SARS-CoV-2 N501Y Mutation Detection Kit

SARS-CoV-2 N501Y 突变检测试剂盒

◆试剂盒组成

供20次反应用
RT Enzyme Mix (20×) RT 酶混合物（20x）	20 µL x 1支
One-Step Reaction Mix (2×) 一步反应混合物（2×）	200 μL x 2支
501N Wild type Primer/Probe (Probe:FAM) 501N 野生型引物＆探针混合物（探针：FAM）	10 µL x 1支
N501Y Mutant Type   Primer/Probe (Probe:FAM) N501Y 突变型引物＆探针混合物（探针：FAM）	10 µL x 1支
供200次反应用
RT Enzyme Mix (20×) RT 酶混合物（20x）	200 µL x 1支
One-Step Reaction Mix (2×) 一步反应混合物（2×）	1 mL x 2支
501N Wild type Primer/Probe (Probe:FAM) 501N 野生型引物＆探针混合物（探针：FAM）	100 µL x 1支
N501Y Mutant Type   Primer/Probe (Probe:FAM) N501Y 突变型引物＆探针混合物（探针：FAM）	100 µL x 1支

◆背景

新冠病毒突变株在世界范围内不断扩散，感染人数也在不断增多。如Alpha (B.1.1.7)、Beta (B.1.351) 和 Gamma (P.1) 突变株都有着N501位点的突变，与常规毒株相比，具有更强的感染性。

※ Alpha (B.1.1.7)：英国最先检测出的突变株

       Beta (B.1.351)：南非最先检测出的突变株

       Gamma (P.1)：巴西最先检测出的突变株

通过FUJIFILM Wako研发的Primer技术，可以高灵敏度检测难以检测的基因点突变。本试剂盒可以快速、简便地检测N501Y突变。

◆特点

●      判定容易

    使用突变株与常规株（无突变）的Primer/Probe （引物/探针）套装，通过比较Ct值进行判定

●      使用一步法RT-qPCR，快速检测突变

    约70 min即可完成

●      使用FUJIFILM Wako研发的Primer/Probe（引物/探针）套装，高灵敏度检测突变

●      所有突变株可在相同反应条件下进行检测

     由于N501Y、E484K、L452R、E484Q的PCR反应条件相同，因此可在同一块96孔板中进行检测。

 

◆检测原理

采用TaqMan^® 探针的One Step RT-qPCR法进行检测。

利用FUJIFILM Wako开发的Primer引物技术，高灵敏度检测点突变。

▼使用前 病毒RNA量较多时，在突变株中使用常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Primer/Probe”，也可以观察到扩增信号。 务必使用常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Primer/Probe”和突变株检测用的“N501Y Mutant Type Primer/Probe”两种试剂进行检测。 比较两种试剂的Ct值，若突变株检测用“N501Y Mutant Type Primer/Probe”的Ct值小，则可判断病毒为N501Y突变株。

◆突变株的检测应用数据

本试剂盒已检测出以下4种新冠病毒（SARS-CoV-2）株。

● Alpha (B.1.1.7)突变株（QHN001、N501Y突变，由国立感染症研究所提供）

● Beta (B.1.351)突变株（TY8-612、N501Y突变、E484K突变，由国立感染症研究所提供）

● Gamma (P.1)突变株（TY7-501、N501Y突变、E484K突变，由国立感染症研究所提供）

● VR-1986HK（N501Y无突变、E484K无突变 ATCC)

拷贝数：5000、500、50copies/Well 3种

循环数：45

 

①  Alpha (B.1.1.7)突变株：QHN001（N501Y突变）

	5,000 copies	500 copies	50 copies
Alpha型 （含N501Y突变）

对于含有N501Y突变的alpha (B.1.1.7)突变株，利用突变株检测用“N501Y Mutant type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。另外，在常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime＆Probe”中未观察到扩增，由此判断为N501Y突变株。

②Beta (B.1.351)突变株：TY8-612（N501Y突变、E484K突变）

	5,000 copies	500 copies	50 copies
Beta型：TY8-612 （N501Y 突变，E484K 突变）

常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime/Probe”，在5,000 copies的条件下可观察到轻微的扩增信号，但突变株的可以在更低Ct值下检测到，由此判断为N501Y突变株。在复制500 copies和50 copies的条件下，未检测到常规株（非突变）的扩增信号。

③Gamma (P.1)突变株：TY7-501（N501Y突变、E484K突变）