用于人iPS细胞冻存

StemSure^® hPSC 冻存液，AF

 

StemSure^® hPSC 冻存液，AF 是无动物源成分的人 iPS 细胞用冻存液。本品含 DMSO。

 

◆特点

●　能以高细胞存活率冻存人 iPS 细胞

●　不含动物源成分

●　可以以缓慢冻结的方式进行冻存

●　可用于无饲养层培养的细胞

●　无需进行繁杂的试剂配制

●　无需程序降温

 

 

 

◆人 iPS 细胞冻存步骤

冷 冻	1. 在除去人 iPS 细胞培养皿中的培养液，用 D-PBS（-）清洗后，用 Accutase 等分散细胞。
	2. 添加含有 10 µmol/L Y-27632 的人 iPS 细胞用培养基（hPSC 培养基（+ROCKi）），用移液器吹散成单细胞。
	3. 将吹打分散后的细胞悬浮液移至样本管中，离心（1,000 rpm，３分钟，室温）后，除去上清液。
	4. 添加 hPSC 培养基（+ROCKi），用移液器悬浮。
	5. 计算细胞数，将样本管离心（1,000 rpm，３分钟，室温）后，除去上清液。
	6. 利用本产品使细胞悬浮成 2×106 cells/mL，并以 500 µL/管进行分装。
	7. 在 -80°C 下冷冻后，在 -150°C 或者 -80°C 的条件下保存（长期保存建议保存在 -150°C）。
复 苏	1. 添加 hPSC 培养基（+ROCKi）到冻存瓶中，复苏冷冻细胞。  （使用温水浴复苏冷冻细胞的情况下，只需要半溶解）
	2. 离心（室温下，1,000 rpm，３分钟）后，除去上清液，添加 hPSC 培养基（+ROCKi），使细胞悬浮。
	3. 计算细胞数，以 2×105 cells/6 cm dish的条件接种

◆人iPS细胞201B7株的冻存

确认细胞存活率和细胞增殖率

将培养中的人 iPS 细胞 201B7 株分散成单细胞后，重悬于 StemSure^® hPSC 冻存液，AF 中，在 -80°C下冻存２~４天。

确认冷冻复苏后的细胞存活率和细胞增殖率。反复冷冻复苏５次后，确认细胞、细胞集落的形态和各种未分化标记（Oct3/4、Nanog、BC2LCN）的表达。

确认细胞集落的形态

确认细胞存活率和细胞增殖率

结果表明，用 StemSure^® hPSC 冻存液，AF 冻存的人 iPS 细胞显示出高细胞存活率和细胞增殖率。

另外还确认了各种未分化标记的表达。

 

◆人iPS细胞冻存步骤

使用用 StemSure^® hPSC 冻存液，AF 冷冻复苏５次后的 iPS 细胞 201B7 株，形成胚叶体，βⅢ-Tubulin,α-SMA,AFP 的表达确认其分化成了三胚叶。

（胚叶体形成，三胚叶分化诱导时的培养基组成）

Stemsure D-MEM+SSR+2mol/L L-Glutamine+10mmol/L2-Mercaptoethanol +1×Non-essential Amino Acids Solution

测试项目：外观，应用试验（iPS 细胞 201B7株），无菌试验，内毒素，支原体测试

可用于ES干细胞的冻存液，请点击：StemSure细胞冻存液

通用动物细胞冻存液，请点击：CultureSure无血清细胞冻存液