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小鼠白细胞介素12 ELISA试剂盒（Mouse IL-12/23(P40) ELISA KIT）

产品货号: M6142S/M6142M/M6142L

产品规格: 24T/48T/96T

目录价（元）:952/1587/2698

推荐仪器：酶标仪

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产品概述：
储存条件
4℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。

注：终止液和显色剂具有腐蚀性，一旦接触到液体，请尽快用大量清水冲洗。

产品介绍
Mouse IL-12/23 (p40) ELISA Kit (Mouse Interleukin-12/23 (p40) Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠白细胞介素 12 ELISA 试剂盒，可以定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的天然和重组 IL-12/23 (p40)浓度。
白细胞介素 12，也称为自然杀伤细胞刺激因子或细胞毒性淋巴细胞成熟因子，是一种多效性细胞因子，主要由活化的巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞产生，有致炎作用和免疫调节作用。
IL-12 的是由二硫键相连异源二聚体，70 kDa (p70)的异二聚体糖蛋白由 40 kDa (p40)和 35 kDa (p35)两个亚基组成。p40 和 p35 亚基没有 IL-12 的活性，但 p40 同型二聚体可与 IL-12 的受体结合，是 IL-12 的拮抗剂。IL-12 等电点为 pH4.5-5.5。小鼠 IL-12 P35 有 193 个氨基酸残基，与人 IL-12 P35 有 66％同源性，小鼠 P40 有 313 个氨基酸残基与人 P40 有 70％同源性。鼠 IL-12 对人类和小鼠细胞均有活性，人IL-12 作用有种属特异性，人 IL-12 对小鼠细胞作用甚微。IL-12 的生物学功能包括体外效应和体内效应。体外效应：IL-12 能诱导 PHA 刺激的 T 细胞增殖。IL-12 能增加 CD56 ＋NK 细胞的活性；诱导 NK 细胞或 PBMC 增殖和产生 LAK 活性，增加 NK 细胞表达表面分子；促进 NK 细胞产生 IFN-γ 和 TNF-α（TGF-β和 IL-10 抑制该效应）。IL-12 在 BCG 和 LPS 诱导的小鼠炎性休克所致的死亡中起重要作用。IL-12 通过诱导 TNF-α和 IFN-γ，抑制骨髓造血。IL-12 还有抗血管生成作用。体内效应：将 IL-12 输入动物体内可以增强 NK 细胞的杀伤活性、增加 IFN-γ分泌、启动造血细胞大量生成、增强异体排斥反应并可能介导抗肿瘤效应。IL-12 在某些 Th1 介导的自身免疫疾病中起重要作用。IL-12 诱导动物脾肿大，其中含有大量造血细胞，红细胞系、髓样细胞系和巨核细胞系都增加。IL-2 抑制骨髓造血的作用可能与诱导 NK 细胞产生 IFN-γ等有关。在小鼠肿瘤模型中，IL-12 的抗肿瘤作用依赖 IFN-γ的增加，且与 IL-2、IFN-α以及一些化学治疗药物有协同抗肿瘤作用。IL-12 发挥生物学效应所需的细胞因子浓度很低(≤pM)， 与合适剂量 IL-2 联合应用可降低 IL-2 用量，同时提高 CTL、NK、LAK 的杀伤活性，因此 IL-12 可能成为一种新的抗肿瘤生物制剂。
本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法检测样品中小鼠 IL-12/23 (p40)浓度。在小鼠 IL-12/23 (p40)单克隆抗体预包被酶标板中加入适度稀释的样品和标准品，其中的 IL-12/23 (p40)会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗小鼠 IL-12/23 (p40)抗体，抗小鼠 IL-12/23 (p40)抗体与结合在单抗上的小鼠 IL-12/23 (p40)结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂，若反应孔中有 IL-12/23 (p40)，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂出现蓝色；加终止液变为黄色。在 450 nm 下测 OD 值，小鼠 IL-12/23 (p40)浓度与 OD 450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠 IL-12/23 (p40)浓度。

说明书：

 UE-M6142S/M6142M/M6142L    
常见问题解答：

◆背景信号强是什么原因？
1.洗板不充分。将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保孔区域洗涤充分；确保已在洗涤前弃去所有残留抗体溶液；增加洗涤次数。
2.链亲和素-HRP结合物过量。检查偶联物的稀释度，在推荐的稀释度下使用。
3.封闭不充分。检查封闭液；延长封闭时间。
4.孵育时间过长。缩短孵育时间。
5.样品或标准品中含干扰物质。设置对照。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。

◆没有信号？
1.试剂添加顺序错误或试剂配制不正确。重复实验；检查试剂配制方法；复核试验试剂添加流程。
2.HRP被叠氮化合物污染。使用新鲜配制的试剂。
3.抗体用量不足。检查是否使用了推荐的抗体量；增加抗体用量（浓度）。
4.使用了含胎牛血清的缓冲液复溶抗体。检查使用的试剂。
5.捕获抗体与板结合较差。使用ELISA板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
6.缓冲液受污染。新鲜配置缓冲液。

◆整块板呈现规则蓝色？
1.洗板不充分或跳过洗涤步骤未去除残留的非结合过氧化物酶。严格按照说明书洗涤流程操作。
2.底物溶液预混太早不新鲜。底物溶液混合后须立即使用。
3.封板胶纸或试剂储液槽重复使用导致HRP残留污染。每步均需使用新的封板胶纸或试剂储液槽。
4.缓冲液有金属或HRP污染。新鲜配置缓冲液。

◆标准曲线差？
1.链亲和素-HRP结合物量不足。检查倍性稀释是否正确。
2.捕获抗体与板结合较差。使用酶标板，而非组织培养板；使用不含其他杂蛋白的PBS溶解抗体。
3.检测抗体量不足。检查稀释度是否正确。
4.孵育时间不足。延长底物溶液孵育时间。
5.实验操作流程有误。严格按照说明书操作流程。
6.标准曲线稀释计算错误。重新计算制作新的标准曲线。