LabAssay™ NEFA
LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒
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LabAssay™ NEFA
LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒
在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游离脂肪酸）与白蛋白结合，被转运至外周组织，成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。
本产品采用了基于酰基辅酶A合成酶（ACS）、酰基辅酶A氧化酶（ACOD）和3-甲基-N-乙基-N-（β-羟乙基）-苯胺（MEHA）的蓝紫色显色酶法。不可用于体外诊断。
◆检测原理
样品中的游离脂肪酸（NEFA）在酰基辅酶A（Acyl-CoA）和腺苷- 5'-三磷酸二钠（ATP）存在下，通过酰基辅酶A合成酶（ACS）的作用，生成酰基辅酶A、AMP以及焦磷酸（PPi）。生成的酰基辅酶A在酰基辅酶A氧化酶（ACOD）的作用下被氧化，同时生成2,3-反式烯酰辅酶A（2,3-trans-Enoyl-CoA）和过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下，与3-甲基-N-乙基-N-（β-羟乙基）-苯胺（MEHA）和4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine）进行定量氧化缩合，生成蓝紫色色素。通过测定这种蓝紫色的吸光度，即可计算样品中的NEFA浓度。
◆性能
● 标准曲线范围：0.4～1.97 mEq/L
● 检测时间：约 20 min
● 样品：血清、血浆（小鼠、大鼠、人、犬、猫）
● 所需样品量：4 μL
● 测定波长：550 nm
◆试剂盒组成
１．显色剂A——10 mL用×4瓶
２．显色剂A溶解液——45 mL×1瓶
３．显色剂B——20 mL用×4瓶
４．显色剂B溶解液——90 mL×1瓶
５．标准溶液（油酸1 mEq/L）——7 mL×1瓶
５． ※ 油酸1 mEq/L=1 mmol
◆标准曲线示例
◆检测操作方法
微孔板法
按下表条件进行反应。
|
No. |
标准溶液 | 蒸馏水或去离子水 | 样品量 | 浓度 |
| 1 | 80 µL | 120 µL | 4 μL | 0.40 mEq/L |
| 2 | 120 µL | 80 µL | 4 μL | 0.60 mEq/L |
| 3 | 160 µL | 40 µL | 4 μL | 0.80 mEq/L |
| 4 | 未经稀释 | – | 4 μL | 1.00 mEq/L |
| 5 | 未经稀释 | – | 8 μL | 1.97 mEq/L*1 |
*1：样品量通常是4 μL, 但在这里使用了8 μL。NEFA的浓度需要根据上表校正。
|
Test |
标准 |
空白对照 |
样品盲检＊２ |
|
|
显色试剂 A |
80 μL |
80 μL |
80 μL |
80 μL |
|
待测物 |
血清 4 μL |
标准溶液 4 μL |
蒸馏水或去离子水 4 µL |
― |
|
充分混合＊3、37 ℃加热10 min。 |
||||
|
显色试剂 B |
160 μL |
160 μL |
160 μL |
160 μL |
|
待测物 |
― |
― |
― |
血清 4 μL |
|
充分混合＊3、37 ℃加热10 min。 |
||||
|
恢复至室温，在30 min内以空白作为对照，测定样品和标准溶液的吸光度。 |
||||
|
550 nm 吸光过滤 |
||||
*2：普通的样品无需样品盲检。请使用乳糜血清或溶血血清进行测试。
*3：使用板式搅拌机，在600~1000 rpm下搅拌1 min左右。
◆加标回收测试
NEFA的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。
人样品
|
人样品 |
添加量（mEq/L） |
测定值（mEq/L） |
回收量（mEq/L） |
回收率（%） |
|
血清样品 |
– |
0.69 |
||
|
0.4 |
1.14 |
0.45 |
111.80% |
|
|
0.61 |
1.34 |
0.64 |
105.70% |
|
|
0.78 |
1.54 |
0.85 |
108.50% |
|
|
1.01 |
1.73 |
1.03 |
102.30% |
|
|
血浆（EDTA） 样品 |
– |
0.28 |
||
|
0.4 |
0.7 |
0.43 |
105.30% |
|
|
0.61 |
0.9 |
0.62 |
102.50% |
|
|
0.78 |
1.12 |
0.84 |
106.80% |
|
|
1.01 |
1.34 |
1.06 |
105.40% |
小鼠样品
|
小鼠样品 |
添加量（mEq/L） |
测定值（mEq/L） |
回收量（mEq/L） |
回收率（%） |
|
血清样品 |
– |
0.7 |
||
|
0.4 |
1.07 |
0.37 |
91.70% |
|
|
0.61 |
1.31 |
0.61 |
100.10% |
|
|
0.78 |
1.44 |
0.74 |
94.50% |
|
|
1.01 |
1.62 |
0.92 |
91.30% |
|
|
血浆（EDTA） 样品 |
– |
0.62 |
||
|
0.4 |
0.99 |
0.37 |
92.50% |
|
|
0.61 |
1.29 |
0.68 |
111.50% |
|
|
0.78 |
1.38 |
0.77 |
97.80% |
|
|
1.01 |
1.62 |
1 |
99.10% |
大鼠样品
|
大鼠样品 |
添加量（mEq/L） |
测定值（mEq/L） |
回收量（mEq/L） |
回收率（%） |
|
大鼠血清样品 |
– |
0.57 |
||
|
0.4 |
1 |
0.43 |
106.40% |
|
|
0.61 |
1.21 |
0.65 |
106.20% |
|
|
0.78 |
1.4 |
0.83 |
106.40% |
|
|
1.01 |
1.57 |
1.01 |
99.70% |
|
|
大鼠血浆 （EDTA）样品 |
– |
0.41 |
||
|
0.4 |
0.86 |
0.45 |
111.50% |
|
|
0.61 |
1.07 |
0.66 |
108.50% |
|
|
0.78 |
1.27 |
0.86 |
109.50% |
|
|
1.01 |
1.44 |
1.02 |
101.40% |
培养基样品
|
样品 |
添加量（mEq/L） |
测定值（mEq/L） |
回收量（mEq/L） |
回收率（%） |
|
50%培养基 +标准品 |
– |
0.03 |
– |
– |
|
0.374 |
0.409 |
0.38 |
101.60% |
|
|
0.683 |
0.71 |
0.68 |
99.60% |
|
|
0.829 |
0.812 |
0.782 |
94.40% |
|
|
1.013 |
1.059 |
1.03 |
101.70% |
◆样品检测示例
人血清样本
|
测定值（mEq/L） |
mean |
SD |
CV（%） |
||
|
混合人血清，男性 |
0.686 |
0.688 |
0.687 |
0.001 |
0.2 |
|
混合人血浆 （K2EDTA），男性 |
0.354 |
0.35 |
※0.352 |
0.003 |
0.8 |
※参考值
20%稀释CD-1（ICR）雄性小鼠正常血清
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
1.119 |
1.117 |
1.118 |
0.001 |
0.1 |
|
2 |
0.783 |
0.793 |
0.788 |
0.007 |
0.9 |
|
3 |
0.7 |
0.731 |
0.715 |
0.022 |
3.1 |
|
4 |
0.795 |
0.792 |
0.794 |
0.002 |
0.2 |
|
5 |
0.825 |
0.833 |
0.829 |
0.005 |
0.6 |
100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血浆（K2EDTA）
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
0.311 |
0.308 |
※0.309 |
0.002 |
0.6 |
|
2 |
0.319 |
0.321 |
※0.320 |
0.002 |
0.6 |
|
3 |
0.202 |
0.208 |
※0.205 |
0.004 |
2 |
|
4 |
0.173 |
0.185 |
※0.179 |
0.008 |
4.6 |
|
5 |
0.293 |
0.318 |
※0.305 |
0.017 |
5.6 |
※参考值
10％稀释雄性Sprague Dawley大鼠正常血清
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
|
|
1 |
0.3 |
0.3 |
※0.300 |
0 |
0 |
|
2 |
0.373 |
0.368 |
※0.371 |
0.004 |
1.1 |
|
3 |
0.301 |
0.277 |
※0.289 |
0.017 |
5.8 |
|
4 |
0.365 |
0.364 |
※0.365 |
0 |
0.1 |
|
5 |
0.403 |
0.362 |
※0.382 |
0.029 |
7.6 |
※参考值
100％雄性Sprague Dawley大鼠正常血浆（K2EDTA）
|
样品批次 |
测定值（mEq/L） |
Mean |
SD |
CV（%） |
|
|
RAT432145 |
0.336 |
0.33 |
※0.333 |
0.004 |
1.2 |
|
RAT432146 |
0.358 |
0.354 |
※0.356 |
0.003 |
0.8 |
|
RAT432147 |
0.311 |
0.339 |
※0.325 |
0.02 |
6 |
|
RAT432148 |
0.222 |
0.214 |
※0.218 |
0.005 |
2.6 |
|
RAT432149 |
0.522 |
0.508 |
0.515 |
0.01 |
1.9 |
※参考值
◆样品检测示例
100%雄性比格犬正常血清
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
年龄 |
|
|
1 |
0.654 |
0.657 |
0.656 |
0.0027 |
0.4 |
4 |
|
2 |
0.642 |
0.688 |
0.665 |
0.032 |
4.8 |
6 |
|
3 |
0.419 |
0.431 |
0.425 |
0.009 |
2 |
6 |
|
4 |
0.377 |
0.383 |
※0.38 |
0.0057 |
1.5 |
11 |
|
5 |
0.887 |
0.877 |
0.882 |
0.007 |
0.8 |
12 |
|
6 |
0.604 |
0.595 |
0.599 |
0.006 |
1.1 |
6 |
|
7 |
0.987 |
1.025 |
1.006 |
0.0267 |
2.7 |
10 |
|
8 |
0.501 |
0.51 |
0.506 |
0.006 |
1.2 |
4 |
※参考值
100%雄性比格犬正常血浆（EDTA）
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
年龄 |
|
|
1 |
0.44 |
0.444 |
0.442 |
0.0033 |
0.7 |
4 |
|
2 |
0.419 |
0.435 |
0.427 |
0.011 |
2.6 |
6 |
|
3 |
0.311 |
0.306 |
※0.308 |
0.0037 |
1.2 |
10 |
|
4 |
0.47 |
0.487 |
0.478 |
0.0123 |
2.6 |
12 |
|
5 |
0.472 |
0.475 |
0.473 |
0.005 |
1 |
6 |
|
6 |
0.37 |
0.364 |
※0.367 |
0.0047 |
1.2 |
11 |
|
7 |
0.789 |
0.77 |
0.78 |
0.0133 |
1.7 |
10 |
|
8 |
0.439 |
0.384 |
0.411 |
0.0387 |
9.4 |
12 |
※参考值
100% 雄性短毛猫正常血清
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
年龄 |
|
|
1 |
0.709 |
0.726 |
0.717 |
0.0117 |
1.6 |
3 |
|
2 |
0.628 |
0.642 |
0.635 |
0.01 |
1.6 |
3 |
|
3 |
1.004 |
1.003 |
1.004 |
0.0053 |
0.5 |
6 |
|
4 |
0.974 |
0.987 |
0.981 |
0.0093 |
0.9 |
4 |
|
5 |
0.624 |
0.649 |
0.636 |
0.017 |
2.7 |
6 |
|
6 |
1.175 |
1.212 |
1.193 |
0.0267 |
2.3 |
6 |
|
7 |
1.086 |
0.959 |
1.022 |
0.0893 |
8.8 |
1 |
|
8 |
0.371 |
0.393 |
※0.382 |
0.0157 |
4.1 |
1 |
※参考值
100％雄性短毛猫正常血浆（EDTA）
|
序号 |
测定值（mEq/L） |
Mean（mEq/L） |
SD |
CV（%） |
年龄 |
|
|
1 |
1.092 |
1.107 |
1.099 |
0.0103 |
0.9 |
0.5 |
|
2 |
0.177 |
0.172 |
※0.174 |
0.0033 |
2 |
1 |
|
3 |
0.243 |
0.24 |
※0.241 |
0.0043 |
1.7 |
3 |
|
4 |
0.32 |
0.319 |
※0.320 |
0.0067 |
2.2 |
0.5 |
|
5 |
0.363 |
0.354 |
※0.359 |
0.006 |
1.7 |
3 |
|
6 |
0.206 |
0.189 |
※0.197 |
0.012 |
6.2 |
3 |
|
7 |
0.232 |
0.199 |
※0.215 |
0.024 |
11.1 |
0.5 |
|
8 |
0.142 |
0.12 |
※0.131 |
0.016 |
12.3 |
1 |
※参考值
◆稀释线性度测试
 |
 |
 |
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参考文献
|
1） |
Kobayashi, Y. et al. : J. Pharmacogn. Nat. Prod., online (2015). Effects of Morus alba L. (Mulberry) Leaf Extract in Hypercholesterolemic Mice on Suppression of Cholesterol Synthesis |
|
2） |
Gao, F. et al. : Evid. Based Complement. Alternat. Med., 2015, 801291 (2015).Effect of Keishibukuryogan on Genetic and Dietary Obesity Models |
|
3） |
Ogawa, K. et al. : Reprod. Med. Biol., online (2018). Non-esterified fatty acid-associated ability of follicular fluid to support porcine oocyte maturation and development |
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4） |
Wang, F. et al. : J. Mol. Endocrinol., 52, 133 (2014). LGR4 acts as a link between the peripheral circadian clock and lipid metabolism in liver |
|
5） |
Uchida, K. et al. : Exp. Anim., 58, 181 (2009). Hyperlipidemia and hyperinsulinemia in the spontaneous osteoarthritis mouse model, STR/Ort |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 633-52001 | LabAssay™ NEFA LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒 |
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