD MEDIUM®滴液），静置在培养箱里。
※根据体外受精用的精子的不同，CARD MEDIUM®调试方法也不同。具体请参考操作说明书。
5、制作清洗卵子用的培养皿（80µLmHTF滴液4个），在培养箱里静置30分钟以上。
未受精卵的采集和培养
1、让进行了过量排卵处理的雌性小鼠在注射了hCG 的15~17个小时后安乐死，然后把卵子块放进采集卵子用的培养皿的CARD MEDIUM®滴液里（一滴液里可放3~10只雌性小鼠的卵子块）。
※ 从雌性小鼠安乐死后到将输卵管取出，再把卵子放入受精用的CARD MEDIUM®滴液这一过程要在极短时间内完成（30秒内）。
※一个人实验的情况下，请不要一次性安乐死数只雌性小鼠，应该一只只地进行，并迅速采集卵子。
2、未受精卵在采集卵子培养皿里预孵培养60分钟。
解冻精子
1、从液氮储存器中取出样品（放有冻结精子的试管或吸管），迅速放置37°C恒温水箱里。
精子在冻存管的情况下，要迅速打开管盖，倒掉管内的液氮，然后浸泡在恒温水箱内。精子在吸管的情况下，要迅速将吸管放置恒温水箱的漂浮装置里。
2、把样品内的所有精子悬浊液移置到1.5ml的EP管内，慢慢加入37°C的mHTF （1.2mL），轻轻搅拌后进行离心（300g 5分钟 室温）；
3、去除澄清层（mHTF 里含有约30μL的颗粒会沉淀在试管底部）。然后加入37°C的FERTIUP®精子预孵培养基70μL，轻轻摇匀）
4、用枪头吸取EP管内的全部液体，注射进精子预孵培养皿的滴液里，进行30分钟的预孵培养。
受精
1、用枪头吸取预孵后的未受精卵时，尽量少吸入培养液，然后把未受精卵注射到含有复苏精子的精子预孵培养皿的滴里，进行受精。
2、受精3小时后，在清洗卵子培养皿的mHTF滴液里清洗正常形态的卵子，培养至次日。
3、受精6个小时后，仔细观察卵子，去取单性生殖卵（卵子细胞内只有1个原核），其余卵子培养至次日。
4、次日，只把发育到2细胞期的胚胎移到清洗卵子用的培养皿内留下的滴液里，数完胚胎数后，就能将其用于移植或者冻存。
参考文献
[1] Nakagata N., Takeo T., Fukumoto K., Haruguchi Y., Kondo T., Takeshita Y., Nakamuta Y., Umeno T., and Tsuchiyama
S. 2014. Rescue In VitroFertilization Method for Legacy Stock of Frozen Mouse Sperm. J Reprod Dev. 60(2): 168-171
小鼠生殖工程学技术——5冻存运输小鼠２细胞期胚胎
小鼠生殖工程学技术——5冻存运输小鼠２细胞期胚胎
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◆材料
1. 2细胞期胚胎（新鲜或冻融复苏后的胚胎）
2. 培养皿（coring 35mm X 10mm Cat.No.430588）
3. 电动移液器（GILSON PIPETMAN P-200）
4. M２ Medium (Sigma Cat.No.M7167)
5. 0.5 mL EP管（Fisherbrand Flip Cap Microtubes 0.5 mL, Fisher Scientific Cat.No. FS-MCT-060-C）
6. 微管
7. KSOM/AA
8. 流动石蜡（Nacalai Tesque Cat.No.26137-85）
9. 纽扣式温度记录仪（KN Laboratories temperature data logger Samokuron G type）
10. CARD 冷藏运输试剂盒
o 纸盒（free-s1 Cat.No. 11-1585）
o 棉布
o 保温瓶（Thermos Co., Ltd. Cat.No.JMK-501）
o 冰袋（小）（Kyoritsu Co., Ltd. 冰袋雾凇 Cat.No. H-120）
o 冰袋（大）（shiro产业 冰袋R 500g 140 mm×250 mm、Cat.No. M250R-50）
o 泡沫箱（KARUX KC-3）
◆步骤
2細胞期胚胎的冻存
１. 用移液器（P-200）在培养皿上制作两个１００μL M２的滴液（不要被流动石蜡覆盖）。
２. 把冻存的胚胎从被流动石蜡覆盖着的培养液里移至到一个M2滴液里。
３. 更换新的微管，将胚胎从一个M2滴液移至另一个M2滴液里。
＊把从被流动石蜡覆盖的培养液滴液移至制作好的M2滴液里的胚胎移至到另一个M2的滴液时，尽量避开附着流动石蜡的滴液位置。
４. 往０.５mL EP管内加入０.６mL的M２。
＊如果EP管顶部留有气泡时，需轻拍出气泡。
５. 从3个滴液里取出胚胎后放置在装满０.６mL的M２０.５mL EP管底部（一只EP管能放40个2细胞期胚胎）。
＊ 移动胚胎后，在3个滴液里移液，确认微管里是否残留胚胎。
６. 合上EP管盖子，并用封口膜包封。
７. 在纸盒里装入EP管、纽扣式温度记录仪和棉布后，盖上盒盖紙箱。
M２、紙盒、EP管、纽扣式温度记录仪和棉布全在室温（20～25°C）下使用。
８. 纸盒保存在冷冻柜里（最长可保存72小时）。
2細胞期胚胎的冷藏运输
与上述冻存步骤一样，把EP管放进纸盒（2细胞期胚胎的冻存1~7步）后，按以下操作包装纸盒。
样品是常温的情况只需用保温瓶和小冰袋，4~8°C冻存的样品，则需要使用泡沫箱及大冰袋，包装时动作要迅速。
１. 把纸盒放进保温瓶内。
２. 再放进两个小冰袋至保温瓶内。
３. 紧紧盖上保温瓶盖。
４. 确认瓶盖盖紧后，在泡沫箱内铺上大冰袋，然后放入保温瓶（这时，请注意请勿倒放保温瓶里装有胚胎的EP管）。 接着，保温瓶两侧也放上大冰袋。最后用包装带固牢泡沫箱盖。
５. 用快递运送，整个泡沫箱保存在（４～８°C）冷冻柜里。
６. 用快递冻存运输最长保存时间可达72小时。
＊冬季的室外气温会低至０°C以下，如果运输过程中泡沫箱长时间放置在室外，2细胞期胚胎就会死亡。寄方应首先联系附近的快递配送站，跟他们强调泡沫箱内放有活细胞，请注意切勿放置在室外。
更改 : 2013.03.06 放有2细胞期胚胎的纸盒与冰袋放进保温瓶的顺序互换，因为先放冰袋后放纸盒，使纸盒难以受到内外气温差的影响，原页面请点击此处。
从冷藏运输试剂盒里取出2期细胞胚胎
1. 注入3滴100μL 的KSOM/AA在培养皿上，然后用流动石蜡覆盖。把培养皿放入培养箱里孵育至少30分钟。
2. 从保温瓶里取出放有样品的纸盒。
3. 纸盒在室温下放置30分钟。
注意: 胚胎将在30分钟内沉在EP管底部。
4. 打开纸盒，轻轻地取出棉花，一旦取出棉花后，要拿起装有胚胎的EP管，并打开盖子。
5. 用灌注凝胶枪头收集EP管中M2上清液200μL，然后转移到培养皿的边缘。
6. 用灌注凝胶枪头小心地把全部M2包括在EP管底部的胚胎移至培养皿的中心。
注意: 为了方便操作，在使用移液器时尽量避免吸入空气。
7. 从M2里采集的胚胎，分别转移至3个100μL KSOM/AA 滴液中，进行清洗。
注意: 如果不能移走所有的胚胎，可以用培养皿边缘上的200μL M2滴液来清洗EP管内部。
8. 然后把胚胎移植到代孕小鼠的输卵管内。
注意: 理论上，在胚胎清洗完至移植到代孕小鼠体内的这一过程需在短时间内完成。 (请参考“胚胎移植入输卵管”)
小鼠生殖工程学技术——7冻存小鼠胚胎
小鼠生殖工程学技术——7冻存小鼠胚胎
便捷的玻璃化冷冻保存小鼠胚胎
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◆材料
1. 1M DMSO (Cat. CSR-R-T072)
2. DAP213 (Cat.# CSR-R-T073)
3. 培养皿 (35mm X 10mm Cat.No.430588; CORNING)
4. 过滤装置(Millex-GV 0.22µm Cat.No.SLGV013SL; MILLIPORE)
5. 灌注凝胶枪头 (MBP Gel 200, Cat.No.3621; Molecular BioProducts)
6. 移液管
7. 冻存管(Cryogenic Vials Cat.No.MS-4501W; Sumitomo Bakelite, Japan is recommended. If you cannot get it, use 366656; NUNC.)
8. 微管
9. 冻存架
10. Nalgene 冷却器 (5115-0012; NALGENE, USA)
11. 液氮
12. 显微镜.
13. 0.25 M 蔗糖
14. KSOM/AA
15. 液体石蜡
◆步骤
冷却器和冻存管的准备
1. 使用前一天，把冷却器放置-20°C 的冷藏库里。
2. 在实践玻璃化步骤的前10分钟，从冷藏库里取出冷却器。
3. 冻存管放入冷却器里 (5115-0012; NALGENE, USA)。
一只冻存管能装大约40个胚胎，换而言之，当你想装120个胚胎时，你需要放3只冻存管在冷却器里。
4. 开始实验之前，请检查冻存管内的温度是否为0°C 。
玻璃化
1. 过滤1M DMSO后，在培养皿上滴入4个滴液（~100µL / 个）。其中一滴用于清洗从培养基里采集的胚胎，其余三个用于存放已清洗的胚胎。
2. 把全部胚胎放入其中一个滴液里，清洗沾有培养基的胚胎。清洗后的胚胎平均放进其余的3个滴液里。这3个等份的胚胎最终将会转移至储存小瓶里。
例如，采集了120个胚胎，分成3个等份，每一等份40个，这些胚胎首先会一起放到清洗的滴液里，然后再分成3份放进3个滴液里。
3. 使用20µL移液管和灌注凝胶枪头 , 转移5µL 的1M DMSO溶液的胚胎至冻存管内。转移后，立即将冻存管放置0°C 冷却器内5分钟。
注意: 冻存管可以放在0°C 冷却器中超过5分钟 (<20分钟)。
注意: 如果胚胎都集中在滴液的中央，就能把全部胚胎轻易地吸进5µL 的M DMSO 溶液中。
4. 在0°C 下，往冻存管里加入45µL 的冻存液(DAP213) ，并在在0°C冷却器里静置5分钟。
注意: 加入 DAP213冻存液后，不要把低温管的塞子拧得太紧，否则胚胎复苏后很难快速转移。
5. 迅速将冻存管放到冻存架上，然后直接放进液氮里。
参考文献
【1】 Nakagata N. 1989. High survival rate of unfertilized mouse oocytes after vitrification. J. Reprod. Fert. 87: 479-483.
【2】 Nakagata N. 1993. Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization between cryopreserved gametes. J. Reprod. Fert. 99: 77-80.
【3】 Nakagata N. 1995. Studies on cryopreservation of embryos and gametes in mice. Exp. Anim. 44: 1-8.
【4】 Nakao K., Nakagata N., and Katsuki M. 1997. Simple and effcient procedure for cryopreservation of mouse embryos by simple vitrification. Exp. Anim. 46: 231-234. 118.