试剂怎么用——核酸染色试剂

即使是为同一目的所用的试剂种类繁多，同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。 因此，经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。 为了解决这样的问题，小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。

◆核酸染色试剂

核酸染色试剂是用于可视化凝胶中的核酸、分析电泳分离后核酸的试剂。溴化乙锭是一种广泛用于核酸染色的染色试剂。但是，溴化乙锭被指出具有致突变性，应谨慎使用。最近，研究人员也开发了安全性高的新型核酸染色试剂。FUJIFILM Wako可提供溴化乙锭，以及及安全性高的SAFELOOK™系列等核酸染色类产品。

◆核酸染色试剂原理

用作核酸染色试剂的化合物，具有通过与核酸结合增强荧光强度的特性。常用的溴化乙锭 (Ethidium Bromide/EtBr) 通过插入DNA双链（也可与单链核酸结合），可将荧光强度提高约20倍。因此能够特异性检测核酸。

图1. EtBr结构图

核酸染色试剂常用的化合物除溴化乙锭之外、还有4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole/DAPI）、碘化丙啶（Propidium Iodide/PI）和吖啶橙（Acridine Orange/AO）等。

◆致突变性

由于核酸染色试剂具有与核酸结合的特性，因此可能会诱导突变。实际上，在进行Ames测试时就发现了溴化乙锭具有致突变性¹⁾，处理时需谨慎小心。

FUJIFILM Wako提供的SAFELOOK™系列产品，已在Ames测试中确认致突变性低，可放心使用。

 

1) Huang, Qing, and Wei-Ling Fu. "Comparative analysis of the DNA staining efficiencies of different fluorescent dyes in preparative agarose 

1) gel electrophoresis." Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM) 43.8 (2005): 841-842.

◆选择染色方法

琼脂糖电泳中的核酸染色有预染色、后染色和上样添加染色三种方法。每种方法的优缺点总结如下。

■ 核酸染色试剂的特点

染色方法	预染色	后染色	上样染色
方法	预先添加染色试剂至琼脂糖凝胶	电泳后将琼脂糖凝胶浸入到加入染色试剂   的缓冲液中	向进行电泳的样品添加染色试剂
优点	● 电泳后无需染色时间   ● 电泳中可观察条带	● 即使存在DNA 浓度差，也不会扰乱   ● 电泳图   ● 可长时间电泳   ● 含变性剂的凝胶也可进行染色 ● （需更换缓冲液）	● 电泳后无需染色时间   ● 电泳中可观察条带
缺点	● 染色试剂结合导致的DNA浓度差，即   ● 使分子量相同也会使条带在泳道间移动   ● 使用EtBr时，长时间电泳会导致染色 ●   试剂流出凝胶	● 电泳后需染色时间   ● 电泳途中不可观察条带	● 需均匀加入染色试剂
用户推荐	想要快速简便获取结果的用户	想要知道正确结果的用户	想要快速简便获取结果的用户
产品推荐	SAFELOOK™绿色核酸染料/ SAFELOOK™红色核酸染料   溴化乙锭		SAFELOOK™绿色上样染料 (6×)   SAFELOOK™红色上样染料 (6×)

◆产品列表

低致突变性核酸染料SAFELOOK™

产品编号	产品名称	包装
194-18843	SAFELOOK™ Green Nucleic Acid Stain SAFELOOK™ 绿色核酸染料	500 μL
197-18833	SAFELOOK™ Red Nucleic Acid Stain SAFELOOK™ 红色核酸染料	500 μL
199-18153	SAFELOOK™ Load-Green (6×) SAFELOOK™ 绿色上样染料 (6×)	1 mL
196-18163	SAFELOOK™ Load-Red (6×) SAFELOOK™ 红色上样染料 (6×)	1 mL
194-18164		1 mL ×5

溴化乙锭

产品编号	产品名称	包装
315-90051	Ethidium Bromide Solution 溴化乙啶溶液(EB溶液)	10 mL

◆参考文献

大藤道衛 編, 電気泳動なるほどQ&A, 羊土社, 2007

田村隆明 編, ライフサイエンス 試薬活用ハンドブック, 羊土社, 2009

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