细菌、真菌高灵敏度检测试剂

SLP-HS Single Reagent Set II

◆原理

蚕（Bombyx mori）的体液内存在着被称为酚氧化酶前体（ProPO）级联的生物防御机制，通过与肽聚糖（PG）以及（1→3）-β-D-葡聚糖（β-葡聚糖）反应，最终使酚氧化酶前体（ProPO）活性化为酚氧化酶（PO）。目前已阐明的PO的活化机制是包含多种丝氨酸蛋白酶活化的级联机制。目前认为该级联机制在异物入侵昆虫体内时所观察到的黑色素形成现象起着重要的作用。

本SLP试剂采用蚕的体液经无菌提取、制备而成的冻干试剂，包含酚氧化酶级联中全部的因子。本试剂通过被肽聚糖以及β-葡聚糖所活化，从而氧化反应底物DOPA（L-3,4-二羟基苯丙氨酸），最终生成黑色素。由于大多数细菌的细胞壁存在肽聚糖、β-葡聚糖也存在于多种真菌的细胞壁中，因此利用生成的黑色素作为指标，可检测出细菌、真菌。

SLP试剂的活性化机制如图1所示。肽聚糖或β-葡聚糖分别与其识别蛋白（PGRP与βGRP）结合，引发酚氧化酶级联，最终使PO活化。活性化后的PO可氧化底物中的DOPA，最终生成黑色素。

 图1.  蚕血酚氧化酶前体级联反应

 

肽聚糖不仅存在于革兰氏阳性菌，也存在于革兰氏阴性菌中。不管是阳性还是阴性的革兰氏菌，SLP试剂对一般细菌均产生反应。此外，SLP试剂也会对真菌来源的β-葡聚糖起反应，因此SLP试剂可作用于细菌、真菌类的微生物。

SLP试剂虽然会对来源于各类细菌的肽聚糖和带有β-1,3-糖苷键的β-葡聚糖产生强烈反应，但几乎不与作为革兰氏阴性菌细胞壁成分的脂多糖（内毒素）发生反应。能被LAL试剂（鲎试剂）检测出的内毒素不会使SLP的级联机制活化，而SLP试剂能检测无法被鲎试剂检测出的肽聚糖。因此联合鲎试剂与SLP试剂一起使用，可对检测材料中的微生物种类进行预测。

◆特点

 

●　配合内毒素检测仪Toxinometer^®，可准确、高灵敏度地定量肽聚糖和β-葡聚糖

 

◆应用实例

●　检测医药制品、生物制剂、基因工程制品等中的细菌、真菌。

●　检测人工透析液，防止被微生物污染

●　作为水质污染的指标

●　用于肽聚糖相关的构效关系、生物合成、代谢、病因生成的研究；

●　用于昆虫生物防御反应机制的研究

 

◆试剂盒组成

1. SLP-HS Reagent II　　　　　 0.1 mL用×20瓶

灵敏度：10 pg/mL（肽聚糖），1 pg / mL（β-葡聚糖）

2. SLP-Diluent（SLP溶解液）　　5 mL×2瓶

3. Standard（标准溶液）　　　　0.5 mL×1瓶

※　来源于Staphyrococcus aureus的可溶性肽聚糖标准品，用于细菌检测。

※　如需进行真菌检测，可另行购买凝胶多糖标准品（产品编号：030-09903）

◆测定方法

通过使用内毒素检测仪Toxinometer^®，可定量检测肽聚糖以及β-葡聚糖

内毒素检测仪Toxinometer^® 可检测由SLP试剂活化生成的色素所引发的吸光度的变化，当吸光度达到预设的阈值时的反应时间被称为活化时间（Ta）。Ta可作为SLP活化物质（肽聚糖、β-葡聚糖）的定量指标。检测原理请见图2，使用内毒素检测仪Toxinometer^® 的测定示例请见图3。

图2. 检测原理

利用Toxinometer^® 测量从反应开始到吸光度R(t)到达预设阈值（Rth）时的反应时间（Ta），利用不同浓度的肽聚糖、β-葡聚糖对应不同的Ta值来进行定量。

       

图3. 内毒素检测仪Toxinometer^® 的测定示例

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