StemSure® 细胞冻存液
人iPS细胞·小鼠 ES 细胞冻存用
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- 参考文献
人iPS 细胞·小鼠 ES 细胞冻存用
StemSure® 细胞冻存液 Update!!
本产品是可用于冻存以小鼠 ES 细胞为代表的各种通用细胞株的无血清型细胞冻存液。含 BSA 和 10% DMSO 。标准测试中用小鼠 ES 细胞 D3 株冻存、复苏,确认其细胞存活率。本产品采用缓慢冻存法冻存细胞,无需使用程序降温盒。
使用本产品对小鼠 ES 细胞 D3 株在 -80℃ 进行保存,可冻存2年;普通细胞在 -150℃ 下可冻存 30 个月,并且可维持很高的存活率。
另外,本产品已确认可用于冻存人 iPS 细胞。
◆特点
● 可在维持人 iPS 细胞、小鼠 ES 细胞未分化能力的状态下,直接进行冻存。
● 可在 -80℃ 下进行长时间冻存。
● 冻存的通用动物细胞株的细胞存活率好。
● 无血清型
● 无需自行配制试剂
● 无需使用程序降温盒
◆测试项目
● 细胞存活率时间(使用小鼠 ES 细胞 D3 株进行实验)
● 无菌实验
● 内毒素实验
● 支原体实验
◆使用方法
人 iPS 细胞的冻存
1. 冻存
① 去除人 iP S细胞培养皿中的营养液,用 PBS 清洗后,用 Accutase 等剥离细胞。
② 添加含有 10 μmol/L Y-27632的人 iPS 培养基(hPSC 培养基(+ROCKi)),用移液器吹打成单细胞。
③ 将吹打分散的细胞悬浮液移至样本管,离心(1,000 rpm,3 min,室温)后去除上清液。
④ 添加含 hPSC 培养基(+ROCKi)的培养基,用移液器悬浮。
⑤ 计算细胞数量。
⑥ 以1×106 cells/管分注在细胞悬浮液保存管中。
⑦ 离心(1,000 rpm,3 min,室温)后去除上清液。
⑧ 使用 50 μL/管本产品进行悬浮,在 -80℃ 下进行冻存。
2. 复苏
① 在冻存管中添加 hPSC 培养基(+ROCKi),复苏冻结细胞(不使用温水浴法)。
② 离心(1,000 rpm,3 min,室温)后去除上清,再次添加 hPSC 培养基(+ROCKi),悬浮。
③ 计算细胞数量。
④ 在培养皿中按照2×105 cells/6 cm 进行细胞培养。
小鼠ES细胞、通用动物细胞株的冻存
1. 冻存
① 收集细胞至样本管中。
② 离心,去除上清。
③ 在样本管中加入本产品,悬浮。
④ 分注至悬浮液保存管中。
⑤ 将保存管在-80℃冻洁一晚。
⑥ 保存于-150℃或-80℃
2. 复苏
① 将冻存管置于37℃的水浴槽中解冻。
② 在培养用的培养基中进行悬浮。
③ 离心去除上清后用培养基进行重悬。
④ 在培养容器内培养细胞。
◆人iPS 细胞 201B7 细胞系的冻存 Update!!
将人 iPS 细胞 201B7 株分散为单细胞后,在 StemSure® 冻存液中悬浮,并在-80℃下冻存4天。反复冻结、复苏3次之后,确认细胞存活率和各种未分化标记(Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81)的表达。
细胞生存率
未分化标记表达的确认
◆小鼠 ES 细胞 D3 细胞系的冻存
-150℃保存(30个月)
-80℃保存(24个月)
<冻存>
① 在 1 mL本产品中悬浮1~2×106 cells,分注至冻存管中。
② 在 -80℃冻存1天后转移至-150℃冻存。或者在-80℃冻存。
<复苏>
③ 在37℃的温浴槽中复苏。
④ 在细胞培养基中悬浮、离心。
⑤ 弃上清,用细胞培养基重悬细胞并进行培养。
○确认细胞集落形成
培养细胞数:500个细胞/孔(含胶原蛋白涂层的6孔板)
培养时间:10天
◆冻存通用动物细胞系后的细胞存活率
用 StemSure® 细胞冻存液冻存各种动物细胞株。可确认到冻存30个月后仍维持高存活率,且复苏后细胞可移植。
细胞种类 |
存活率(%) |
细胞移植 |
||
2个月 |
4个月 |
30个月 |
||
人 |
||||
HeLa |
97 |
93 |
97 |
○ |
293T |
96 |
95 |
95 |
○ |
K562 |
91 |
84 |
84 |
○ |
灵长类 |
||||
COS-7 |
97 |
93 |
92 |
○ |
Vero |
95 |
94 |
91 |
○ |
狗 |
||||
MDCK |
98 |
99 |
100 |
○ |
小鼠 |
||||
NIH/3T3 |
93 |
93 |
89 |
○ |
P19 |
93 |
76 |
77 |
○ |
STO |
90 |
91 |
91 |
○ |
L929 |
94 |
90 |
91 |
○ |
仓鼠 |
||||
CHO |
97 |
96 |
98 |
○ |
<冻存>
① 在 1 mL本品中悬浮 1~2×106 cells,分注至冻存管中。
② 在-80℃冻存1天后转移至-150℃分别冻存2个月、4个月、30个月。
<复苏>
③ 在37℃的水浴槽中复苏。
④ 细胞培养用培养基中悬浮、离心。
★其他冻存液★
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
容量 |
031-24051 |
CultureSure™ DMSOCultureSure™ 二甲基亚砜 |
细胞培养用 |
10 mL×10 |
039-23511 |
CultureSure™ Freezing Medium |
细胞培养用 |
10 mL |
◆相关产品
★StemSure® 系列★
本系列产品适用于培养 ES 细胞和 iPS 细胞。每个批次产品都适用小鼠 ES 细胞 D3 细胞系进行品质实验检测。
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
容量 |
197-16275 |
StemSure® D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate |
细胞培养用 |
500 mL |
191-18375 |
Stemsure® Serum Replacement |
细胞培养用 |
500 mL |
198-15781 |
StemSure® 10 mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution ( × 100) |
细胞培养用 |
100 mL |
195-15791 |
StemSure® 50 mmol/L Monothioglycerol Solution ( × 100) |
细胞培养用 |
100 mL |
190-15805 |
StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution |
细胞培养用 |
500 mL |
199-16051 |
StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution |
细胞培养用 |
106 units |
195-16053 |
StemSure® LIF, Mouse,recombinant, Solution |
细胞培养用 |
106 units×10 |
★rBC2LCN-FITC★
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无动物源成分的干细胞冻存液,请点击:StemSure® hPSC冻存液, AF
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
195-16031 | StemSure Freezing Medium StemSure细胞冻存液 |
100 mL | – | – |