试剂怎么用——WB用膜
 |
即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。 |
◆WB用膜
● 硝酸纤维素膜
硝酸纤维素膜是由纤维素羟基经硝酸酯化而形成的，主要通过疏水相互作用进行蛋白的非特异性吸附。因其易于处理并且可以长期储存的特点，一直被作为印迹膜使用。它具有亲水性，因此无需用甲醇进行预处理。但强度较弱，蛋白的结合能力为~100 μg/cm2，比其他膜小，转录时间过长可能会使已转录的蛋白再次游离。
● 尼龙膜
尼龙膜使用了经尼龙或胺化学改性的尼龙。比硝酸纤维素膜具有更好的蛋白结合能力，尤其是经化学改性的尼龙膜带有正电荷，与带负电荷的蛋白发生强烈的静电相互作用。但由于容易发生蛋白以外的非特异性吸附，必须进行充分的封闭处理。
● PVDF膜
PVDF膜是以聚偏二氟乙烯（PVDF) 为支撑的膜，可通过疏水相互作用吸附蛋白。虽然预处理时需要使用甲醇，但其具有较大的蛋白结合能力、优异的强度和化学相容性，因此经常被用作印迹膜。
膜种类及性质
|
膜 |
产品名称 |
蛋白结合能力 |
优点 |
缺点 |
|
硝酸纤维素膜 |
ClearTrans® Nitrocellulose Membrane, 0.45μm |
～100 μg/cm2 |
操作简单。便宜。 |
蛋白结合容量小。 |
|
尼龙膜 |
ClearTransR Nylon Membrane, 0.45μm |
～210 μg/cm2 |
蛋白结合容量大。 |
容易发生目标蛋白以外的非特异性吸附。 |
|
PVDF膜 |
ClearTrans® SP PVDF Membrane, Hydrophobic, 0.2μm |
300～400 μg/cm2 |
蛋白结合容量大。 |
需要甲醇处理。 |
【要点】 膜孔径
用于Western blotting的膜孔径有0.45 μm和0.2 μm。通常使用的是0.45 μm，但转录15 kDa或更小分子量的蛋白质时，0.2 μm具有更高的结合效率并且可以抑制吸附后的游离。
◆参考文献
1）口野嘉幸，平井久丸，櫻林郁之介 編：「遺伝子・タンパク質 実験操作 ブロッティング法」（ソフトサイエンス社）（1987）．
2）大藤道衛 編：「電気泳動なるほどQ&A」（羊土社）（2005）．
3）森山達哉 編：「バイオ実験で失敗しない！ 検出と定量のコツ」（羊土社）（2005）．