2-脱氧葡萄糖(2DG)摄入检测试剂盒

 

 

 

◆原理

 

检测原理：

细胞摄入2DG后，经过细胞内生化酶的催化，通过检测产生的NADPH进行研究。

 

      所有反应步骤都只需在同一个孔内添加预混试剂，即可实现自动化操作。

●　为减少葡萄糖代谢的影响，只需少量2DG加入活细胞中。通过细胞代谢将2DG转化转化为2DG6P。

●　2DG6P在被氧化的过程中会产生NADPH，通过检测NADPH的量来测定2DG6P的含量。

 

本试剂盒与RI法的比较：

 

 

◆优点・特色

 

●　检测培养细胞的2DG摄入量
●　无需RI，只需使用酶标仪即可进行检测
●　不受细胞外2DG的影响。
●　使用酶循环法，灵敏度高，可检测至pmol级水平
●　适用于96孔细胞培养板
●　无需漂洗步骤，可实现自动化

 

 

◆案例・应用

 

【案例1】用已知2DG6P浓度的溶液进行检测。

【案例2】3T3-L1细胞摄入2DG后实验结果。

 

【案例3】人脂肪细胞摄入2DG后实验结果。

Q：    试剂盒能否用于微生物葡萄糖2-DG摄取检测？是否有微生物实验的例子？
A：    很抱歉，我们没有做过微生物2-Deoxyglucose摄入检测，所以我们没有相关案例。
    
Q：    是否有大肠杆菌葡萄糖摄取的数据？
A：    "很抱歉，我们没有做过大肠杆菌2-Deoxyglucose摄入检测；
          请注意，细菌摄入2-Deoxyglucose以deoxyglucose-6-phosphate前体的形式保留在体内。如果您有相关

          实验的经验或者信息，可以使用该试剂盒检测。"
    
Q：    该试剂盒需要使用何种类型的96孔板？白色板或透明板？
A：    请用透明板。其他没有特殊要求。
    
Q：    如何分析2DG检测数据？标准曲线的单位是mM,但是操作手册中的案例是pM/孔？
A：    2DG6P的总量在试剂盒中使用摩尔浓度表示。如果您需要了解案例的计算及检测，请联系我们。
    
Q：    关于超声波处理这一步，能告诉我相关参数设置吗？
A：    "该试剂盒以细胞内2DG6P的含量来检测细胞葡萄糖摄取量。
          操作说明中P6（9），提到通过超声波破破碎得到细胞裂解液，其具体的参数设置，是根据仪器型号而定

          的。请根据说明书中的建议设置参数。如果您无法确认，请在显微镜下观察细胞的破坏程度。"
    
Q：    是否有进行过肿瘤细胞和肿瘤的检测？
A：    我们没有进行相关测试。
    
Q：    是否进行过动物体内肿瘤2DG摄取检测？我想要移植肿瘤，并观察他们葡萄糖摄取情况。
A：    "很抱歉，我们没有进行过体内肿瘤的葡萄糖摄取实验。我们目前正在积极开发此类体内实验用的试剂盒。
          据报道，有些客户调整了实验方法，如添加己糖激酶用于体内实验。但我们并未建立标准的体内操作手册，

          需要您根据情况优化条件。"
    
Q：    "关于2DG摄入检测试剂盒，使用时能够将试剂量减半吗？（如说明书中每样200 uL改为100 uL）
          这样会对实验结果产生什么影响？"
A：    "我们不能保证试剂量减半后，实验结果的准确性，因为反应程度和仪器都会对此产生影响。
          为了保证检查结果的稳定性，我们建议您按照说明书操作。"
    
Q：    能否提供2DG摄入试剂盒内的 1 mM 2DG6的溶剂？
A：    我们无法告知您这些特殊组分，但是1 mM 2DG是溶于蒸馏水中的。
    
Q：    A溶液的组分是什么？
A：    很抱歉，我们无法告知您试剂的组成。
    
Q：    操作要求用使用超声波裂解细胞，但是我们实验室没有这台仪器。请问可以使用其他替代法吗？
A：    "如果没有超声仪，可用跟其他方法裂解细胞。
          用少量TritonX-100 （1％），进行10-20稀释。使用该稀释液处理样品。可能您觉得稀释比例过高，这是

          因为溶解后由于表面活性剂的关系体积会减少1~2 mL，标准的超声波处理是3 mL。因此样品的终浓度和超

          声处理是相同的。
          请不要使用SDS作为表面活性剂，会抑制系统反应。"
    
Q：    关于细胞裂解缓冲液的问题：缓冲液成分除了的Tris-HCl和Triton100-X外，能够含有氯化钠和螯合剂吗？

          还是需要将这些成分去除？
A：    我们不建议您添加氯化钠和螯合剂，因为当这些试剂的浓度增加时，会对体系反应产生负面影响。
    
Q：    2-DG试剂盒检测能够用于成熟脂肪细胞吗？悬浮细胞有影响吗？
A：    "该试剂盒可用于检测成熟脂肪细胞检测；由于该细胞非常容易从培养板上剥离，所以保持细胞的自然状态

          即可。用该试剂盒检测成熟脂肪细胞时，细胞是否悬浮对检测没有影响。
          但是，成熟脂肪细胞不容易离心，如果强力离心会对细胞造成损失。所以小心处理。如果您担心离心会对

          细胞造成损伤，可选择如下方法：将培养板包被I型胶原或者纤连蛋白，增强成熟脂肪细胞的粘附性。"