球状体·细胞透明化试剂

SCALEVIEW^®-S4

SCALEVIEW^®-S是组织透明化试剂。可通过使用SCALEVIEW^®-S0 – SCALEVIEW^®-SMt等六种产品进行组织透明化处理。

其中，可单独使用SCALEVIEW^®-S4透明化球状体或细胞。只需将目标样品浸入SCALEVIEW^®-S4即可。

◆特点

●　只需浸泡即可实现简单透明化

●　透明化耗时短（1日左右）

●　不需要特殊的设备

●　可配合荧光抗体标记和荧光素观察

◆T47D细胞球状体观察实例

Data by Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

图1. SCALEVIEW^®-S4透明化T47D细胞球体的图像示例（细胞核使用Hoechst染色）^4）。

       使用共聚焦显微镜Z-堆叠获得的球状体图像。

图2. T47D细胞球状体经诺考达唑处理后，使用组蛋白H3抗体的测量实例。

       通过SCALEVIEW^®-S4的透明化处理，可观察药物施用对球状体表面和内部的影响。

◆操作步骤图示

◆SCALEVIEW^®-S4 Neurosphere的观察实例

数据提供：

国立研究开发法人理化学研究所

脑神经科学研究中心细胞技能探索技术研究组/ 光量子工学研究中心生命光学技术研究组 滨裕先生、星田哲志先生、宫脇敦史先生

协助：olympus 株式会社

Neurosphere的观察实例

（※试剂使用量推荐前处理和透明化均为各试剂：1.2 mL。※荧光抗体标记基于AbScale方案。）

固定	前处理
灌注固定+固定 4%PFA/PBS(-) 【pH 7.6-7.8】	前处理1 SCALEVIEW®-S0	透明处理1 SCALEVIEW®-A2	透明处理2 8 M Urea Solution	透明处理3    SCALEVIEW®-A2	洗净 deScale Solution
4 ℃, 3 day	37 ℃, 4 hr	37 ℃, 4 hr	37 ℃, 12 hr	37 ℃, 4 hr	4 ℃, 6 hr

荧光抗体标记					透明化	观察
Blocking 1% Blocking Reagent(Roche)/     PBS(-)	抗体标记【例：标记Iba1抗体】 AbScale Solution	洗净 AbScale Solution	再固定 4% PFA/PBS(-)【pH 7.6-7.8】	洗净  deScale Solution	透明化  SCALEVIEW®-S4 37 ℃，4 hr	固定 SCALEVIEW®-S4 摇动1小时后固定*
室温，2 hr	37 ℃, >1 day	室温,   2 hr ×1、 1 hr ×1	室温，1 hr	4 ℃，3 hr	37 ℃，4 hr	室温

*透明化后，使用1.5％（wt / vol）琼脂糖嵌入并固定。

成年大鼠海马神经干细胞神经球状体的三维免疫荧光　　—使用AbScale法—

参考文献

1)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3)　Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4)　Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).

◆产品信息

产品编号	产品名称	规格	包装
194-18561	SCALEVIEW-S4 SCALEVIEW-S4组织透明化试剂	组织透明化用	250 mL

◆相关产品

产品编号	产品名称	规格	包装
193-18455	SCALEVIEW-A2 SCALEVIEW® 组织透明化试剂A2	组织透明化用	500 mL
196-18521	SCALEVIEW-S0 SCALEVIEW® 组织透明化试剂S0	组织透明化用	250 mL
041-34425	deScale Solution 透明化洗涤溶液	组织透明化用	500 mL
294-35631	See Through Chamber, 0.3mm thick 透明室，0.3mm厚	组织透明化用	10 set
291-35641	See Through Chamber, 0.5mm thick 透明室，0.5mm厚	组织透明化用	10 set
295-35661	See Through Chamber, 1.0mm thick 透明室，1.0mm厚	组织透明化用	10 set
292-35671	See Through Chamber, 2.0mm thick 透明室，2.0mm厚	组织透明化用	10 set
299-35681	See Through Chamber, 3.0mm thick 透明室，3.0mm厚	组织透明化用	10 set

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

相关资料

透明化试剂方法选择流程

组织透明化试剂Q&A ver1.0

Tissue clearing reagent Q&A ver1.0

Q：组织透明化的原则

Ａ：组织透明化通常是按下面的步骤进行的：

Ａ：（a）固定 （b）透化 （c）脱色 （d）折射率匹配

 

Q：组织透明化的优势

Ａ：目前大多数可用的透明化技术，都是通过编码荧光报告蛋白或者用荧光标记抗体进行后标记，从而可视化组织中特定的蛋白。组织透明化成为

Ａ：了具有单细胞分辨率的组织3D成像中重要的一环。

 

Q：透明化技术的比较

Ａ：下面是水性的透明化技术。

Ａ：SeeDB（基于果糖的方法）在一些应用中有一定优势。因为SeeDB不含去垢剂，所以对于透明化DiI（细胞膜红色荧光探针，一种神经示踪剂）

Ａ：标记的样品和使用光电关联显微镜（CLEM）的情况下，SeeDB有着一定优势。另外SeeDB会产生自体荧光，有时候会对辨认未标记的神经元

Ａ：结构（如神经毡）起着一定帮助。

Ａ：SeeDB2是为使用高NA物镜的高分辨率成像而优化的技术，因此，当处理较大的组织时，CLARITY或者CUBIC会是更好的选择。

 

Q：切片厚度的最大值和最小值？

Ａ：您应该根据您的物镜的WD（工作距离）来决定切片的厚度。我们建议切片的厚度不要超过3mm。对于十分薄且脆弱的样品，我们建议使用琼

Ａ：脂糖包埋。

Ａ：使用CUBIC，可以让全器官、全身透明化和使用LSFM的快速3D成像具有可重复性。

 

Q：试剂盒成分

Ａ：具体如下：

Ａ：1. SCALEVIEW-S试剂盒（299-79001）适用于20份 1-2 mm 的切片样品

Ａ：Ａ：1）　SCALEVIEW-S0——100 mL

Ａ：Ａ：2）　SCALEVIEW-S1——100 mL

Ａ：Ａ：3）　SCALEVIEW-S2——100 mL

Ａ：Ａ：4）　SCALEVIEW-S3——100 mL

Ａ：Ａ：5）　SCALEVIEW-S4——100 mL

Ａ：Ａ：6）　SCALEVIEW-SMT——100 mL

 

Ａ：2. SCALEVIEW-S试剂盒（290-80801）适用于20-30份 1-2 mm 的切片样品。

Ａ：Ａ：1）　SCaleCUBIC-1 Solution——250 mL

Ａ：Ａ：2）　SCaleCUBIC-2 Solution——250 mL

Ａ：Ａ：3）　Mounting Solution 1——40 mL

Ａ：Ａ：4）　Mounting Solution 2——40 mL

 

Ａ：3. SeeDB试剂盒（299-79901）适用于20-30份 1-2 mm 的切片样品。

Ａ：Ａ：1）　SeeDB：20w/v% Fructose Solution——50 mL

Ａ：Ａ：2）　SeeDB：40w/v% Fructose Solution——50 mL

Ａ：Ａ：3）　SeeDB：60w/v% Fructose Solution——50 mL

Ａ：Ａ：4）　SeeDB：80w/v% Fructose Solution——50 mL

Ａ：Ａ：5）　SeeDB：100w/v% Fructose Solution——50 mL

Ａ：Ａ：6）　SeeDB——50 mL

 

Ａ：4. SeeDB2试剂盒（294-80701）适用于20-30份 1-2 mm 的切片样品。

Ａ：Ａ：1）　Saponin（皂角苷）——5g

Ａ：Ａ：2）　SeeDB2G solution——50mL

Ａ：Ａ：3）　SeeDB2S solution——50mL

Ａ：Ａ：4）　PBS——50mL

 

Q：样品的保存

Ａ：SCALEVIEW-S处理的样品应在室温下保存2~3周。您可以在2~3周内观察SCALEVIEW-S透明化的样品中的荧光信号。

Ａ：CUBIC处理的样品应在室温下保存1周。您可以在1周内观察CUBIC透明化的样品中的荧光信号。

Ａ：SeeDB2G处理的样品应在冰箱中保存1年，而SeeDB2S处理的样品则可在室温下保存1年。您可以在1年内观察SeeDB透明化的样品中的荧光

Ａ：信号。

 

Q：抗体的荧光标记

Ａ：应在进行透明化前就进行抗体的荧光标记。

 

Q：适用于SCALEVIEW-S的显微镜

Ａ：SD-OSR（Olympus）

Ａ：FV-OSR（Olympus）

 

Q：适用于CUBIC的显微镜

Ａ：SD-OSR（Olympus）

Ａ：FV-OSR（Olympus）

Ａ：Zeiss Lightsheet Z.1（Carl Zeiss）

 

Q：适用于SeeDB2的显微镜

Ａ：Confocal（最好使用高NA的油浸镜头）

Ａ：STED（Leica Microsystems）

Ａ：SR-SIM（Carl Zeiss）

Ａ：SD-OSR（Olympus）

Ａ：FV-OSR（Olympus）

Ａ：Airyscan（Carl Zeiss）

Ａ：HyVolution（Leica Microsystems）

Ａ：Two-photon（最好使用复合浸没镜头）

Ａ：Confocal（最好使用高NA的甘油浸镜头）

Ａ：Light-sheet DLS（Leica，最好使用定制镜面的设备）

 

Q：重构

Ａ：对于定量用途，我们建议使用Neurolucida系统（MBF）。我们同样测试了VAST Lite用于成像用途时的表现。重构时也可以使用开源软件。

Ａ：例如，Vaa3d可以处理大量的拼接图像的数据。

 

Q：物镜推荐

 

Q：其他物种？其他器官？

Ａ：对于昆虫样品和鱼类样品，建议选择CUBIC。

Ａ：昆虫相关文献：Ohuma.et al.: Fish Pathology, 52(2), 96(2017).

Ａ：鱼类相关文献：Konno and S.Okazaki .: Zoological Letters, 4:13(2018).

   

　　对于多细胞球状体，选择SCALEVIEW-S会更好。

　　https://www.nature.com/articles/s41598-018-29169-0

 

参考文献

1)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

2)　Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 18, 1518(2015).

3)　Hama H, et al. : Protocol Exchange (2016), doi:10.1038/protex.2016.019

4)　Molly E, Boutin, et al. : Scientific Reports, 8, 11135 (2018).