上海金畔生物科技有限公司代理UELANDY荧光染料全系系列产品
YF®594 Click-iT EdU成像试剂盒(红色荧光)
产品货号: C6017S/C6017M/C6017L/C6017XL
产品规格: 20T/100T/500T/1000T
目录价(元):212/811/1621/2653
推荐仪器:荧光显微镜
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产品概述:
产品内容
组分 | 20T | 100T | 500T | 1000T | 保存温度 | 稳定性 |
A. 10 mM EdU | 40 µL | 0.2 mL | 1 mL | 2× 1 mL | -20℃ | 按指定温度保 存可有效放置 一年 |
B. YF® 488/555/594/647A Azide | 4 µL | 20 µL | 100 µL | 200 µL | -20℃,避光 | |
C. 10× Click-iT EdU 反应缓冲液 2 | 200 µL | 1 mL | 5 mL | 10 mL | 2-8℃ | |
D. CuSO4 | 100 µL | 0.5 mL | 2× 1.25 mL | 5 mL | 2-8℃ | |
E. Click-iT EdU 缓冲液添加物 | 6 mg | 30 mg | 150 mg | 2 × 150 mg | 2-8℃ | |
F. Hoechst 33342 | 5 µL | 25 µL | 125 µL | 250 µL | 2-8℃ |
储存条件
-20℃避光保存,有效期见外包装。开封后,保存温度详见说明书。
产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是 BrdU 法。EdU 法检测试剂盒是 BrdU 法的革命性突破。EdU (5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)是一种嘧啶类似物,在 DNA 合成期整合入 DNA 双链。EdU 法检测基于“点击”反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应,形成共价键。
本试剂盒中,EdU 含有炔烃,YF®488/555/647A Azide 染料含有叠氮化合物。点击法的 EdU 标记增殖快速有效,易于使用。BrdU 方法需要 DNA 变性(如酸变性、热变性或者用 DNase 消化)暴露出 BrdU,从而方便 BrdU 抗体结合;而 EdU 法只需标准化的多聚甲醛固定和 Triton X-100 促渗就可以使检测试剂进入细胞,只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的 EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分,可以用于体外培养细胞的增殖检测。
说明书:
UE-C6017S/C6017M/C6017L/C6017XL
常见问题解答:
◆YF®488/555/594/647有什么区别?
主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同,可根据偏好或需求进行选择。
◆EdU试剂盒中,固定后3% BSA in PBS的作用是什么?
清洗步骤中,BSA可以终止掉未反应的甲醛。
◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测?
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记,但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗?检测顺序是什么?
本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,故染色后无法直接检测GFP,建议使用GFP抗体间接检测。
◆观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性,生物体内几乎不可能有副反应发生,所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时,也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照,以排除自发荧光干扰。此外,您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应,验证Click反应信号的特异性。
◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低?如何提高信号?
1.请保证试剂使用时为无色的状态,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
2.为确保Click反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透;
3.由于铜离子能结合到部分试剂上,这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),对某些含有这些物质的实验样品来说,进行Click反应前,可能需要增加额外的洗涤步骤;
4.当铜离子在合适的化合价时,Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。
◆如何对细胞核进行复染?
试剂盒中配有Hoechst 33342,可以在Click反应后用于细胞核的染色,也可选择使用DAPI。
◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?
可以。EdU是小分子,可以穿透植物细胞的细胞壁。
使用本产品的文献:
参考文献
1.Labeling and Tracking of Mesenchymal Stem Cells with EdU
应用方向:细胞标记示踪
2.Primary cilia control hedgehog signaling during muscle differentiation and are deregulated in rhabdomyosarcoma
应用方向:动物细胞增殖分析
3.Silencing of STRN4 suppresses the malignant characteristics of cancer cells
应用方向:动物细胞增殖检测
4.A rapid and robust assay for detection of S-phase cell cycle progression in plant cells and tissUEs by using ethynyl deoxyuridine
应用方向:植物细胞增殖检测
5.A rapid non-radioactive techniqUE for measurement of repair synthesis in primary human fibroblasts by incorporation of ethynyl deoxyuridine (EdU)
应用方向:DNA损伤修复
6.Visualization of Mitochondrial DNA Replication in Individual Cells by EdU Signal Amplification
应用方向:线粒体活性检测
7.Human cytomegalovirus UL44 concentrates at the periphery of replication compartments, the site of viral DNA synthesis
应用方向:病毒活性检测