高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒
Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive
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- 参考文献
高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒
Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive
脑源性神经营养因子（BDNF: Brain-derived neurotrophic factor）是大脑中丰富的神经营养因子之一，参与神经发生、神经保护和突触形成等。此外，它还有望作为抑郁症等精神疾病的生物标志物。
BDNF的前体proBDNF经加工，成为Mature BDNF（mBDNF）。据报告，proBDNF和mBDNF拥有不同的生理活性，因此，区分和检测每种BDNF非常重要。
高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒Wako可高灵敏度检测样品中的mBDNF。采用发光检测系统，灵敏度是显色检测系统mBDNF ELISA试剂盒（产品编号：296-83201）的约35倍。因此，可以检测传统试剂盒难以检测的小鼠血清、血浆和人唾液中的mBDNF。此外，与proBDNF的交叉性也比现有产品低，可特异性检测mBDNF。
| 通知 |
|
本试剂盒为“高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒（产品编号：298-83901，以下称旧款试剂盒）”的改良试剂盒。旧款产品已于2023年6月 30日终止销售。 相比旧款试剂盒，本产品可更高灵敏度地检测mBDNF，并且两款试剂盒的检测值具有相关性。推荐使用过旧款试剂盒的客户继续使用本试剂 盒。 |
◆特点
● 高灵敏度检测mBDNF
标准曲线的下限值为0.116 pg/mL，可检测传统试剂盒难以检测的小鼠血清、血浆和人唾液中的mBDNF。
● 与proBDNF几乎无交叉，可特异性检测mBDNF
与人proBDNF的交叉率为1.30%，与小鼠proBDNF的交叉率为0.328%。
表1 比较FUJIFILM Wako试剂盒和传统试剂盒
|
本试剂盒 |
FUJIFILM Wako |
A公司试剂盒 |
B公司试剂盒 |
C公司试剂盒 |
|
|
标准曲线下限值 |
0.116 pg/mL |
4.1 pg/mL |
62.5 pg/mL |
15.6 pg/mL |
15.0 pg/mL |
|
与人proBDNF的交叉率 |
1.30 % |
约10 ％ |
约10 % |
约15 % |
约50 % |
◆试剂盒组成
|
96次用 |
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抗体包被酶标板 |
1 plate |
|
Mature BDNF标准品 （冻干品） |
1支 |
|
缓冲液 |
60 mL |
|
生物素标记抗体（冻干品） |
1支 |
|
HRP-Streptavidin溶液 |
100 μL |
|
发光试剂 1 |
6 mL |
|
发光试剂 2 |
6 mL |
|
清洗液(10x) |
100 mL |
|
封板膜 |
4 张 |
◆检测原理
本试剂盒使用mBDNF的N端断面特异性单克隆抗体与BDNF单克隆抗体组合而成的夹心法ELISA。通过使用Mature BDNF的N端断面识别抗体，抑制与proBDNF的交叉反应性，并使用发光底物提高了灵敏度。
◆试剂盒性能
| 标准曲线范围 | 0.116 – 50 pg/mL |
| 检测对象 | Mature BDNF |
| 检测对象样品 | 人：血清/血浆/唾液 小鼠：血清/血浆/脑匀浆 大鼠：血清/血浆 |
| 所需样品量 | 13 μL（4倍稀释时） |
| 检测时间 | 约4 h |
| 检测法 | 发光系统（需要发光检测用读取器） |
◆标准曲线示例
◆检测数据
加标回收测试
人
|
样品 |
添加量 |
检测值 |
回收量 |
回收率（%） |
|
唾液 |
0 |
0.386 |
－ |
－ |
|
0.5 |
0.875 |
0.489 |
97.8 |
|
|
5 |
5.47 |
5.08 |
102 |
|
|
30 |
30.1 |
29.7 |
99 |
|
|
平均 |
99.6 |
|||
|
血清 |
0 |
5.74 |
－ |
－ |
|
0.5 |
6.21 |
0.47 |
94 |
|
|
5 |
10.9 |
5.16 |
103 |
|
|
30 |
35.7 |
30 |
100 |
|
|
平均 |
99 |
|||
|
血浆 |
0 |
4.27 |
－ |
－ |
|
0.5 |
4.78 |
0.51 |
102 |
|
|
5 |
9.53 |
5.26 |
105 |
|
|
30 |
34.4 |
30.1 |
100 |
|
|
平均 |
102 |
|||
小鼠
|
样品 |
添加量 |
检测值 |
回收量 |
回收率（%） |
|
血清 |
0 |
0.646 |
－ |
－ |
|
0.5 |
1.11 |
0.464 |
92.8 |
|
|
5 |
5.38 |
4.73 |
94.6 |
|
|
30 |
30.7 |
30.1 |
100 |
|
|
平均 |
95.8 |
|||
|
血浆 |
0 |
0.116 |
－ |
－ |
|
0.5 |
0.614 |
0.498 |
99.6 |
|
|
5 |
4.78 |
4.66 |
93.2 |
|
|
30 |
32.2 |
32.1 |
107 |
|
|
平均 |
99.9 |
|||
大鼠
|
样品 |
添加量 |
检测值 |
回收量 |
回收率（%） |
|
血清 |
0 |
0.86 |
－ |
－ |
|
0.5 |
1.33 |
0.47 |
94 |
|
|
5 |
6.03 |
5.17 |
103 |
|
|
30 |
28.5 |
27.6 |
92 |
|
|
平均 |
96.3 |
|||
|
血浆 |
0 |
0.767 |
－ |
－ |
|
0.5 |
1.26 |
0.493 |
98.6 |
|
|
5 |
5.95 |
5.18 |
104 |
|
|
30 |
28.4 |
27.6 |
92 |
|
|
平均 |
98.2 |
|||
稀释线性测试
人
|
|
|
|
小鼠
|
|
|
大鼠
|
|
|
与其他相似蛋白的交叉率
确认与proBDNF和神经营养因子家族（NGF、NT-3和NT-4）之间的交叉性。
|
生物种类 |
蛋白 |
交叉率(%) |
|
人 |
proBDNF |
1.3 |
|
NGFβ |
< 0.232 |
|
|
NT-3 |
< 0.232 |
|
|
NT-4 |
< 0.232 |
|
|
小鼠 |
proBDNF |
0.328 |
|
NGFβ |
< 0.232 |
|
|
NT-3 |
< 0.232 |
|
|
NT-4 |
< 0.232 |
【结果】
可以确认与proBDNF和神经营养因子家族（NGF、NT-3和NT-4）几乎没有交叉。
野生型和BDNF敲除小鼠脑匀浆的检测
为确认对BDNF的特异性，使用本试剂盒检测野生型小鼠和BDNF敲除小鼠脑匀浆中的mBDNF。
【结果】
BDNF敲除小鼠的检测值非常低，可确认对BDNF的特异性高。
◆产品列表
|
产品编号 |
产品名称 |
产品规格 |
产品等级 |
|
290-85801 |
Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive |
96次 |
免疫化学用 |
相关产品
|
产品编号 |
产品名称 |
产品规格 |
产品等级 |
|
296-83201 |
Mature BDNF ELISA Kit Wako |
96次 |
免疫化学用 |
|
017-28071 |
Anti BDNF, Monoclonal Antibody(2D7) |
100 μL |
免疫化学用 |
|
014-28081 |
Anti BDNF, Monoclonal Antibody(3C8) |
100 μL |
免疫化学用 |
|
019-28411 |
Anti proBDNF, Monoclonal Antibody(3C10H) |
100 μL |
免疫化学用 |
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FAQ
◆关于样品
|
Q1. |
如何储存样品？ |
|
A1. |
长期存储样品建议在-80℃以下冻存。 |
|
Q2. |
采集唾液样品的推荐方法？ |
|
A2. |
采集检测用的唾液推荐使用流涏法。流涏法是通过将唾液滴入小瓶或试管来收集样品的方法。 已确认使用棉花和灭活的聚合物材料制的棉签采集的样品，检测结果与流涏法相当。但需注意，不同的棉签材质，可能会吸附待测物质。 |
|
Q3. |
若唾液样品的检测效果不好，应如何解决？ |
|
A3. |
使用粘稠的唾液可能会无法得到预期的检测值。这时，可先将采集的唾液进行冻融，去除粘蛋白等不溶物，然后使用离心分离（例如：1500×g，15 min）后的上清液作为样品进行检测。 |
|
Q4. |
检测小鼠脑匀浆时推荐使用何种提取Buffer？ |
|
A4. |
请使用添加了Protease Inhibitor的RIPA Buffer。为了避免Buffer中表面活性剂成分的影响，请使用试剂盒随附的Buffer稀释2倍以上后使用。 |
|
Q5. |
请问各样品的推荐稀释倍率是多少？ |
| A5. |
稀释倍率的标准如下所示。实验前，请在标准曲线范围内选择合适的稀释倍率。 |
|
样品 |
稀释倍率 |
|
小鼠血清和血浆 |
4倍 |
|
小鼠脑匀浆 |
2~320倍 |
|
大鼠血清 |
50倍(标准) |
|
大鼠血浆 |
30倍(标准) |
|
人血清 |
10~800倍(标准) |
|
人血浆 |
10~80倍(标准) |
|
人唾液 |
2~8倍 |
◆关于本试剂盒
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Q1. |
使用本产品进行检测时需要哪些器具和设备？ |
|
A1. |
● 纯净水（蒸馏水） ● 标准溶液/样品稀释用试管 ● 清洗液稀释用玻璃器皿（量筒、烧杯） ● 可更换吸头的移液器（可准确吸取10 µL和200-500 µL的一次性吸头） ● 多道移液器（可连续分液100 µL） ● 纸巾等吸水性材料（擦拭清洗后微孔板上残留的液体） ● 混合振荡器（Vortex型） ● 微孔板振荡器（约600～800 rpm） ● 96孔板用洗板机（建议使用）或洗瓶 ● 96孔板用读取器（发光检测用） ● 数据处理软件 |
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Q2. |
试剂盒中的抗体可单独购买吗？ |
|
A2. |
不可以。 |
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Q3. |
试剂盒可以拆分使用吗？ |
|
A3. |
可以。试剂盒使用了8联排可拆卸酶标板，并配有足够标准品。但拆分使用时，每次都需要绘制标准曲线，因此可检测的样品数量会减少。 单次使用 → 40个样品（80孔）*标准品占用16孔 分两次使用 → 32 个样品（64 孔） *标准品占用32孔
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