MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS

适用于自动提取设备的高通量细胞外囊泡/外泌体分离纯化试剂盒

外泌体等细胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）不仅参与排放生物体内的废弃物，同时也是细胞间的通信媒介。根据分泌的细胞不同，EV的特性及其内含物（核酸、蛋白质、脂质等）也有所差异，目前正在尝试将参与疾病的细胞来源EV及其内含物作为生物标记应用于“液体活检”，即通过体液样品诊断疾病。

为实现液体活检的开发和应用，需要从大量的样品中高效地分离和纯化EV。但超速离心法等传统方法单次可处理的样品数有限，从多个样品中分离和纯化EV需要花费庞大的人力和物力。

因此，FUJIFILM Wako开发了EV分离纯化用试剂盒MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS，适用于提取核酸和蛋白质的自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。本试剂盒采用与金泽大学的华山教授共同开发的EV分离纯化技术“PS亲和法”^1），配合自动提取设备，可同时分离和纯化高纯度且低损伤EV的样品上限为96份。

◆产品概要

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS是使用PS亲和法分离和纯化细胞外囊泡（EV）的试剂盒，适用于自动提取设备（如Thermo Fisher Scientific公司的KingFisher™ Flex等）。由于可从多达96份样品中分离和纯化EV，因此也适用于利用EV进行生物标记的探索和高通量筛选 (High-throughput screening，HTS) 。

特点   ● 配合自动提取设备，同时可分离和纯化EV的样品上限为96份   ● 使用自行研发的分离纯化技术“PS亲和法”，可分离高纯度且低损伤       的EV。

适用样品（示例）               ● 细胞培养上清               ● 血清               ● 血浆               ● 尿液               ● 唾液

适用自动提取设备（分离成果经FUJIFILM Wako验证的设备）

● KingFisher™ Flex（Thermo Fisher Scientific等）

与手动款试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）的区别

比较本试剂盒与手动分离纯化试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2, 产品编号：290-84103），两者的区别如下表所示。另，EV的回收效率基本持平。（参考“性能数据”）

	自动提取 （MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS）	手动提取 （MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）
Tim4和磁珠的结合方法	直接与磁珠结合     （无需磁珠与Tim4结合的步骤）	通过生物素-亲和素系统与磁珠结合     （需要磁珠与Tim4结合的步骤）
洗脱缓冲液中的表面活性剂浓度	高 （抑制了磁珠的损耗）	低
洗脱缓冲液中的EDTA浓度	高 （减少了洗脱步骤的次数）	低

◆原理

PS亲和法是FUJIFILM Wako研发的EV分离方法，使用了与存在于EV表面的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合的Tim4。

通过PS-Tim4结合的高特异性和螯合剂，可在完整状态下温和地洗脱高纯度EV。

特异性结合

洗脱

◆实验方案

使用KingFisher™ Flex分离纯化EV（进行从亲和反应到洗脱一系列过程时）

※将亲和反应和洗脱步骤作为单独的程序分别进行，并使用新的tip comb进行洗脱，可能可以减少样品中的杂质。更多信息请参阅使用说明书。

实验方案的详细内容和设置示例请查阅使用说明书。

◆数据

与手动试剂盒（MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2）比较的性能数据

通过NTA，比较分离的粒子数

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (Auto，自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (Manual，手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。通过Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)确认EV的粒子数

【结果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的粒子数。

通过ELISA，比较分离的粒子数

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)，从血清、肝素血浆、尿液、细胞培养上清（COLO201）中分离和纯化EV。然后使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP) （产品编号：298-80601）确认EV的回收率。

【结果】

MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒获得了相同程度的回收率。

通过蛋白质组学分析，比较分离的蛋白质种类、蛋白量

使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS (自动提取)和MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (手动提取)分离和纯化EV。蛋白质组学分析回收的EV溶液。

（1）鉴定的蛋白质种类

【结果】

在4次实验中，MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS与手动试剂盒相比，鉴定的蛋白质数量始终更多、再现性更高。

（2）EV标记蛋白质的量

【结果】

分别使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS和手动试剂盒进行分离的EV中所含的EV标记蛋白质之间并无显著差异，自动化对EV的回收率没有影响。

（3）非EV标记的量（以白蛋白为例）

【结果】

与手动试剂盒相比，使用MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS纯化分离的非EV标记物白蛋白量更少，表明可回收杂质更少的EV。

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参考文献

1） Nakai, W. et al.: Sci. Rep. 6(1), 1(2016).

      A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles