PUREfrex^® 1.0

PUREfrex^® 无细胞蛋白合成试剂盒

自2022年12月起，PUREfrex^® 试剂盒内的Solution Ⅰ的原材料已更换，具体详情请点击：PUREfrex^® 系列试剂盒部分组成及制备方法变更通知

PUREfrex^® 1.0是基于PURE system开发的无细胞蛋白合成试剂盒，由转录、翻译、能量回收所需的蛋白和核糖体组成。除活性蛋白表达以外，还可广泛用于display技术和翻译机制的研究等。

PUREfrex^® 1.0不含分子伴侣。因此，根据合成蛋白不同，可能无法形成正确的高阶结构，合成的蛋白也可能不溶于水。这时，只需在蛋白合成时添加分子伴侣即可解决。GeneFrontier也推出了适用于本试剂盒的分子伴侣DnaK mix（#PF003-0.5）和GroE mix（#PF004-0.5）。

PUREfrex^® 1.0含有DTT（反应液中的最终浓度为2mM），可在还原条件下进行蛋白合成反应。合成需要形成二硫键（SS键：ss-bond或二硫桥：disulfide bridge）的蛋白时，建议添加DsbC Set (#PF005-0.5)或PDI Set (#PF006-0.5)使用。

◆产品组成

PUREfrex^®1.0中各Solution成分详情点击此处下载。

250 µL反应用

	产品规格	产品成分	开封后的储存温度 *1
Solution Ⅰ	125 μL	氨基酸、NTP、tRNA、 酶底物等。	-20℃
Solution Ⅱ	12.5 μL	蛋白（30%甘油溶液）	-20℃或-80℃ *2
Solution Ⅲ	12.5 μL	核糖体（20 µM）	-80℃ *2
DHFR DNA *3 碱基序列	10 μL	含大肠杆菌DHFR基因的 PCR 产物(20 ng/μL)	-20℃

2 mL 反应用

	产品规格	产品成分	开封后的储存温度*1
Solution Ⅰ	1,000 μL	氨基酸、NTP、tRNA、 酶底物等。	-20℃
Solution Ⅱ	100 μL	蛋白（30%甘油溶液）	-20℃或-80℃ *2
Solution Ⅲ	100 μL	核糖体（20 µM）	-80℃ *2
DHFR DNA *3 碱基序列	10 μL	含大肠杆菌DHFR基因的 PCR产物(20 ng/μL)	-20℃

*1）试剂盒开封前，请在-80℃条件下储存。

*2）在-80°C条件下储存使用后的剩余反应溶液时，应在储存前使用液氮或干冰/乙醇等进行速冻。请根据需求进行分装，避免反复冻融。

*3）当用作蛋白合成的阳性对照时，请在20 µL合成反应液中添加1 µL DHFR DNA。

◆使用方法

使用PUREfrex^®1.0 时，可在任意体积的反应液下进行蛋白合成。例如，20 μL时的制备方法如下所示。

1.  将Solution Ⅰ在室温~37℃下加热1 min左右至完全融解，随后置于冰上。

2.  将Solution Ⅱ和Solution Ⅲ置于冰上融解。

3.  将融解的SolutionⅠ，Ⅱ，Ⅲ轻轻涡旋后，离心并收集试管底部的内容物。

4.  请根据以下配比制备反应液。（DNA 添加量为每kbp 0.5-3 ng/ μL）

RNase-Free Water	8-X μL
Solution Ⅰ	10 μL
Solution Ⅱ	1 μL
Solution Ⅲ	1 μL
模板DNA 注1	X μL
Total	20 μL

5．在37°C的加热块或水浴中反应 2~4 h，合成蛋白^注2。

6．合成的蛋白可用于多种用途^注3。

注意事项

注1） 模板DNA请根据目标蛋白自行制备。关于制备方法，请参阅“关于模板DNA”。

注2） 如果在气相恒温槽（如培养用恒温器）中进行反应，反应液的温度上升需花费更多的时间，合成量会有所降低

注3） 通过SDS-PAGE确认合成时，请用水稀释反应液后进行电泳。详情请点击“PUREfrex反应液的SDS-PAGE”查看。

◆使用注意事项

PUREfrex^® 为研究用试剂，不可用于包含人在内的动物给药、临床和诊断等其他用途。此外，请勿用于食品或家庭用途。

使用 PUREfrex^® 时，请使用不含RNase的水、试剂和设备。 此外，建议佩戴手套和口罩。

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