ScreenFect™ 通信向HeLa细胞导入siRNA数据
高性能基因导入试剂
下面为大家介绍使用 ScreenFect ™ siRNA 向 HeLa 细胞导入 siRNA 数据的实验成果及逆转染（1-STEP）Protocol。
◆向 HeLa 细胞的逆转染例子（24孔培养板）
细胞的前期培养
1. 用适当的培养容器（T-75 烧瓶），将 HeLa 细胞培养至半融合状态。
配制转染试剂
1. 准备两支 1.5 mL 灭菌试管。
2. 在其中一支试管里加入 24.5 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。
3. 再往步骤２的试管里加入 0.5 μL 的 ScreenFect ™ siRNA reagent，使全部容量达到 25 μL。…溶液（A）
（ScreenFect ™ siRNA reagent在使用前进行涡旋处理。）
4. 在另一支试管里加入 24 μL ScreenFect ™ Dilution buffer。
5. 再向步骤４的试管里加入 1 μL 的 5 μmol/L PIK3CB siRNA 溶液（5 pmol）…溶液（B）
6. 将溶液（B）全部添加至溶液（A）的试管中。
7. 轻敲试管，使溶液混合均匀。再用台式离心机降速处理。
8. 在室温下孵浴 5~20 分钟。
配制配制细胞悬浮液
1. 从恒温箱里取出【细胞的前期培养】的烧瓶。
2. 去除培养基，用 PBS 清洗一次。
3. 向烧瓶里添加 2 mL 胰蛋白酶溶液后，放入室温、5% CO2 的恒温箱里培养，直到细胞从培养容器中脱落。
4. 加入约 5 mL FBS 添加培养基使反应停止。
5. 利用移液器使细胞分散，将全部培养液转移到离心管中。
6. 150×g 离心，5 分钟。
7. 去除上清时不要去掉颗粒物。
8. 添加 5~10 mL 新的培养基，利用移液器使细胞分散。
9. 用血细胞计数板等的细胞计算器检测细胞数。
10. 检测出细胞悬浮液的浓度后经过计算，以此配制 2.0×105 cells/mL 的细胞悬浮液（配制的细胞悬浮液量可根据实验规模进行适当地调节。）
转染
1. 将 500 μL 在【配制细胞悬浮液】时配制好的细胞悬浮液添加至细胞培养板里。
2. 将 50 μL 在【配制转染试剂】步骤８中孵浴的 DNA-lipid complex 添加至细胞培养板里，轻摇培养板使溶液混合（也可以先往细胞培养板里加
入 50 μL DNA-lipid complex，再加入 500 μL 细胞悬浮液）。
3. 放入 CO2 的恒温箱里培养 24~48 小时后即可进行后续实验。
◆实验数据
用逆向转染法和正向转染法向 HeLa 细胞进行 PIK3CB siRNA 的导入实验，通过实时定量 PCR 检测出 PIK3CB mRNA 的表达量。将定量结果得出的敲减效率，与原来用其他公司的产品进行实验得出的敲减效率进行比较，结果显示，ScreenFect ™ siRNA 拥有高于其他公司产品抑制目的基因表达的效率。
【逆向转染（1-STEP）】
【正向转染（2-STEP）】
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
包装 |
|
299-75001 |
ScreenFect ™ siRNA转染试剂 ScreenFect ™ siRNA |
基因研究用 |
0.2 mL |
|
295-75003 |
1 mL |
||
|
293-75004 |
1 mL×5 |