ISOGEN II RNA抽提试剂

ISOGEN II

从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小 RNA 的总 RNA

◆原理

      ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中总 RNA 和小 RNA 的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体，根据与细胞成分的相互作用，能单一地分离 RNA 。
      使用旧产品（ISOGEN 和 ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入 ISOGEN II 溶解或是均质化之后，再添加水，因为 DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀，进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后，能分离出高纯度的 RNA 。

 

 

◆优点・特色

●　不需使用氯仿分离 RNA
●　比起旧产品（ ISOGEN 等），小RNA 的抽提效率更高
●　可以把大 RNA（>200 bases）和小 RNA（<200 bases）分离（同时提供不分离的方案）
●　DNA 污染少，抽提的 RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 RT-qPCR 上
●　约 1 h 可完成 RNA 的抽提

内容和保存条件

产品名称	构成
ISOGEN II	ISOGEN II	100 mL
	使用手册	1本

冷藏保存
请在购买日起６个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后，在２~１０℃条件下保存即可正常使用

产品安全数据图表（MSDS）
ISOGEN II MSDS

使用手册
ISOGEN II 手册

◆案例・应用

操作流程

◆使用例子

Data 1 抽提得到的 RNA 电泳

根据 ISOGEN 和 ISOGEN II 的方案抽提 RNA，进行电泳

M：RNA Ladder (Code No.311-06261）   Lane1：ISOGEN 抽提总 RNA（2 μg）   Lane2：ISOGEN II 抽提总 RNA（2 μg）   Lane3：ISOGEN II 抽提高分子 RNA（2 μg）   Lane4：ISOGEN II 抽提 小RNA（0.2 μg）   1.2% Agarose S（甲醛变性）EtBr 染色

Lane1：ISOGEN 抽提总 RNA（5 μg）   Lane2：ISOGEN II 抽提总 RNA（5 μg）   Lane3：ISOGEN II 抽提高分子 RNA（5 μg）   Lane4：ISOGEN II 抽提小 RNA（0.5 μg）   12% 聚丙烯酰胺（Urea 变性）EtBr 染色

ISOGEN II 能抽提和 ISOGEN 同等的总 RNA

ISOGEN II 能对 200 base 以上的高分子 RNA 和 10~200 base 的小 RNA 进行分离

Data 2 ISOGEN 和 ISOGEN II 抽提的总 RNA 用“3D-Gene”Human miRNA Oligo chip（东来株式会社）分析。

ISOGEN II 比 ISOGEN 能更完整地抽提 miRNA

 

Data 3 RT-PCR

用 ISOGEN 和 ISOGEN II 从 HeLa 细胞中提取出 RNA 并定性，再用 PT-PCR 检测出 β-Actin 基因。同时进行没有经过 RT 反应的对照实验。

1：模板RNA量 500 ng
2：模板RNA量 100 ng
3：模板RNA量 20 mg
M：Gene Ladder 100

实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比，DNA残留更少。

Data 4 RNA 提取量的参考值

分别用 “大 RNA 的提取”和“总 RNA 的提取”方案得到的 RNA 的提取量的参考值如下：

试剂		大 RNA 的提取	总 RNA 的提取
组织	肝脏	5~7 g RNA/mg tissue	6~8 μg RNA/mg tissue
	肾脏、脾脏	3~4 g RNA/mg tissue	3~4 μg RNA/mg tissue
	骨骼肌、脑、肺	0.5~1.5 g RNA/mg tissue	0.5~1.5 μg RNA/mg tissue
	胎盘	1~3 g RNA/mg tissue	1~3 μg RNA/mg tissue
培养细胞	上皮细胞	5~8 g RNA/108 cells	5~10 μg RNA/106 cells
	成纤维细胞	3~5 g RNA/108 cells	4~6 μg RNA/106 cells

◆注意事项

●　本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解。请不要使用。

●　因为 ISOGEN II 是医药用外有害物质（苯酚制剂），所以请小心操作。
●　使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
●　请不要吸入蒸汽，进行充分的通风。
●　如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗至少15分钟，并前往医院就诊。
●　本品的操作请按照手册记载的内容进行
●　对于和手册记载内容不同的操作带来的事故，日本基因不负任何责任。

ISOGENII 使用说明书

参考文献

 

1.	Chomczynski, P. Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending.
2.	Chomczynski, P. and Sacchi, N:Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroformextraction”, Anal. Biochem., 162, 156-159（1987）
3.	Chomczynski, P.:A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques, 15, 532-537(1993)
4.	Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:Effect of pH and ionic strength on thespectrophotometric assessment of nucleic acid purity”, Biotechniques, 22, 474-481(1997)