乙型肝炎病毒特异性检测

HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒

◆HBsAgGi HBs抗原的糖链异构体

本产品是针对M-HBs的O型糖链修饰的PreS2的单克隆抗体，可特异性识别含有DNA的传染性病毒颗粒。

 

关于乙肝肝炎病毒及HBsAgGi

乙型肝炎病毒（HBV）作为一个全球性的健康问题，是传染性最强的病毒之一。

HBV包膜蛋白由三种表面抗原S-、M-和L-HBs组成，它们由含有PreS1、PreS2和S-结构域的HBsAg基因产生¹。 HBsAg被 N-聚糖和 O-聚糖高度糖基化^2,3。全聚糖结构分析显示，PreS2结构域中，只有在M-HBs上含有基因型C (gC) 中所包含的高度保守的O-糖基化位点，而L-HBs上却没有^4,5。

HBsAgGi，是能与HBsAg的糖链异构体相结合的重组单抗，其使用含有O型糖链的PreS2糖肽制备所得。与传统的识别所有病毒颗粒的HBsAg检测相比，HBsAgGi抗体可以特异性识别传染性HBV颗粒（DNA病毒粒子）。

 

产品信息

HBsAgGi Recombinant mouse IgG1, 50μg

产品编号	635-54381
对应基因分型	Genotype C
同种型（isotype）	小鼠IgG1
轻链	Kappa(κ)   型
包装	50   μg
用途	1.WB   2.HBV颗粒的免疫沉淀/分离   3.ELISA   4.HBV感染抑制测定   5.免疫组化
保存方法	短期请保存于4℃，长期请保存于-20℃，避免冻融。

HBsAgGi可特异性识别HBV颗粒中的M-HBsAg

HBV由衣壳蛋白质（HBsAg），HBV核心，HBV DNA组成。HBsAg的基因由PreS1（蓝），PreS2（红），S（黑）三个领域组成。S-HBsAgs约一半都被N型糖链所修饰，其余不含糖链。而M-HBsAg的PreS2结构域被O型糖链高度修饰，但L-HBsAg在同一位点却几乎不会被修饰。S-HBsAg存在数量最多，非传染性颗粒大部分由S-HBsAg所构成。而传染性HBV颗粒内核含有HBV DNA，被由所有类型的HBsAg所形成的衣壳所包裹。HBsAgGi可特异性的识别在乙肝分型c型M-HbsAg中所特有的O型糖链修饰PreS2领域。

HBsAgGi与基于S抗体的HBV颗粒识别

HBV患者的血清中含有的HBV DNA的传染性颗粒比非传染性颗粒要多得多。抗S抗体会对包括非传染性颗粒在内的所有HBV颗粒进行识别，而相比之下，HBsAgGi由于是识别含有M-HBsAg的传染性HBV颗粒，因此HBsAgGi检测不同于S抗体检测，可更准确地识别HBV患者。

在HBV感染患者的血清中，大部分（超过99.9%）的HBV颗粒是亚病毒颗粒（SVP），主要是S-HBs。相比之下，感染性颗粒（DNA 病毒粒子）在整个 HBV颗粒中含量比例不到0.1%。HBsAgGi可以从众多HBV颗粒中，高效区分含DNA颗粒的糖肽结构（粉色标记）。

HBsAgGi 和其他检测HBV的标志物对比

下表对HBV标志物进行了对比。qHBsAg和HBV-DNA是传统标志物，而HBcrAg和 HBV-RNA是新型标志物。列于表中的是目标HBV颗粒或分子。〇代表标志物可检测的颗粒或分子，×代表无法识别此标志物，或不推荐使用。

HBsAgGi 可检测含有 M-HBsAg 的颗粒，例如 DNA 或 RNA 病毒粒子。

应用实例

使用 HBsAgGi（左）和 PreS2（右）抗体进行Western Blot

・左: HBsAgGi-gC (RCA-001)，右: anti-PreS2 antibody   ・Lane1: S-HBs (CHO) 50 ng   ・Lane2: M-HBs (HEK293) 50 ng   ・Lane3: L-HBs (yeast) 50 ng   ・Lane4: serum (HBV patient) 1 μg   ・二抗: HRP-labeled anti-mouse IgG

HBsAgGi-gC（左）可以检测出M-HBs但不能检测L-HBs。而市售的PreS2抗体（右）对L-HBs的识别能力很强，对M-HBs的识别能力很弱。在HBV患者的人血清中，HBsAgGi-gC特异性识别M-HBs，而PreS2抗体识别M-HBs和L-HBs。

使用HBsAgGi-gC 包被的ELISA板 (RCEK-001) 和重组M-HBsAg 作为标准品进行ELISA法检测

・标准品: M-HBs (3.7 900 ng/mL)   ・检测样品: HBV患者血清 (2 µL)   ・血清 #1: HBsAg 6610 IU/mL, HBV DNA 3.1   ・血清 #2: HBsAg 8612 IU/mL, HBV DNA 0   ・血清 #3: HBsAg 36600 IU/mL, HBV DNA 8.3   ・检测：生物素化 HBsAgGi-gC 抗体和 HRP 标记的链霉亲和素

ELISA板用HBsAgGi-gC包被，用HEK293细胞中表达的M-HBs制备标准曲线。HBV患者的血清(#1-3)经稀释（100 µL中含有2 µL血清）并在同一ELISA板上进行测量。HBsAgGi-gC也可以检测NUC处理后的血清样本(HBV DNA=0)。

使用 HBsAgGi-gC 进行免疫沉淀

・原始样品: HBV 患者血清 (4.1 logIU/20 μL)   ・免疫沉淀条件：生物素化 HBsAgGi-gC (RCA-001) 2 μg，   ・链霉亲和素偶联磁珠10 μL/1 mL TBS-T, 4°C, 16 hours   ・HBV DNA 的定量：通过实时 PCR 检测20 μL 沉淀部分    ・(免疫沉淀) 和上清部分 (Sup) 中的 HBV DNA。

将HBV颗粒稀释至1 mL (4.1 logIU/20 μL) 并通过HBsAgGi-gC沉淀。在这种情况下，HBsAgGi-gC可以收集含有HBV DNA的HBV颗粒。

◆HBsAg糖链异构体检测用HBsAgGi ELISA试剂盒

本ELISA试剂盒含有可检测M-HBs的O型糖链糖基化修饰PreS2的单抗，可检测含有DNA的病毒颗粒。

试剂盒规格

产品编号	638-54371
对应基因分型	Genotype C
包装	96 Test

组成

HBsAgGi 包被96孔板：96 孔 (8孔板×12)
M-HBsAg标准品 (1 mL)	HRP标记HBsAgGi (10 mL)
稀释液 (24 mL)	TMB底物 (11 mL)
20X 洗涤液 (50 mL)	终止液   (12 mL)

ELISA使用方法

步骤1：HBV DNA颗粒首先被HBsAgGi抗体捕获。

步骤2：洗涤后，ELISA微孔上捕获的HBV颗粒将与HRP标记的HBsAgGi抗体进一步反应。

步骤3：进一步洗涤后，将HRP底物（TMB底物）加入孔中。孵育后，停止反应并测量450nm处的吸光度数值。

标准曲线

将试剂盒中所包含的标准品 M-HbsAg（800ng/mL）梯度稀释，调整为标准M-HBsAg（6.25～400ng/mL）溶液，制作标准曲线。

使用HBsAgGi ELISA试剂盒进行血清中HBsAgGi检测   检测样本：HBV患者3名的血清（1 µL），每个样本分别进行6次实验 标准M-HBsAgs (6.25 – 400 ng/mL)

样品	qHBsAg (IU/mL)	HBsAgGi (µg/mL)	CV (%)
血清 #1	2100	4.5	2.52
血清 #2	8200	8.92	2.65
血清 #3	2200	11.04	1.82

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

相关资料

HBsAgGi ELISA Kit说明书

Q&A

◆HBsAgGi抗体

Q1：关于HBsAgGi抗体的分子量

A1：HBsAgGi抗体是小鼠IgG的重组蛋白。分子量为重链约50 kDa，轻链约25 kDa。

Q2：HBsAgGi抗体与PreS2抗体的特异性有多大的差异？

A2：首先PreS2结构域的随HBV基因型不同，其氨基酸序列也会有差异，因此对于PreS2抗体与HBsAgGi抗体特异性的差异，需要根据PreS2抗体识

A2：别的具体序列来决定。

A2：一个重要的点是HBsAgGi抗体可以识别PreS2中包含O型糖链的部分，这是其他PreS2抗体所做不到的。就下图为例，图里比较了HBsAgGi与

A2：同样识别基因C型的PreS2抗体。HBsAgGi抗体能识别含有O型糖链的M-HBs，相对的此PreS2抗体虽然无法识别包含O型糖链的PreS2结构

A2：域，但能够识别不含O型糖链的PreS2，因此检测出了L-HBs。

Q3：上图中的Lane3的L-HBs也具有糖链，为何没有被检测出？

A3：图中的L-HBsAg（Lane3）是酵母菌生产的L-HBsAg，因为它不含O型糖链，因此不会被HBsAgGi检测到。根据以下随附参考文献的数据，在

A2：分析混合血清分样本后，发现M-HBs的PreS2结构域90%以上都被O型糖链所修饰，而L-HBs的PreS2结构域的O型糖链修饰率则在10%以下

A2：（参考文献Fig.1A）。因此实际在检测HBV微粒时，M-HBsAg会最为强烈地被检测出（参考文献Fig.5A）。

*图中的Anti-Glyco-PS2即为HBsAgGi抗体

Q4：对于HBV研究中时常出现的假阳性或假阴性结果，HBsAgGi抗体是否也容易出现同样的结果？有方法回避吗？

A4：HBV研究中出现假阳性的理由一般是由于使用的抗体大多是识别S结构域的“a”determinant。这类抗体可以识别多种基因型，但也因此特异

A2：性被认为有不足。关于假阴性，有文献指出“a”determinant中发生氨基酸置换的部分大多会有糖链修饰导致抗体无法识别。

A2：相对的，HBsAgGi抗体可以识别蛋白质上的糖链修饰，因此我们认为它较识别蛋白质部分结构的普通抗体具有更高的特异性。实际实验数据也

A2：表明HBsAgGi只识别基因C型，不会识别其他A型，B型和D型的M-HBs（参考文献Fig.4A）。

A2：此外，对于导致假阴性的主要原因，也就是“a”determinant中发生的变异，也被认为不会影响到HBsAgGi抗体的检测结果。

A2：因此，对于S结构域抗体的假阳性与假阴性问题，可以通过使用只识别S结构域所含O型糖链的HBsAgGi抗体来回避。

参考文献：Angata et al. (2021) Biochim Biophys Acta Gen Subj. 1866:130020

参考文献

1. Schadler and Hildt (2009) Viruses 1:185-209.

2. Schmitt et al. (2004) J Gen Virol 85:2045-2053.

3. Dobrica et al. (2020) Cells 9:1404.

4. Wagatsuma et al. (2018) Anal Chem 90:10196-10203.

5. Angata et al. (2021) Biochim Biophys Acta Gen Subj.  1866:130020  全文