在细菌发酵过程中，质粒的稳定性备受关注。由于目的蛋白的过度表达往往增加了宿主菌的负担，其生长速度显著低于空载菌株。因此绝大多数表达载体中插入了抗生素抗性基因作为筛选标记，发酵过程中通过大量使用抗生素来避免空载菌株的生长。但是蛋白产品中抗生素的残留经常会引起机体过敏反应，而且抗性基因的广泛使用导致环境中越来越多的耐药菌株的出现。在日益增加的监管要求下，生物制药和工业生产领域中的蛋白表，对抗生素的零痕量的要求将越来越高，因此非抗生素筛选系统的使用已成为生物制药企业的必然趋势。
Delphi genetics的Staby™技术是一种毒素-抗毒素系统(toxin-antitoxin system，TA系统)，巧妙地在宿主细胞染色体和表达载体中分别引入毒素基因ccdB和抗毒素基因ccdA。在缺乏抗毒素蛋白ccdA的情况下，细菌染色体上的ccdB基因编码100aa左右的稳定的毒素蛋白ccdB，使细胞内促旋酶中毒，从而干扰DNA的合成，杀伤宿主细胞。而质粒中引入的ccdA基因编码90aa的不稳定的蛋白，可与染色体上ccdB基因启动子结合，从而抑制毒素蛋白的表达。
StabyExpress™技术结合了T7表达元件与Delphi独有的TA系统，可应用于涉及细菌发酵的任何工业级蛋白质生产工艺。该技术符合FDA和EMEA对人/畜用蛋白药物生产工艺必须消除抗生素耐药基因的要求。研究表明，StabyExpress技术可大幅提升重组蛋白质工业级生产的产量。StabyExpress™专利技术已于2009年、2010年分别全球较大的人用疫苗研发与生产企业法国赛诺菲巴斯德（赛诺菲-安万特旗下的疫苗公司）、全球较大的制药集团美国GSK投入使用。
StabyExpress™ T7蛋白表达系统（StabyExpress™ T7 kit）内包含了目的基因的克隆及其在E.coli中表达的所有试剂。其中有两项技术：T7表达元件以及Delphi独有的质粒稳定性控制技术，这样就保证了蛋白产物的高效高产量的表达以及操作的标准化。
使用可实现目的基因的克隆操作以及下游目的蛋白的表达。
试剂盒组份
(1) pStaby vector DNA,
(2) CYS21 competent bacteria for cloning,
(3) SE1 competent bacteria for expression,
(4) regeneration medium,
(5) sequencing primers,
(6) expression control,
(7) instruction manual.
感受态细胞可以单独购买，均有电转化和化学转化2种类型的产品可以选择，电转效率要明显高于化学转化。
产品优势
(1)克服质粒不稳定性。
(2)更高的表达量，3-7倍。
(3)降低目的蛋白之外的蛋白背景。
(4)不需要使用抗生素。
(5)T7启动子，便于替换原T7启动的表达系统。
操作步骤
1. 将目的基因克隆入pStaby1.2载体。
2. 转化CYS21获得正确的构建(不建议直接转化表达菌株，因为表达菌株中T7及目的蛋白的本底表达将显著降低质粒提取效率)。
3. 重组质粒转化SE1菌株。
4. 诱导表达（IPTG诱导表达，由于StabyExpress™系统可显著降低菌体蛋白的表达，对T7 RNA聚合酶或目的蛋白的表达没有任何改变，因此可直接使用原有的T7诱导条件进行表达，或直接使用Delphi提供的Staby™ Switch medium进行小量表达）
相关产品信息
| 货号 |
品名 |
规格 |
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GE-SET7-0505 |
StabyExpress T7 expression kit, electro-competent cells |
5 RXN |
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GE-SET7-0707 |
T7 expression kit, chemically-competent cells |
5 RXN |
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GE-SET7-1010 |
T7 expression kit, electro-competent cells |
10 RXN |
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GE-SET7-1212 |
StabyExpress T7 expression kit, chemically-competent cells |
10 RXN |
|
GE-SET7-1111 |
10×50μl cloning and 10×50μl expression bacteria, electro-competent cells |
10 RXN |
|
GE-SET7-1313 |
10×100μl cloning and 10×100μl expression bacteria, chemically-competent cells |
10 RXN |
|
GE-SET7-2020 |
StabyExpress T7 expression kit, electro-competent cells |
20 RXN |
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GE-SET7-2222 |
StabyExpress T7 expression kit, chemically-competent cells |
20 RXN |
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GE-SET7-0020 |
20×50μl cloning and 20×50μl expression bacteria, electro-competent cells |
20 RXN |
|
GE-SET7-0022 |
20×100μl cloning and 20×100μl expression bacteria, chemically-competent cells |
20 RXN |
上海金畔生物科技有限公司作为Delphi中国大陆以及香港和澳门地区的独家代理，全面供应其所有产品，包括StabyCloning™ PCR克隆系统（StabyCloning™ kit）、StabyExpress™ T7蛋白表达系统（StabyExpress™ T7 kit）、Cherry™ 蛋白表达系统（Cherry™ Express/Codon kit）、StabyCodon™ T7蛋白表达系统（StabyCodon™ T7 kit）、GetStaby™ kit以及相关感受态细胞（Competent Cells）。欢迎致电021-50837765或021-63599871了解更多产品信息以及专利相关事宜。