α-突触核蛋白聚集检测试剂盒 
(ALPHA)-Synuclein Aggregation Assay Kit    

　　α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟在路易体痴呆、帕金森病、多系统萎缩中发现的细胞内α-突触核蛋白聚集。

　　本试剂盒可用于在细胞培养水平上，检测目标活性物质对细胞聚集的抑制和/或预防作用。

◆背景 　　 痴呆症是导致记忆和辨别能力退化的疾病，还没有根治的方法。经过多年的科学研究证实，许多神经变性病（包括痴呆症）的大脑退化部位会发生蛋白凝聚，表明这种聚集的出现与这些疾病的发生和发展密切相关。 正常蛋白形式因特定原因形成异常结构并在细胞中积累时，会发生蛋白聚集，每种疾病有不同的聚集蛋白。目前已知在帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩病人脑内，α-突触核蛋白结构形成异常结构。 α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模拟细胞内“α-突触核蛋白”的聚集情况，可用于在体外筛选活性成分。

◆试剂盒组成

组成	容量	规格	保存
pCMV-SNCA（α – Synuclein 表达质粒，红盖） （浓度1.25 μg/μL）	32 μL	1 小瓶	4°C 不冻结
pCMV-NC（阴性对照，绿盖） （浓度1.25 μg/μL）	5 μL	1 小瓶
pCMV-dGFP（dGFP 表达质粒，蓝盖） （浓度1.25 μg/μL）	5 μL	1 小瓶
20 mM Tris-HCl Buffer（pH 7.4）	10 mL	1 瓶
F-αSyn（α – Synuclein 纤维，黄盖） （浓度1 μg/μL）	32 μL	1 小瓶
Multifectam（基因转染试剂）	0.33 mg	1 瓶

◆检测流程

◆实例

一  免疫印迹法 Western blotting（使用各种突触核蛋白抗体）

1、除去培养基。

2、每个孔添加 1 mL PBS，用移液器收集细胞。

3、离心（4,500 rpm [1，800 x g]，5 分钟，室温），收集沉淀。

4、添加 0.1 mL 裂解缓冲液（10 mM Tris-HCl，pH 7.5 含 0.8 M NaCl，1 mM乙二醇双（2-胺基乙基醚）-N，N，N，N-四乙酸（EGTA）, 

　  1 mM DTT 和 1% N-月桂酰肌氨酸钠）, 超声波混合。

5、离心（50,000 rpm [100,000 x g]，20 分钟，室温）。

6、添加 40 µL 2 x SDS Buffer（0.125 M Tris-HCl pH6.8，200 mM 1,4二硫苏糖醇（DTT），4% 十二烷基硫酸钠（SDS），10%蔗糖，

　  0.01% BPB）至颗粒中，超声波混合，加热 (100 °C，5 分钟)，进行 10 µL/well 的免疫印迹。

突触核蛋白抗体详情请点击此处。

二  淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒

　　使用淀粉样蛋白/物质荧光染色试剂盒（Cosmo Bio，产品编号：CSR-SYN02-COS），可对已发生聚集的α-突触核蛋白和核仁进行双重染色。

阴性对照载体（pCMV-NC）
相位图	核染色	突触核蛋白聚集
使用α-突触核蛋白（pCMV-SNCA+F-α Syn）
相位图	核染色	突触核蛋白聚集

仅用于研究。不得用于人类基因治疗或临床诊断。

α-突触核蛋白聚集检测试剂盒

参考文献

　Nonaka T. et al. J Biol Chem. 2010 Nov 5;285(45):34885-98.