2′-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

CAS号：23491-45-4

商品信息

规格

特性：该产品为黄色液体。

内容：试验成功

荧光染料Hoechst 33258是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258,常用于细胞凋亡检测。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst染料可透过细胞膜并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。它们在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

λex=350nm, λem=461nm

染色步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMHoechst染料溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的Hoechst染料溶液。^b）

3.将细胞在37ºC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有350 nm激发和460 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a）由于赫斯特染料可能具有致癌性，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲溶液代替培养基。

1) M.   J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, “Vital   DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry”, J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.

2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H.   L. Roelen, van J. H. Boo and A. H. Wang,   “Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA:   Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin   Complex”, Biochemistry, 1992, 31(47), 11823.

3) T. Ohara and T. Tsuge, “FoSTUA, Encoding a Basic Helix-Loop-Helix Protein, Differentially   Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores, Macroconidia,   Microconidia, and Chlamydospores, in the Fungal Plant Pathogen Fusarium oxysporum”, Eukaryot. Cell, 2004, 3, 1412.

Q1:如何使用Hoechst 33258。

A1：有多种使用方法，但以形态观察为例。 它用作观察凋亡细胞中核变化（染色质浓缩，断裂）的简便方法。 <试剂> ・细胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-） ・荧光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-） •Dojindo的产物为[1 mg / mL]（约1.87 mmol / L） <操作方法> 1. 将含有约1 x 106个细胞的细胞培养基以400 Xg离心5分钟，并弃去上清液。 2.加入100μL细胞固定溶液，并通过移液或类似方法混合。 3.在室温下静置30分钟。 4.离心400Xg，5分钟，弃去上清液。 加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg离心5分钟，弃去上清液。 （*此时，戊二醛经常被洗涤和去除。可能会导致变色） 5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL荧光染料并混合。 6.将1滴（5）的细胞溶液滴在载玻片上，盖上玻璃盖，然后按边缘。 7.在荧光显微镜下观察。 *由田沼靖（Yasushi Tanuma）指导的细胞工程独立体积实验规程系列“细胞凋亡实验规程”

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解决方案的激发波长和发射波长及其区别。

A3:波长如下。 Hoechst33342 Ex：350 nm Em：461 nm Hoechst33258 Ex：352 nm Em：461 nm 两者的基本用法是相同的。 我们的产品是水溶液，所以稀释至所需浓度并添加。 两者之间的区别在于，它基本上是一种特异性结合腺嘌呤-胸苷部分的药物。 它也穿过活细胞的膜并与活细胞的DNA结合。 Hoechst 33342的膜渗透性略高。 Hoechst 33258似乎是dsDNA的选择性抗体。