抗（6-4）光产物（6-4 PPs）单克隆抗体（克隆：64M-2）

用于研究DNA损伤和修复的DNA损伤抗体

 

◆背景

　　细胞暴露于紫外线（UV）辐射而产生的DNA损伤，在细胞周期停滞，在激活DNA修复，细胞杀伤，突变和肿瘤转化中起着重要作用。由UVB（280-315nm，阳光的组分）和UVC（200-280nm）诱导的DNA损伤的主要类型是cyclobutane pyrimidine dimers环丁烷嘧啶二聚体（CPD）和（6-4）photoproducts光产物（6-4PP），两者是由同一条DNA链上相邻嘧啶核苷酸之间形成的。大约70-80%的UV诱导的DNA损伤是CPDs，剩余的是6-4PPs和6-4PPs的杜瓦异构体引起的。这些类螺旋扭曲的DNA损伤在正常人细胞中通过核苷酸切除修复（NER）系统修复。 Mori等人制备了针对CPD或6-4PPs的特异性单克隆抗体。

　　这些抗体的研制，使我们能够运用ELISA法定量检测从培养细胞或皮肤表皮中纯化的DNA中的光产物，并使用间接免疫荧光（IIF）显示和测量培养的细胞或皮肤中的DNA所包含的光产物。这项技术将有助于在许多研究领域中了解对UV和DNA损伤的细胞应答的分子机制，包括癌症研究，光生物学，皮肤病学，眼科，免疫学和美容学。

 

◆来源

　　杂交瘤是由小鼠骨髓瘤细胞与经过UVC照射小牛胸腺DNA缀合甲基化BSA免疫的Balb / c小鼠脾细胞融合而成。 收集该杂交瘤（克隆TDM-2）培养物上清液，并用冰冷的硫酸铵进行沉淀。 离心后，将溶解在少量双蒸水中的沉淀用PBS透析。 然后将透析液冻干。

 

◆反应性

　　1）抗体结合单链DNA中的6-4PPs。
　　2）抗体结合在每个双嘧啶序列（TT，TC，CT和CC）中形成的6-4PPs。
　　3）抗体稳定地结合在由超过8个碱基组成的寡核苷酸中形成的6-4PPs。

 

◆交叉反应性

　　抗体可以与细菌、人等所有生物的变性DNA中的6-4PPs结合。

 

◆特征

●　与受损DNA特异性反应

●　研究应用，包括ELISA和IC

●　用于研究DNA损伤修复机制

●　显示DNA损伤修复过程

●　适用于广泛的研究领域：光生物学，光学医学，癌症等

 

◆应用

●　免疫细胞化学；1：300
●　ELISA；1：1500
●　免疫印迹； 未测试
●　免疫沉淀；未测试
●　免疫组化；未测试
●　流式细胞术；未测试

 

通过ELISA测量正常人细胞中UV诱导的DNA损伤的诱导和修复

 

免疫荧光显示UV诱导的DNA损伤

 

UV诱导6-4PP及其修复的可视化

以0.2μm比例间隔拍摄25个连续图像重建核的三维图像

◆相关产品

　　Cosmo Bio新的6-4PP（6-4）光产物ELISA试剂盒使用高灵敏度和特异性的单克隆抗6-4PPs抗体克隆64M-2 ，该试剂盒由Mori等人建立。 64M-2在文献中被广泛引用，并且被认为是用于6-4PPs检测和定量的金标准抗体。Cosmo Bio的6-4PPs ELISA试剂盒是使用64M-2的第一个也是唯一的可商购的ELISA试剂盒。所有试剂盒组件均经过优化，可用于在培养细胞或皮肤表皮中高灵敏度CPD检测。